人低分化結(jié)腸癌SW480細(xì)胞內(nèi)、外液中醋酸甲羥孕酮含量分析

封玉玲，陳 杰，苗加偉，賴國(guó)旗，賈爽爽，李 晶*

(1.重慶三峽醫(yī)藥高等專科學(xué)校病理學(xué)教研室，重慶404120;2.重慶醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，重慶400016;3.重慶市婦幼保健院婦科，重慶404000)

結(jié)腸癌(colon cancer)好發(fā)于直腸與乙狀結(jié)腸交界處，發(fā)病率占胃腸道腫瘤第3 位。醋酸甲羥孕酮(medroxyprogesterone acetate，MPA)用于臨床治療乳腺癌及其他激素依賴性腫瘤［1］，但目前尚無(wú)研究關(guān)于MPA 在細(xì)胞內(nèi)、外液濃度分布的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)構(gòu)建反相高效液相色譜法(RPHPLC)分析低分化人結(jié)腸癌SW480 細(xì)胞內(nèi)、外液MPA 含量，為研究其誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡與藥物在細(xì)胞間分布關(guān)系提供一種技術(shù)，也可作為研究同類激素藥物代謝動(dòng)力學(xué)的方法。

1 材料與方法

1.1 材料:LC-10AT 型高效液相色譜儀(日本島津公司)、醋酸甲羥孕酮(MPA，Sigma 公司)、SW480 人結(jié)腸癌細(xì)胞(中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究所)。

1.2 方法:常規(guī)培養(yǎng)人低分化結(jié)腸癌SW480 細(xì)胞，分為加藥處理組和不加藥處理組。

加藥處理組為SW480 細(xì)胞中分別加入25、50 和75 μmol/L MPA(共3 組，每組10 份)，24 和48 h 后終止培養(yǎng)。加藥組的培養(yǎng)液混入乙腈(1∶2，v/v)，渦旋1 min，4 ℃，15 000 r/min 離心15 min，吸取上清液2 mL 于離心管，氮?dú)獯蹈桑瑥?fù)溶，轉(zhuǎn)移至平底塑料管，獲SW480 細(xì)胞胞外液;接著裂解SW480 細(xì)胞，同法處理獲細(xì)胞內(nèi)液樣品。

不加藥組培養(yǎng)48 h 后，同上法獲空白樣品內(nèi)、外液。MPA 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1.0 mmol/L)分別稀釋SW480 空白細(xì)胞內(nèi)、外液配置標(biāo)準(zhǔn)系列，制備獲得2、5、10、20、50、100 和200 μmol/L的標(biāo)準(zhǔn)液。進(jìn)樣高效液相色譜儀，以MPA 峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)，MPA 濃度(X)為橫坐標(biāo)，直線回歸制作空白SW480 細(xì)胞內(nèi)液、外液標(biāo)準(zhǔn)曲線。

色譜分析條件。色譜柱:安捷倫C18 柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇∶水=70∶30(v/v);流速:1 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):243 nm;進(jìn)樣:20 μL;柱溫:室溫。……