PCNA在腺性膀胱炎中的表達及臨床意義

王 磊，王 煒，王 照，尹海軍*，徐學軍，高景宇

(1.河北醫科大學第一醫院泌尿外科，河北 石家莊 050031；2.河北省承德市疾病預防控制中心,河北 承德 067000)

增殖細胞核抗原(proliferative cell nuclear antigen，PCNA)是一種相對分子質量36 000的非組蛋白細胞核多肽，是DNA聚合酶δ的輔助蛋白，對DNA復制的調節起重要作用[1]。PCNA的陽性表達程度與腫瘤的增殖活性、轉移復發率及預后情況有顯著的相關性[2-3]，現已成為檢測腫瘤細胞增殖動力的有效指標。本研究應用免疫組織化學方法觀察PCNA在正常膀胱黏膜、腺性膀胱炎和膀胱移行細胞癌(bladder transitional cell carcinoma，BTCC)中的表達，以探討其在腺性膀胱炎中的表達及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 標本來源：采用河北醫科大學第一醫院2006—2009年人腺性膀胱炎標本30例，正常膀胱黏膜30例，膀胱移行細胞癌30例。所有標本均經病理證實。腺性膀胱炎標本均為術前活組織檢查標本，正常膀胱黏膜為活組織檢查標本，膀胱移行細胞癌標本為經尿道膀胱腫瘤電切術后及膀胱全切術后標本。術前未行任何治療。病理分級，G1級18例，G2級6例，G3級6例。臨床分期，Tis-T1(淺表性)21例，T2～T4(浸潤性)9例。

1.2 主要儀器及試劑：鼠抗人PCNA單克隆抗體(美國Santa Cruz公司產品)；辣根過氧化氫酶二氨基苯胺(diaminobenzidine,DAB)顯色試劑盒；SP試劑盒。以上產品購于河北博海生物工程開發有限公司。

1.3 PCNA免疫組織化學法：從所取標本上切取小于0.5cm×0.5cm×0.1cm的組織塊，用4%多聚甲醛固定，石蠟包埋。石蠟切片脫蠟至水后，1%甲醇雙氧水，室溫孵育10min，微波修復抗原，冷卻至室溫后，滴加正常山羊血清封閉液，室溫20min，甩去血清后滴加PCNA一抗，置4℃濕盒中過夜。0.01mol/L PBS沖洗3次×5min，滴加生物素化二抗37℃孵育20min。0.01mol/L PBS沖洗3次×5min，滴加辣根酶標記鏈霉卵白素工作液，37℃孵育20min。0.01mol/L PBS沖洗3次×5min，將DAB顯色試劑盒中顯色劑A、B、C各1滴加入1mL蒸餾水中，混勻，加至切片上，顯微鏡下控制顯色時間。每次實驗均設陰性對照，以PBS代替一抗。

1.4 PCNA染色判斷標準:PCNA以細胞核發現棕黃色為陽性信號。借助醫學真彩色計算機圖像分析系統，每張切片連續觀察10個高倍視野(400倍)，計算出各自的陽性細胞百分比。陽性細胞數<10%為陰性，陽性細胞數>10%為陽性。

1.5 統計學方法:應用SPSS13.0統計軟件進行數據處理，計數資料以百分率表示,組間比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

PCNA在正常膀胱黏膜無陽性表達，在腺性膀胱炎黏膜細胞核內見散在棕黃色陽性顆粒，在膀胱移行細胞癌細胞核內密布棕黃色陽性顆粒。腺性膀胱炎和膀胱移行癌PCNA表達陽性率均明顯高于正常膀胱黏膜，差異有統計學意義(P<0.05)；腺性膀胱炎PCNA表達陽性率明顯低于膀胱移行癌，差異無統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組PCNA陽性表達比較Table 1 Comparison of PCNA positive among three groups (n=30，n，%)

*P<0.05vsnormal tunica mucosa of bladder #P<0.05vscystitis glandularis specimens by χ2test

3 討 論

腺性膀胱炎是一種膀胱黏膜上皮增生性病變，組織學上膀胱黏膜固有層有柱狀上皮形成的腺樣結構(Brunn細胞巢)，并可見有黏液形成。固有層內有不同程度的充血、水腫和淋巴細胞、漿細胞浸潤。近年來隨著腔內泌尿外科的發展，臨床和病理醫師對本病的認識逐漸提高，腺性膀胱炎確診率有增高趨勢。關于腺性膀胱炎與膀胱腫瘤的關系，目前仍有爭論。一種觀點認為腺性膀胱炎是移行上皮的正常變異，與炎癥無關，亦非癌前病變[4]。而另一種觀點認為腺性膀胱炎是癌前病變，一些腺性膀胱炎最終會進展為腺癌[5]。

雖然，腺性膀胱炎(特別是腸上皮型)發展為膀胱腺癌的病例也時有報道[6-8]，但要證實腺性膀胱炎為膀胱腫瘤的癌前病變尚缺乏確切的證據。膀胱癌是我國泌尿系統發病率最高的惡性腫瘤，術后復發或轉移是導致治療失敗的常見原因，因此，研究腺性膀胱炎與膀胱移行細胞癌之間的關系，對于早期發現膀胱癌、降低術后復發或轉移，提高患者的生存率具有重要意義。

PCNA是真核生物復制復合體的核心成分，作為真核細胞DNA聚合酶δ的輔助蛋白，協調DNA的復制過程。同時，PCNA還作為功能轉換因子，通過不同調控方式與多種細胞因子作用，參與DNA損傷修復、細胞周期調控及凋亡等許多重要的細胞事件，且與腫瘤等細胞增殖性疾病的發生發展存在相關性[1]。在多種惡性腫瘤如腎癌、結腸癌、睪丸腫瘤、肝癌、喉癌、乳腺癌、甲狀腺癌等中，PCNA的表達明顯增高。在PCNA與膀胱腫瘤關系的研究中發現，PCNA在膀胱癌中有較高表達率，并且其表達與判斷預后的指標如腫瘤病理分級、臨床分期等也具有相關性：PCNA在膀胱良性病變中無表達或呈弱陽性表達；在膀胱癌中病理分級越高，分化程度越低，PCNA的表達也越強；發生浸潤、轉移的膀胱癌較表淺性膀胱癌的PCNA表達明顯增強；復發膀胱腫瘤的PCNA陽性細胞數高于未復發者。因此，PCNA的表達可作為判斷膀胱癌預后的指標之一[9-10]。

本研究觀察了PCNA在腺性膀胱炎中的表達情況，并與其在正常膀胱黏膜及膀胱移行細胞癌中的表達進行比較，以探討腺性膀胱炎與膀胱移行細胞癌的關系，以期為臨床上膀胱癌的早期發現與診斷提供依據。結果發現，PCNA在腺性膀胱炎的陽性表達率(46.7%)顯著高于正常膀胱黏膜PCNA的表達陽性率(0.0%)，但低于其在膀胱移行細胞癌中的表達陽性率(73.3%)。表明腺性膀胱炎是介于膀胱正常黏膜與膀胱移行細胞癌之間的一個階段，腺性膀胱炎中細胞的增殖活躍程度高于正常膀胱黏膜，但低于膀胱移行細胞癌，不能等同于癌癥，可又具有惡變潛能，PCNA的表達可能促進膀胱腫瘤的發生，提示腺性膀胱炎可能是癌前病變。PCNA可用于腺性膀胱炎與膀胱腫瘤關系的研究。

[1] STRZALKA W,ZIEMIENOWICZ A.Proliferating cell nuclear antigen (PCNA):a key factor in DNA replication and cell cycle regulation[J].Ann Bot,2011,107(7):1127-1140.

[2] CAPPELLO F,RIBBENE A,CAMPANELLA C,et al.The value of immunohistochemical research on PCNA,p53 and heat shock proteins in prostate cancer management:a review[J].Eur J Histochem,2006,50(1):25-34.

[3] QASIM BJ,ALI HH,HUSSEIN AG.Immunohistochemical expression of PCNA and CD34 in colorectal adenomas and carcinomas using specified automated cellular image analysis system:a clinicopathologic study[J].Saudi J Gastroenterol,2012,18(4):268-276.

[4] LAGE AL,GILLETT NA,GERLACH RF,et al.The prevalence and distribution of proliferative and metaplastic changes in normal appearing canine bladders[J].J Urol,1989,141(4):993-997.

[5] PANTUCK AJ,BANCILA E,DAS KM,et al.Adenocarcinoma of the urachus and bladder expresses a unique colonic epithelial epitope:an immunohistochemical study[J].J Urol,1997,158(5):1722-1727.

[6] HEYNS CF,DE KOCK ML,KIRSTEN PH,et al.Pelvic lipomatosis associated with cystitis glandularis and adenocarcinoma of the bladder[J].J Urol,1991,145(2):364-366.

[7] THRASHER JB,RAJAN RR,PEREZLM,et al.Cystitis glandularis.Transition to adenocarcinoma of the urinary bladder[J].N C Med J,1994,55(11):562-564.

[8] S?ZEN S,GüROCAK S,UZüM N,et al.The importance of re-evaluation in patients with cystitis glandularis associated with pelvic lipomatosis:a case report[J].Urol Oncol,2004,22(5):428-430.

[9] SKOPELITOU A,HADJIYANNAKIS M,DIMOPOULOS D,et al.p53 and c-jun expression in urinary bladder transitional cell carcinoma:correlation with proliferating cell nuclear antigen (PCNA) histological grade and clinical stage[J].Eur Urol,1997,31(4):464-471.

[10] INAGAKI T,EBISUNO S,UEKADO Y,et al.PCNA and p53 in urinary bladder cancer:correlation with histological findings and prognosis[J].Int J Urol,1997,4(2):172-177.