電針對木瓜蛋白酶致骨關(guān)節(jié)炎模型犬血清中IL-1、TNF-α、SP的影響

彭 詩，劉 娟，朱兆榮，賴建彬，李 佳，張玉華，魯莎莎

（西南大學(xué)榮昌校區(qū)動物醫(yī)學(xué)系，重慶 榮昌402460）

骨性關(guān)節(jié)炎（Knee Osteoarthritis，KOA）是以關(guān)節(jié)軟骨退變、關(guān)節(jié)緣骨質(zhì)增生為主要改變的疾病，且伴隨年齡增長而發(fā)生率增加。在有關(guān)骨關(guān)節(jié)炎的動物試驗研究中，建立試驗動物模型至關(guān)重要，有不少學(xué)者采用木瓜蛋白酶關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射成功誘導(dǎo)犬、兔、豚鼠等動物膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎，其具有重復(fù)性好、發(fā)病速度快的特點[1-2]，是較常用的建模方式，但目前少有木瓜蛋白酶誘導(dǎo)犬膝骨關(guān)節(jié)炎后炎癥的報道。目前治療伴侶動物骨關(guān)節(jié)炎主要采用手術(shù)或藥物方法，然而手術(shù)方法對動物機體傷害大、成本高；藥物治療只能短暫緩解疼痛或炎癥，易復(fù)發(fā)。電針療法是在中獸醫(yī)理論指導(dǎo)下，按照辨證論治和補虛瀉實的原則，刺激穴位促使經(jīng)絡(luò)通暢，氣血調(diào)和，以扶正祛邪，防治病證，具有安全有效、操作簡便等優(yōu)點。因此本試驗選用電針治療犬骨關(guān)節(jié)炎，探討電針治療對犬骨關(guān)節(jié)炎的作用效果和機理。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 中華田園犬32只，平均年齡3個月齡，體重2.5±0.5 kg，由西南大學(xué)榮昌校區(qū)實驗動物科提供。

1.2 試劑及儀器 木瓜蛋白酶，IL-1、IL-6、SP、TNF-αELISA試劑盒，低速離心機，Model680酶標(biāo)儀，華佗牌電子針療儀。

1.3 動物模型建立與分組處理 參考文獻[3]，選取32只健康中華田園犬隨機分對照組和模型組，模型組于試驗開始第1、4、7天，在左膝關(guān)節(jié)腔注射0.5mL體積分數(shù)4%木瓜蛋白酶，對照組同時注射生理鹽水0.5mL

將模型建立成功的犬隨機分為3組，每組8只，即：模型組（不治療）、電針1組（電針[4]左側(cè)環(huán)跳、陽陵泉、后三里）、電針2組（電針[4]左側(cè)環(huán)跳、掠草、腎俞），以30號針針刺，20min，1次/d，連續(xù)14 d，觀察療效和采血檢測。

1.4 電針對犬血象和IL-1、IL-6、TNF-α、SP的影響 按照試劑盒說明書，采用ELISA測定。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件，對所有數(shù)據(jù)進行顯著性檢驗，并進行分析比較。

2 結(jié)果

2.1 電針對骨關(guān)節(jié)炎模型犬療效結(jié)果 膝關(guān)節(jié)腔注射木瓜蛋白酶后，犬呈現(xiàn)異常運動。靜止時，犬左后肢不敢負重，呈三腳站立；運動時，呈跳躍狀，屈伸困難；與骨關(guān)節(jié)炎臨床癥狀吻合。通過電針治療后，犬膝關(guān)節(jié)腫脹疼痛消失，功能恢復(fù)正常，行走姿勢未見異常。組織病理學(xué)結(jié)果顯示，模型組犬膝關(guān)節(jié)滑膜血管增生明顯，淋巴漿細胞浸潤較多；經(jīng)治療后犬膝關(guān)節(jié)滑膜細胞未見增生，淋巴漿細胞浸潤較少；見圖1、2。

圖1 模型組關(guān)節(jié)滑膜病理學(xué)變化 （H.E.10×40）

圖2 電針組關(guān)節(jié)滑膜組織學(xué)結(jié)構(gòu) （H.E.10×40）

2.2 電針治療對犬血象的影響 結(jié)果顯示，模型組犬血液中白細胞明顯上升，與對照組比較，差異極顯著（P＜0.01）；電針1組、電針2組犬血液中白細胞明顯降低，與模型組比較，差異極顯著（P＜0.01），其水平逐漸接近對照組；紅細胞與血小板無顯著性變化，詳見表1。

表1 電針治療對犬血象的影響 ±SD，n=8)

表1 電針治療對犬血象的影響 ±SD，n=8)

注：同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)大寫字母不同表示差異極顯著（P＜0.01），小寫字母不同表示差異顯著（P＜0.05），不標(biāo)或含相同字母表示差異不顯著（P＞0.05），下表同

組別 白細胞（×109/L） 紅細胞（×1012/L） 血小板（×109/L）對照組 10.89±1.42Cc 5.27±0.58 237.70±30.68模型組 19.62±2.28Aa 5.26±0.49 233.00±29.62電針1組 13.52±1.42Bb 5.36±0.39 232.67±29.77電針2組 13.14±1.22BCb 5.50±0.28 231.11±29.58

2.3 電針治療對犬血清IL-1、TNF-α、IL-6、SP的影響 結(jié)果顯示，模型組犬血清IL-1、TNF-α、SP升高，與對照組相比，差異極顯著（P＜0.01），IL-6無明顯變化；電針1組和電針2組犬血清IL-1、TNF-α、SP水平降低，與模型組相比，差異極顯著（P＜0.01），其水平逐漸接近對照組，見表2。

表2電針治療后各組犬血清中IL-1、TNF-α、IL-6、SP水平±SD，n=8，pg/mL）

表2電針治療后各組犬血清中IL-1、TNF-α、IL-6、SP水平±SD，n=8，pg/mL）

組別 IL-1 TNF-α IL-6 SP對照組 55.41±0.59C 74.28±0.76B 74.84±2.30 65.85±0.77C模型組 86.80±1.55A 92.78±0.77A 75.33±2.68 91.52±1.86A電針1組 63.22±0.99B 76.82±1.46B 69.80±1.82 72.77±1.05B電針2組 63.16±0.84B 76.49±1.13B 70.57±1.77 72.44±0.82B

3 討論

本試驗注射木瓜蛋白酶后，犬出現(xiàn)患肢不敢負重，觸診患部敏感，腫脹明顯，與骨關(guān)節(jié)炎臨床癥狀相同。電針1組以環(huán)跳為主穴，配以陽陵泉及后三里，電針2組以掠草為主穴，腎俞及后跟為配穴。環(huán)跳主治后肢麻痹、腰胯疼痛，現(xiàn)代研究[5]也表明，環(huán)跳穴具有疏通經(jīng)絡(luò)，調(diào)理氣血，祛風(fēng)盛濕之效，其在下肢痹癥、痿癥、中風(fēng)后遺癥等疾病中有廣泛應(yīng)用，但針刺環(huán)跳穴治療犬膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎尚未見報道。掠草主治膝關(guān)節(jié)扭傷、神經(jīng)痛等；陽陵泉主治后肢麻痹、膝關(guān)節(jié)扭傷；后三里主治后肢疼痛，現(xiàn)代研究表明，后三里具有確切的鎮(zhèn)痛作用[6]；腎俞主治扭傷，后跟主治扭傷、后肢麻痹。電針治療后，改善膝關(guān)節(jié)血液循環(huán)，有利于關(guān)節(jié)滲出液的吸收和骨關(guān)節(jié)滑膜的修復(fù)，使犬的膝關(guān)節(jié)功能恢復(fù)正常，疼痛腫脹消失。

注射木瓜蛋白酶可引起關(guān)節(jié)軟骨侵蝕，骨質(zhì)破壞及骨贅形成[7]，誘發(fā)白細胞向異物移動、聚集，形成炎癥。電針治療后，白細胞降低，可能是電針改善了病灶局部微循環(huán)，減輕腫脹；也可能是電針刺激抑制導(dǎo)致炎癥、疼痛的一些細胞因子釋放，使炎癥及疼痛得以改善或消除。

資料顯示，IL-1、TNF-α等能降解軟骨，是促進炎癥反應(yīng)重要的細胞因子，高水平的IL-1與軟骨細胞膜上的受體相結(jié)合，干擾軟骨細胞的正常代謝活動；誘導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶表達并使其活化，引起軟骨基質(zhì)降解、膠原纖維類型的變異，加快蛋白聚糖消耗[8]。IL-1通過IL-6介導(dǎo)抑制軟骨糖蛋白的合成，加重軟骨的損傷。TNF-α能夠促進嗜中性粒細胞粘附到內(nèi)皮細胞上，從而刺激機體局部炎癥反應(yīng)[9]。高濃度TNF-α?xí)鹧装Y損傷，與IL-6協(xié)同還可誘發(fā)全身性炎癥反應(yīng)。本研究顯示，模型組IL-1、TNF-α的含量增加、電針組IL-1、TNF-α水平逐漸降低，趨于正常。結(jié)果揭示，IL-1、TNF-α的含量與骨關(guān)節(jié)炎的退變程度呈正相關(guān)。注射木瓜蛋白酶后，引起白細胞的升高，可能導(dǎo)致IL-1、TNF-α的分泌與合成失衡；而電針治療可減少白細胞數(shù)量，進而抑制IL-1、TNF-α的分泌與合成，但其機制有待進一步探討。IL-6具有促炎和抗炎雙重作用[10-11]，還可調(diào)控成骨細胞，改變和維持骨吸收與形成的平衡。在本試驗中IL-6未見異常變化。

SP一種疼痛遞質(zhì)，具有多種生理功能[12]。外周SP作為疼痛遞質(zhì)向脊髓傳遞傷害性刺激信號[13-14]。OA患者的關(guān)節(jié)疼痛除了物理因素外，還與P物質(zhì)有關(guān)[15]。這些作用均促進了疼痛的產(chǎn)生，加重了疼痛反應(yīng)。本試驗?zāi)Ｐ徒M血清中SP含量增加，電針治療后血清中SP含量降低。證明犬血清SP含量升高與降低與犬疼痛癥狀出現(xiàn)與減輕一致。

綜上所述，電針環(huán)跳等穴可降低骨關(guān)節(jié)炎犬血清中IL-1、TNF-α水平，減輕炎癥，同時還可降低血清中SP含量，減輕疼痛，同時電針掠草等穴也能產(chǎn)生同樣治療效果，這可能與電針改善局部血液循環(huán)、緩解炎癥狀態(tài)及局部張力、提高痛閾有關(guān)，推測電針刺激可通過調(diào)節(jié)IL-1、TNF-α、SP的合成和分泌，使膝關(guān)節(jié)的功能得以恢復(fù)。

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