CDMP1轉基因間充質干細胞片修復兔軟骨缺損

崔 穎，姚 梅，胡 晶，李俊霞，王 宇，張 本

(遼寧醫學院附屬第一醫院耳鼻咽喉科，遼寧錦州121000)

創傷與疾病引起的軟骨缺損的修復是臨床耳鼻咽喉頭頸外科及骨科醫師所面臨的難題。組織工程技術被認為是目前解決軟骨缺損問題的有效手段。傳統的組織工程技術將種子細胞與支架材料復合構建工程化軟骨來修復軟骨缺損，但因其細胞利用率低、支架降解所帶來的纖維化和非特異性炎性反應限制了組織工程學的發展。細胞片技術(cell sheet technology，CST)利用溫控材料收獲培養的細胞片，避免了酶的消化作用，保留了大量的連接蛋白和生長因子，通過重疊構建出多層立體組織細胞片，其結構更加類似于天然軟骨，在心肌、角膜和口腔黏膜等多學科領域已得到廣泛應用［1-3］，但在軟骨重建方面的探索甚少，且對于轉基因細胞片的研究尤為罕見。本研究擬從基因水平和蛋白水平探討軟骨源性形態發生蛋白-1(cartilage derived morphogenetic protein-1，CDMP1)轉基因細胞片修復兔軟骨缺損的能力。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與試劑

新西蘭大白兔2.0～3.0 kg，雌雄不限(遼寧醫學院動物實驗中心提供)。L-DMEM 培養基(Gibco公司);胎牛血清(Hyclone 公司);重組hCDMP1 腺病毒液(賽業生物科技，廣州);溫度敏感性培養皿(Nunc 公司);PLL 和胰蛋白酶(Sigma 公司);SYBR Primx Ex Taq Ⅱ實時染料試劑盒、PAGE 級純化的引物、PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser 反轉錄試劑盒和蛋白質Marker(大連寶生物有限公司);兔抗人CDMP1 多克隆抗體和兔抗人Ⅱ型膠原多克隆抗體(Abcam 公司);RIPA 裂解液(強)、PMSF 和Tween-20(碧云天生物技術研究所);免疫組化試劑盒(中山金橋公司)。

1.2 方法

1.2.1 骨髓間充……