SUMO化修飾對(duì)高糖誘導(dǎo)的大鼠腎系膜細(xì)胞IκB/NF-κB信號(hào)的影響

黃 煒，徐 玲，徐 勇，周雪琴，彭 娟

(瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科，四川瀘州646000)

糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病特有而常見的微血管并發(fā)癥，其發(fā)病機(jī)制不清。研究表明，以單核-巨噬細(xì)胞激活為特征的慢性亞臨床炎性反應(yīng)貫穿于DN 發(fā)生發(fā)展始終，腎小球系膜細(xì)胞在此病理過(guò)程中扮演著重要角色［1］。

核因子κB(nuclear factor-κB，NF-κB)信號(hào)是目前公認(rèn)的介導(dǎo)炎性反應(yīng)的主要信號(hào)通路。IκBα 的磷酸化、繼而泛素化降解是NF-κB 信號(hào)激活的關(guān)鍵步驟［2］。SUMO 化修飾是與泛素化類似的蛋白質(zhì)翻譯后修飾形式，最近的研究顯示，SUMO 化修飾也參與了對(duì)NF-κB 信號(hào)通路的調(diào)節(jié)［3］。SUMO 化修飾能否通過(guò)影響IκBα 的泛素化降解、激活，NF-κB 信號(hào)參與DN 的發(fā)病尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。為此，本研究觀察高糖刺激后大鼠腎系膜細(xì)胞SUMO 蛋白與IκBα 蛋白的相互作用，以及IκBα、NF-κB P65 的表達(dá)，旨在探討SUMO 化修飾在DN 發(fā)病中的作用，為DN 的防治提供新理論。

1 材料與方法

1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料

大鼠腎小球系膜細(xì)胞(HBZY-1，中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心);兔抗大鼠SUMO1 單克隆抗體(Abcam 公司);兔抗大鼠SUMO2/3 多克隆抗體(Millipore 公司);小鼠抗大鼠IκBα 單克隆抗體和兔抗大鼠、NF-κB P65 單克隆抗體(Cell Signaling Technology 公司)和兔抗大鼠α-Tubulin 單克隆抗體(Abcam 公司)，小鼠抗大鼠GAPDH 抗體(碧云天生物技術(shù)有限公司)，免疫共沉淀(Co-IP)試劑盒(Pierce 公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)分組:HBZY-1 細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)于含10%小牛血清的低糖DMEM 中，培養(yǎng)條件為37 ℃、5% CO2。對(duì)數(shù)增殖期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)，隨機(jī)分設(shè)1)對(duì)照組(NC 組):低糖(含葡萄糖5.6 mmol/L)培養(yǎng)基;2)高糖干預(yù)組(HG1、HG2 和HG3 組):培養(yǎng)基分別含葡萄糖10、20 和30 mmol/L;3)滲透壓對(duì)照組(OP 組):培養(yǎng)基含5.6 mmol/L 葡萄糖和24.4 mmol/L 甘露醇;4)MG132 干預(yù)組:培養(yǎng)基含30 mmol/L 葡萄糖和1 μmol/L MG132;分別作用6、12、24、48 和72 h 后收獲細(xì)胞。……