HPLC法測定不同加工方法金銀花中綠原酸和木犀草苷的含量

王 萌，王建成，劉鈞寧，林惠彬

（1.山東省中醫(yī)藥研究院，山東濟南250014；2.臨沂市食品藥品檢驗檢測中心，山東臨沂276001；3.山東省千佛山醫(yī)院，山東濟南250014）

HPLC法測定不同加工方法金銀花中綠原酸和木犀草苷的含量

王 萌1，王建成2，劉鈞寧3，林惠彬1

（1.山東省中醫(yī)藥研究院，山東濟南250014；2.臨沂市食品藥品檢驗檢測中心，山東臨沂276001；3.山東省千佛山醫(yī)院，山東濟南250014）

目的通過采用高效液相色譜法測定不同加工方法所得金銀花藥材中綠原酸和木犀草苷的含量，考察不同加工方法對金銀花質(zhì)量的影響。方法綠原酸含量測定采用Agilent Zorbax SB－C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5μm），流動相：乙腈－0.4%磷酸（15∶85）；流速：1.0 m L·min－1；檢測波長：327 nm；柱溫：室溫。木犀草苷含量測定采用Hypersil Phenyl－2色譜柱（4.6 mm×150 mm，5μm），流動相：乙腈－0.5%冰醋酸，二元梯度洗脫，0～15 min，乙腈10%～20%，15～30 min，乙腈20%，30～40 min，乙腈20%～30%；流速：1.0 mL·min－1；檢測波長：350 nm；柱溫：40℃。結(jié)果不同加工方法對金銀花藥材中綠原酸和木犀草苷的含量有一定影響。結(jié)論烘干法和微波法所得樣品質(zhì)量較好，且藥材的外觀色澤與藥材內(nèi)在質(zhì)量之間存在較為密切的關(guān)系。

高效液相色譜法；金銀花；綠原酸；木犀草苷；加工方式

金銀花為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或帶初開的花［1］。金銀花具有清熱解毒，疏散風(fēng)熱的功效，為臨床常用中藥材，也是山東道地藥材。近年來，臨床對金銀花的需求量更是逐年增加。但由于受種植地域環(huán)境的影響以及采摘時間、加工方式以及儲存條件的影響導(dǎo)致金銀花藥材的質(zhì)量參差不齊。有報道稱不同的加工方式可影響金銀花中某些化學(xué)成分的含量［2］。本文主要收集了山東省不同產(chǎn)地常用加工方式所得的金銀花樣品，采用HPLC法對其綠原酸以及木犀草苷含量進行測定，并根據(jù)測定結(jié)果分析含量變化規(guī)律，為優(yōu)選加工方式提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器 Agilent1100高效液相色譜儀（自動進樣器）、二極管陣列檢測器（DAD）；超聲波清洗器（KQ－250E型醫(yī)用，江蘇昆山市超聲儀器有限公司）；FA1604電子天平（上海天平儀器廠）；瑞士梅特勒AB265－S分析天平。

1.2 試劑與試藥 綠原酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110753－200212）；木犀草苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：11720－201106）；乙腈（色譜純，DNK，United States of America）；乙醇（分析純，上海振興化工一廠）；純化水；冰醋酸（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）。藥材樣品分別取材于淄博市博山區(qū)、臨沂市平邑縣、費縣。

1.3 方法

1.3.1 綠原酸含量測定

1.3.1.1 色譜條件 Agilent Zorbax SB－C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm，柱號：880975－902）；流動相：乙腈－0.4%磷酸（15∶85）；流速：1.0 mL·min－1；檢測波長：327 nm；柱溫：室溫。理論板數(shù)按綠原酸計算應(yīng)不低于1 000［3］。

1.3.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對照品適量，置于棕色容量瓶中，加50%甲醇超聲溶解并制成每1 mL含40μg的溶液（10℃以下保存）。

1.3.1.3 供試品溶液的制備 取本品粉末（過四號篩）約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率35 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL，置25 mL棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得。

1.3.1.4 測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得。按以上色譜條件所得的綠原酸對照品、金銀花樣品圖譜見圖1、圖2。

1.3.2 木犀草苷含量測定

1.3.2.1 色譜條件 Hypersil Phenyl－2色譜柱（4.6 mm×150mm，5μm）；流動相：乙腈－0.5%冰醋酸，二元梯度洗脫，0～15 min，乙腈10%～20%，15～30 min，乙腈20%，30～40 min，乙腈20%～30%；流速：1.0 mL·min－1；檢測波長：350 nm；柱溫：40℃。理論板數(shù)按木犀草苷計算應(yīng)不低于20 000［3］。

圖1 綠原酸對照品HPLC圖譜

圖2 金銀花樣品HPLC圖譜

1.3.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取在五氧化二磷干燥器中減壓干燥12 h的木犀草苷對照品適量，加70%乙醇超聲溶解并制成每1 mL含40μg的溶液。

1.3.2.3 試品溶液的制備 取樣品（過四號篩）2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50 mL，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率35 kHz）1 h，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液10 mL，回收溶劑至干，殘渣用70%乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，即得。

1.3.2.4 測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得。按以上色譜條件所得的木犀草苷對照品、金銀花樣品圖譜見圖3、圖4。

圖3 木犀草苷對照品HPLC圖譜

圖4 金銀花樣品HPLC圖譜

2 結(jié)果

10批金銀花樣品分別按“綠原酸供試品溶液制備”、“木犀草苷供試品溶液制備”方法制備樣品，精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，以干燥品計算含量，結(jié)果見表1。

表1 不同加工方法金銀花藥材中綠原酸和木犀草苷的含量（n＝10）

3 小結(jié)與討論

通過實驗研究發(fā)現(xiàn)，不同加工方法所得樣品中所含綠原酸和木犀草苷的含量均超過藥典規(guī)定的最低標準，質(zhì)量合格。其中殺青烘干、烘干、蒸后烘干、微波法所得樣品不僅色澤較好，且測得綠原酸和木犀草苷的含量都相對比較高。曬干和陰干所得樣品的綠原酸和木犀草苷含量變化規(guī)律不明顯。并且在實驗中發(fā)現(xiàn)金銀花藥材中這兩種化學(xué)成分的變化和藥材的褐變程度存在較密切的關(guān)系。兩種成分均含量較高的1號、6號、7號、8、10號樣品的共同特點是藥材顏色為新鮮的黃綠色，而兩種成分含量相對較低的3號、5號、9號樣品雖然加工方式不同，但藥材顏色均為暗綠色，提示金銀花的干燥方式對其有效成分的含量有較大影響。由于蒸后烘干、微波烘干在實際生產(chǎn)中應(yīng)用較少，推廣較為困難。因此，在實際的產(chǎn)地藥材加工的過程中，對于種植基地的大規(guī)模加工而言，機器化短時間高溫烘干用時短，效率高，藥材性狀好，有效成分含量高，是較為理想的產(chǎn)地加工方式。而對于種植散戶來說，機器投入成本高，普及實施難度較大，因此在仍采用傳統(tǒng)晾曬或陰干加工等其他加工方式的情況下，通過控制色澤等指標來保持金銀花藥材的性狀并最終保證藥材質(zhì)量簡便易行，具有較高的可操作性［4］。

［1］范蕾，藍云龍，余樂，等.不同產(chǎn)地金銀花中綠原酸及木犀草苷的含量測定［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2013，31（1）：172－174.

［2］高建邦，宋平順.不同加工方法對金銀花中綠原酸和木犀草苷含量的影響［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2010，25（11）：1796－1798.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2005年版（一部）［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：152－153.

［4］凌益平，呂芳，駱雅琴，等.金銀花中綠原酸的工業(yè)化提取純化方法探討［J］.藥學(xué)研究，2013，32（1）：55－57.

Determ ination of chlorogenic acid and galuteolin w ith different processing methods in flos lonicerae by HPLC

WANGMeng1，WANG Jian-cheng2，LIU Jun-ning3，LIN Hui-bin1
（1.Shandong Academy of Chinese Medicine，Jinan 250014，China；2.Linyi Institue for Drug Contorl，Linyi276001，China；3.Shandong Qianfoshan Hospital，Jinan 250014，China）

ObjectiveTo investigate the effect of different processingmethods on the content of chlorogenic acid and galuteolin in flos lonicerae and the quality of flos lonicerae.M ethodsThe determination of chlorogenic acid was performed on Agilent Zorbax SB－C18column（4.6 mm×250 mm，5μm）.Themobile phase was acetonitrile－0.4%phosphate（15∶85）with the flow rate of 1.0 mL·min－1.The detection wavelength was 327 nm and the column temperature was room temperature.The determination of galuteolin was performed on Hypersil Phenyl－2 column（4.6 mm×150 mm，5μm）.The mobile phasewas acetonitrile－0.5%glacial acetic acid with binary gradientelution，acetonitrile 10%～20%within 0～15 min，acetonitrile 20%within 15～30 min，acetonitrile 20%～30%within 30～40min.The flow ratewas 1.0 mL·min－1，the detection wavelength was 350 nm and the column temperature was 40℃.ResultsDifferent processing methods had certain effects on the contentof chlorogenic acid and galuteolin in flos lonicerae.ConclusionItwas suitable to use the processing of dryingmethod and microwave in the production.And there was close relationship between the quality and appearance of color.

HPLC；Flos lonicerae；Chlorogenic acid；Galuteolin；Processingmethods

R284.2

A

2095－5375（2014）05－0261－003

山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計劃（No.2009－129）；十二五”國家科技支撐計劃（No.2011BAI06B01）、（No.2011BAC02B04）；國家中醫(yī)藥行業(yè)科研專項（No.201407002）；山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計劃（No.2011Z－003－2）

王萌，女，助理研究員，研究方向：中藥資源，E－mail：lemonheji＠sina.com