腹腔注射低濃度四氯化碳建立小鼠肝纖維化模型

李少華，邱 玲，程歆琦，李 霽，杜順達，毛一雷

(1.中山大學腫瘤防治中心肝膽科華南腫瘤學國家重點實驗室腫瘤醫學協同創新中心，廣東廣州510060;中國醫學科學院北京協和醫學院北京協和醫院2.肝臟外科;3.檢驗科;4.病理科，北京100733)

在中國患肝炎病后，肝纖維化、硬化、肝癌高發［1］。建立肝纖維化動物模型，有利于進行病理過程的研究。四氯化碳(carbon tetrachloride，CCl4)導致肝微粒體脂質過氧化，肝脂肪變性、進而纖維化。常規采用高濃度CCl4建模型，對動物選擇性強，同時因給藥劑量高，動物死亡率高。本實驗采用低濃度CCl4、反復腹腔注射，希望建立一套簡便可行的小鼠肝纖維化建模方法。

1 材料與方法

1.1 材料:SPF 級6～7 周齡雌性昆明小鼠42 只，體質量19～25 g［北京維通利華實驗動物技術有限公司:SCXK(京)2001-0011］。10% CCl4油溶液(分析純CCl4∶大豆油=1∶9)。

1.2 方法:小鼠分籠飼養于北京協和醫學院動物中心，適應1 周。小鼠隨機分成3 組:對照組(n=10):每48 h 腹腔注射0.4 mL 0.9%氯化鈉注射液;正常組(n=5):正常飼養;肝纖維化組(n=27):每48 h 腹腔注射0.4 mL 10% CCl4油溶液。共42 d。

觀察小鼠進食、活動和存活等情況;每6 天測量體質量。實驗42 d 眼眶取血，檢驗血清學指標:總蛋白(total protein，TP)、白蛋白(albumin，ALB)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)、血葡萄糖(glucose，Glu)、血鈉離子(natrium，Na)等。之后開腹觀察腹腔、肝臟;取全肝予甲醛固定，切片染色后鏡檢。

2 結果

2.1 一般情況:3 組小鼠進食相似。肝纖維化組在實驗第2周時較活躍，第4 周開始出現腹部脹大、活動減少、反應遲鈍，42 d 可見腹部明顯膨隆，活動遲緩。各組小鼠體質量隨實驗天數增加而增加，無統計學差異。

纖維化組小鼠共死亡7 只(25.9%):實驗第2 天4 只，尸檢無明顯異常;第16、18 天各1 只，腹腔內少量腹水;第38天1 只，腹腔大量淡黃色腹水，肝表面小結節增生，并覆乳白色纖維條索。……