糖尿病大鼠早期近端腎小管葡萄糖轉運蛋白2表達增高

王衛娜，栗 亮，范小琴，高 原*

(1.遵義醫學院珠海校區生理學教研室，廣東珠海519090;2.南陽醫學高等專科學校生理學教研室，河南南陽473000;3.棗莊職業學院醫學院基礎醫學教研室，山東棗莊277800)

糖尿病腎病是1 型和2 型糖尿病的主要慢性并發癥之一，糖尿病腎病的發生及發展中氧化應激等多種因素起重要作用。葡萄糖轉運蛋白(glucose protein 2，GLUT2)受到人們的重視，也是因為他可能在糖尿病腎病的發生發展中起著重要作用［1］。本實驗探討GLUT2 在實驗性糖尿病大鼠早期腎臟中的變化。

1 材料與方法

1.1 實驗材料及動物與分組:清潔級雄性SD 大鼠:清潔級，體質量(200 ±15)g，中山大學動物實驗中心提供，合格證號SCXK(粵)2007-0011，隨機分為對照組和常規復制糖尿病模型。材料:STZ(Sigma 公司)，兔抗大鼠GLUT2 多克隆抗體(ABSUN 公司)，BCA 蛋白濃度測定試劑盒(碧云天生物技術研究所)，Mouse anti.ACTIN 單克隆抗體(PTGLAB公司)。

1.2 實驗方法

1.2.1 腎小管刷狀緣膜(BBMV)的制備:在1、2、4、6 周末處死動物取腎，用4 ℃的0.9%氯化鈉注射液沖洗干凈，取其皮質，稱重后剪碎;按照重量加入稀釋液1，倒入手動勻漿器并加入蛋白酶抑制劑后勻漿;加入1 mol/L MgCl2，使其終濃度為10 mmol/L。混勻后0 ℃放置20 min。在4 ℃2 500 ×g離心30 min，取上清液;在4 ℃16 500 ×g 離心60 min保留沉淀，用介質2 充分懸浮后在4 ℃16 500 ×g 離心60 min;保留沉淀，即為腎小管上皮細胞刷狀緣膜，凍存于－80 ℃深低溫冰箱，用Bradford 法測定蛋白濃度保證上樣濃度的一致性。

1.2.2 腎臟GLUT2 表達的檢測:分別以免疫組化和Western blot 法檢測GLUT2 蛋白，實驗過程按說明書操作。

1.3 統計學分析

采用SPSS18.0 軟件進行統計分析，計量資料用均數±標準差(±s)表示，多組間比較采用方差分析，兩兩組間比較采用LSD-t 檢驗。……