規模豬場O型口蹄疫春秋兩防免疫抗體監測及野毒檢測

熊勝利龍清孟楊昌芬

1.貴州省種畜禽種質測定中心，貴陽 550018；2.貴州省東南州凱里市龍場鎮農業服務中心，貴州凱里 556007

規模豬場O型口蹄疫春秋兩防免疫抗體監測及野毒檢測

熊勝利1龍清孟1楊昌芬2

1.貴州省種畜禽種質測定中心，貴陽 550018；2.貴州省東南州凱里市龍場鎮農業服務中心，貴州凱里 556007

貴州省某規模豬場2013年春秋季兩防后，對基礎母豬群、基礎公豬群和育成豬群（保育豬群、哺乳仔豬群均按滾動免疫程序執行免疫，不參與春秋兩防）3個豬群進行隨機抽樣采集血清樣本，O型口蹄疫春防滿4個月時采樣345頭份、滿6個月時采樣295頭份，秋防滿3個月時采樣318頭份，共計958頭份；采用間接血凝試驗進行口蹄疫免疫抗體監測，用NS單抗競爭ELISA檢測口蹄疫野毒感染抗體。結果表明該場口蹄疫秋防滿3個月時口蹄疫免疫抗體合格率為75.2%，其中母豬群合格率為83.0%、公豬群合格率為86.7%、育成群合格率為70.4%，只有公豬群與母豬群的抗體合格率達到了農業部要求的標準（大于等于75%）。而春防口蹄疫疫苗免疫后4個月時，抗體水平已下降，抗體合格率低于60%；到6個月時，抗體合格率低于40%，均未達到農業部規定的標準。所有血清樣品中均未檢測出口蹄疫野毒感染。

O型口蹄疫疫苗；春秋兩防；免疫抗體；野毒感染；檢測分析

養豬主要疾病有口蹄疫、豬瘟、豬藍耳病、豬偽狂犬病、豬丹毒、豬肺疫、豬傳染性胸膜肺炎、豬萎縮性鼻炎等，其中豬瘟和口蹄疫被世界動物衛生組織（OIE）列為A類傳染病，被我國農業部列為一類動物疫病，是養豬場的強制免疫項目。口蹄疫（foot and mouth disease，FMD）是由口蹄疫病毒（foot and mouth disease virus，FMDV）引起偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，臨床上以口腔黏膜、舌

面、鼻鏡、蹄部、乳房皮膚發生水泡和潰爛為特征。由于該病的發生會造成嚴重的經濟損失和政治影響，因此受到世界各國政府的高度重視。貴州省某規模豬場在春秋兩防時跟蹤抽樣檢測口蹄疫抗體水平及野毒感染情況，監測報告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗時間及地點

春防豬O型口蹄疫時間為2013年3月4日，7月4日抽樣采血345頭份，7月5日做抗體及野毒檢測；9月4日抽樣采血298頭份，9月5日做抗體及野毒檢測。秋防豬O型口蹄疫時間為2013年9月10日，12月10日抽樣采血318頭份，12月11日做抗體及野毒檢測。

試驗地點為貴州省某規模豬場。

1.2 檢測試劑

豬口蹄疫NS單抗競爭ELISA檢測試劑盒，購自農業部獸醫診斷中心；豬O型口蹄疫抗體檢測試劑盒，購自中國農業科學院蘭州獸醫研究所。

1.3 儀器設備

微量移液器（0.1～10.0 μL、10～100 μL、100～1 000 μL），購自芬蘭；八道微量移液器（100 μL、300 μL），購自芬蘭；37℃避光孵育箱、自動蒸餾水器（SYZ-A型）、自動洗板系統及酶標儀（AC100-120），購自上海亞榮生化儀器廠；微量振蕩器（MM-1型），購自江蘇醫療儀器廠；高速冷凍離心機，購自德國Sigma公司。

1.4 免疫接種

認知行為護理作為一種新型的護理模式，以患者為中心，對患者的日常行為進行評估，針對患者的飲食和生活行為進行糾正和干預。進而提高患者的治療依從性，保障治療效果，降低疾病進展風險。同時通過改變患者錯誤理念，糾正負面情緒，醫患間建立相互信任、相互支持的良好關系，提高協作有效性，讓患者在心理上對健康的生活方式加以肯定。

1）接種疫苗。豬O型口蹄疫滅活疫苗（濃縮苗，政府采購苗），購自中國農業科學院蘭州獸醫研究所。

2）免疫劑量及方式。后備母豬及種母豬接種劑量為4.0～4.5 mL/頭；后備公豬及種公豬接種劑量為4.5～5.5 mL/頭，育成豬接種劑量為3.5～4.0 mL/頭。免疫方式為頸部肌肉注射。

1.5 制備待檢血清

采用前腔靜脈法隨機抽樣采血，高速冷凍離心機分離制備血清，放入冰箱1～4℃保鮮層過夜，次日進行實驗室抗體及野毒檢測。

1.6 口蹄疫抗體檢測

1）在凝集試驗反應板中，每孔加入稀釋液50 μL，每個樣品加至第10孔。

2）在每排第一孔加入相應的待檢血清50 μL，然后依次作倍比稀釋，最后一孔棄去50 μL。每板均設陰、陽性對照及空白對照。

3）將診斷液搖勻，每孔加入25 μL，加液完畢后將反應板置振蕩器上2～4 min，取下反應板，蓋上一塊玻璃板，置30℃作用2 h后觀察結果。

結果判定：在滿足陽性對照血清效價不低于10log2、陰性對照血清和空白對照均為“—”的條件下，對待檢血清作出判定。抗體滴度≥7log2（或1∶27）時，判為合格；抗體滴度＜7log2時，判為不合格。為避免判斷誤差，對抗體滴度處于臨界值的血樣，均重復檢測1次。

1.7 用NS單抗競爭ELISA檢測口蹄疫野毒感染

1）操作步驟。取包被ELISA板記錄陰、陽性對照；加入陰性對照樣本原液（2孔）、陽性對照樣本原液（3孔）和已作處理的待檢血清各100 μL，混勻后貼膜，置37℃溫箱孵育30 min；用緩沖液重復洗滌5次后，分別加入酶結合物液100 μL，貼膜后置37℃溫箱孵育30 min；再重復洗滌5次，加入底物液A 50 μL，再加底物液B 50 μL，輕振混勻，置37℃溫箱避光顯色10 min，加入1.25 mol/L H2SO4終止液50 μL，輕振混勻后于酶標儀中在450 nm處進行檢測并記錄。

2）成立條件。陰性對照OD450平均值與陽性對照OD450平均值的差應大于等于0.6，同時陽性對照阻斷率均大于等于55%。阻斷率（lnh%）=（陰性對照OD450均值-待檢樣品OD450值）÷陰性對照OD450均值×100%。

3）結果判定。待檢樣品lnh%≥30%，判為FMDV-NS抗體陽性；20%≤待檢樣品lnh%＜30%，判為FMDV-NS抗體可疑；待檢樣品lnh%＜20%，判為FMDV-NS抗體陰性。

2 結果與分析

2.1 口蹄疫抗體監測結果

從表1可知，春防O型口蹄疫疫苗免疫4個月及6個月時，所檢測豬群的O型口蹄疫免疫抗體合格率分別為59.4%、39.7%，達不到農業部要求的合格標準（陽性率≥75%）。秋防O型口蹄疫疫苗免疫3個月時，母豬群、公豬群的抗體合格率均在80.0%及以上；而育成豬群的抗體合格率為70.4%，未達到農業部的要求，因此建議口蹄疫疫苗每間隔3個月免疫1次。

表1 該豬場春、秋兩防O型口蹄疫疫苗免疫抗體檢測結果

表2 該豬場豬口蹄疫感染抗體檢測結果

2.2 口蹄疫野毒感染檢測結果

從表2可知，在該規模養豬場的基礎母豬群、基礎公豬群和育成豬群中，均未檢測到口蹄疫野毒感染。

3 討論

預防口蹄疫的最有效手段是根據免疫程序定期進行免疫接種，因此規模化養豬場結合本場的實際情況科學合理地制定一套免疫程序是做好口蹄疫預防的關鍵。豬場科學免疫程序制定的有力依據是定期跟蹤不同豬群作抗體動態監測及口蹄疫野毒感染檢測，及時掌握不同時期不同豬群的抗體水平及健康狀況。對口蹄疫野毒攜帶者及時采取淘汰凈化處理；對抗體水平偏低的豬只，采取補免措施；對補免仍然不產生理想抗體水平的豬只，考慮先天感染或者出現免疫耐受，及時淘汰處理。另外，對豬群跟蹤做抗體動態監測的數據，還可作為豬場調整免疫程序的重要依據。

從該場抗體檢測的結果可知，該場豬群在免疫口蹄疫疫苗滿4個月時，其抗體水平已下降，總體合格率59.4%，已達不到農業部要求標準。可見，該場對O型口蹄疫疫苗采用每年春秋兩防各免疫一次的方案已經不適用。因此，建議基礎母豬群、基礎公豬群及育成豬群的口蹄疫疫苗每間隔3個月免疫1次。

2014-02-23

貴州省農業攻關項目（黔科合NY字[2012]3061號）

龍清孟

熊勝利，男，1967年生，本科，高級畜牧師。