HPLC法測定百部止咳糖漿中苦杏仁苷的含量

1.江蘇省泰州市姜堰中醫院， 江蘇 泰州 225500；2.蘇中藥業集團股份有限公司，江蘇 泰州 225500

百部止咳糖漿為泰州市姜堰中醫院肺病科與藥劑科共同研制，具有清肺止咳功效，用于急慢性支氣管炎，小兒百日咳。苦杏仁苷為苦杏仁的主要活性成分，苦杏仁苷經腸道微生物或苦杏仁本身所含苦杏仁酶能分解產生微量的氫氰酸，對呼吸中樞有抑制作用，該作用與鎮咳、平喘效應有關[1]。過量的氫氰酸可引起中毒，抑制細胞呼吸，形成“細胞內窒息”組織缺氧[2]。因此本文采用高效液相色譜法測定百部止咳糖漿中苦杏仁苷的含量，以完善百部止咳糖漿的質量控制標準。

1 儀器與材料

1.1 儀器 SHMADZU日本島津高效液相色譜儀，檢測器為SPD-10AVP，雙泵LC-10ATCP，大連依利特色譜工作站。電子分析天平(Max 220g,Min 10mg,e=1mg,d=0.1mg)。

1.2 材料 甲醇為色譜純，水為超純水，其它試劑為分析純;苦杏仁苷對照品由中國藥品生物制品檢定所提供；百部止咳糖漿由江蘇省泰州市姜堰中醫院提供(批號：20121212、20130217、20130413)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適應性試驗 色譜柱：Kromasi C18柱(5μm，4.6mm×250mm)；流動相：甲醇-水(20∶80)；流速：1.0ml/min；柱溫：25℃；檢測波長：215nm[3]。在該色譜條件下苦杏仁苷與相鄰雜質峰的分離度R>1.5，理論塔板數>3000，基線平穩，陰性樣品在此條件下無干擾峰。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的苦杏仁苷對照品2mg置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度搖勻，制備成0.2mg/ml的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 精密量取百部止咳糖漿5.0ml于50ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，取濾液即得供試品溶液。

2.4 線性關系 精密量取上述對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml分別至10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度搖勻。分別精密量取10μl進樣，記錄色譜圖，以峰面積(A)對質量濃度(C)繪制標準曲線。苦杏仁苷在0.04～0.24mg/ml范圍內線性關系良好。回歸方程為A=5396.3C+614，r=0.9995。

2.5 精密度實驗 精密吸取上述對照品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，連續進樣6次，測定峰面積，計算RSD=1.03%，表明儀器的精密度良好。

2.6 重復性實驗 取同一批樣品依法制成6份供試品溶液，按上述色譜條件進樣10μl，測定峰面積。6次測定結果的RSD=0.95%，表明該方法的重復性良好。

2.7 穩定性實驗 精密吸取供試品溶液及對照品溶液各10μl，在上述色譜條件下，分別于0、4、8、12、24h進樣，測定峰面積，5次測定的結果RSD=1.01%。結果分析表明，對照品溶液及供試品溶液均在24h內穩定。

2.8 加樣回收率實驗 精密量取已知含量的上述供試品溶液2.0、1.5、1.0ml，各平行3份，置10ml容量瓶中，分別加入濃度為0.2mg/ml的對照品溶液1.0、0.8、0.6ml，各平行3份，用甲醇稀釋至刻度，按上述色譜條件進行操作測定含量，結果見表1。

2.9 樣品的含量測定 取批號為20121212、20130217、20130413百部止咳糖漿的樣品，按2.3供試品溶液的制備方法制備樣品的溶液，精密吸取該樣品溶液10μl進樣，測定含量。結果見表2。

表1 加樣回收率實驗結果

表2 百部止咳糖漿中苦杏仁苷的含量

3 討論

苦杏仁具祛痰鎮咳、平喘，抗炎的功效，其有效成分主要是苦杏仁苷，為蛋白酶水解產物，其祛痰鎮咳、平喘抗炎的作用與苦杏仁的止咳平喘的機理一致。而苦杏仁經加熱炮制后，可以殺酶保苷。苦杏仁接觸到水，會使部分苷溶于水，也能使一部分苷水解，因此不同的炮制方法會影響苦杏仁中苦杏仁苷的含量。

本文對苦杏仁中的主要活性成分苦杏仁苷進行含量測定，且對苦杏仁苷的HPLC法做了柱效分離度、方法學的考察，確定了苦杏仁苷在百部止咳糖漿中的質量標準，為百部止咳糖漿中苦杏仁的質量控制提供了實驗數據。

本方法還對多種流動相的組成、流速、柱溫進行了分析，實驗表明當流動相為甲醇-水(20∶80)，柱溫25℃，流速1.0ml/min時苦杏仁苷的色譜峰的基線平穩與雜質峰的分離度較好。

2010版中國藥典中只有苦杏仁藥材中苦杏仁苷的含量測定方法，而沒有成品制劑中關于苦杏仁苷的含量測定的方法。但文獻中高效液相色譜法檢測苦杏仁苷含量的報道較多[4-5]，本試驗采用高效液相色譜法方法準確、快速、可靠，可用于測定百部止咳糖漿中苦杏仁苷的含量。

[1]侯家玉，方泰惠．中藥藥理學[M]．北京：中國中醫藥出版社．2007：177．

[2]李貴海，劉青，孫付軍，等．不同炮制方法對苦杏仁主要藥效作用的影響[J]．中成藥，2007，29(7)：1031-1034．

[3]錢平，賈蕓，劉志輝，等．高效液相色譜法測定郁李仁中苦杏仁苷的含量[J]．中國中醫藥信息雜志，2009，16(12)：50-51．

[4]吳迪，王建中，趙云霞，等．苦杏仁苷幾種測定方法的比較研究[J]．食品工業科技，2006，27(2)：184-185．

[5]王乾蕾，李運軍，余健，等．高效液相色譜法測定清肺合劑中苦杏仁苷含量[J]．中國藥業，2008，17(19)：31-32．