鈣釋放激活鈣通道調節分子1促進結腸癌細胞系SW480的增殖

康清杰，向 征*，彭旭東，王 強，湯為學

(重慶醫科大學附屬第一醫院1.胃腸外科;2.實驗研究中心，重慶400016)

Ca2+作為細胞中重要的第二信使，對細胞的增殖、遷移和基因表達等有重要作用，在細胞的轉化過程中，Ca2+相關的胞內信息傳遞會有不正常的活化現象，其在腫瘤細胞的增殖失控過程中發揮了重要作用［1］。胞膜蛋白鈣釋放激活鈣通道調節分子1(calcium release-activated calcium channel modulator 1)是鈣庫調控鈣通道(store-operated calcium channels，SOCC)的重要組成蛋白，它通過與基質相互作用分子1(Stromal interaction molecule 1，STIM1)相互作用，激活SOCC，引起細胞外Ca2+內流形成SOCE(store-operated Ca2+entry)，進而調節胞內Ca2+的穩態［2］。研究表明，ORAI1 介導的SOCE 在異常狀態時與機體的多種疾病相關，比如在肝癌中，ORAI1 通過調節SOCE 強度，參與肝癌細胞的增殖［3］。但目前國內外對于ORAI1 與腫瘤的關系研究較少。本研究擬通過探討ORAI1 在SW480 增殖中的作用及可能的機制，為結腸癌的發生發展提供新的理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料和細胞系

人結腸癌細胞系SW480(重慶醫科大學附屬第一醫院腫瘤實驗室提供);干擾人ORAI1 基因的重組慢病毒(shRNA:CGTGCACAATCTCAACTCG)和空載體慢病毒(shRNA:TTCTCCGAACGTGTCACGT)(上海紐恩生物科技有限公司);Trizol、RT-PCR 試劑盒、SYBY 熒光定量試劑盒(大連TaKaRa 寶生生物工程有限公司);鈣離子熒光探針Rhod-2AM(AAT Bioquest);毒胡蘿卜素(thapsigargin，TG)、Nifedipine(Sigma 公司);兔抗人ORAI1 多克隆抗體、鼠抗人β-action 單克隆抗體、辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG 和羊抗鼠IgG(武漢三鷹生物技術有限公司);兔抗人ERK1/2、p-ERK1/2 多克隆抗體(Immunoway 公司);兔抗人CyclinD1 多克隆抗體(上海生工生物工程有限公司)。

1.2 實驗方法

1.2.1 細胞培養:細胞用含10%胎牛血清、5%青霉素-鏈霉素雙抗的RPMI-1640 培養基置于37 ℃、5% CO2培養箱中培養。

1.2.2 分組及慢病毒轉染:實驗設干擾組、空病毒組和對照組。……