Eotaxin在鼻腔分泌物中的表達及意義

蘭 寧，徐 紅

（南昌大學第二附屬醫院耳鼻咽喉-頭頸外科，南昌330000）

鼻息肉是耳鼻咽喉科常見的鼻部慢性病之一，可發生在任何的社會階層及種族之間，發病率為1%～2%，男女之比為2～4∶1，多見于20歲以后的成年人［1］。雖然目前對鼻息肉的發病機制還不是很明確，但嗜酸性粒細胞作為鼻息肉最主要的組織學特點，其相關因子都是近幾年研究的熱點。本文就鼻息肉、慢性鼻竇炎、鼻中隔偏曲患者鼻腔分泌物中嗜酸性粒細胞趨化因子eotaxin濃度比較來探討eotaxin在鼻息肉疾病發生、發展中所起的作用及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 共選取40例患者鼻腔分泌物，其中15例為鼻息肉患者，15例為慢性鼻竇炎患者，10例為單純鼻中隔偏曲患者。女17例，男23例，年齡18～50歲。所有患者均來源于本院住院部2012年7～9月的患者，所選患者入院時均經過鼻內窺鏡及副鼻竇CT檢查確診為鼻息肉、慢性鼻竇炎或單純鼻中隔偏曲。鼻息肉、慢性鼻竇炎患者術后病理也得到證實。所選患者1個月前全身或局部均未使用抗生素、抗組胺藥、皮質類固醇激素，術前均通過血清學檢測IgG、IgE，皮膚點刺試驗以排除過敏性鼻炎。所選患者均哮喘、寄生蟲病等過敏反應性疾病病史。

1.2 標本采集 所選患者入院后在鼻內窺鏡下通過負壓吸引法收集鼻腔分泌物1mL，所有標本用PBS緩沖液稀釋10倍，混勻，4 000r／min離心10min，細胞等有形成分沉入管底，取1mL上清液置于離心塑料管，放于-20℃冰箱保存待用。

1.3 實驗方法 用人eotaxin定量酶聯免疫測定試劑盒，購于武漢優爾生科技公司。嚴格按照試劑說明書操作，實驗結束后在波長為450nm的酶標儀中檢測得出標準品及每個標本的OD值，使用CurveExpert 1.4系統繪出七點圖并算出每份標本的eotaxin濃度。

1.4 統計學處理 采用SPSS17.0軟件進行統計學分析，計量資料用±s表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

鼻息肉患者鼻腔分泌物eotaxin的平均濃度為（468.82±440.64）pg／mL，慢性鼻竇炎患者鼻腔分泌物eotaxin的平均濃度為（443.85±334.68）pg／mL，單純鼻中隔偏曲患者eotaxin的平均濃度為（149.23±49.01）pg／mL。鼻息肉、慢性鼻竇炎患者鼻腔分泌物eotaxin濃度均高于鼻中隔偏曲患者鼻腔分泌物eotaxin濃度，差異均有統計學意義（t＝2.26、2.74，P＜0.05），但鼻息肉、慢性鼻竇炎鼻腔分泌物eotaxin濃度之間比較差異無統計學意義（t＝0.17，P＞0.05），見表1。

表1 40例患者鼻腔分泌物中eotaxin濃度比較（±s）

表1 40例患者鼻腔分泌物中eotaxin濃度比較（±s）

a：P＜0.05，與鼻中隔偏曲組比較。

組別 n eotaxin（pg／mL）鼻息肉組 15 468.82±440.64a鼻中隔偏曲組 10 149.23±49.01慢性鼻竇炎組 15 443.85±334.68a

3 討 論

Eotaxin最早于致敏豚鼠的支氣管肺泡灌洗液中分離獲得［2］，屬于C-C類化學趨化因子，目前發現eotaxin家族有eotaxin-1、eotaxin-2、eotaxin-3，雖然它們之間的結構不同，但它們的功能相似，都對嗜酸性粒細胞具有趨化作用。Eotaxin主要來源為上皮細胞、內皮細胞和活化的白細胞、成纖維細胞，然而，在鼻息肉組織的炎性反應中滲出性巨噬細胞和EOS在某種程度上都是eotaxin的主要來源，使eotaxin生成增加［3］。eotaxin主要作用于CCR3受體上，與CCR3受體特異性的結合促進嗜酸性粒細胞經內皮遷移至鼻息肉黏膜的固有層，對嗜酸性粒細胞產生特異性的趨化作用。eotaxin不僅與嗜酸性粒細胞炎癥關系密切，還與其他炎性細胞（T淋巴細胞，堿性粒細胞，單核細胞等）的趨化或活化有關，但由于CCR3受體在嗜酸性粒細胞上大量存在，因此eotaxin與嗜酸性粒細胞有高度的親和性。雖然對嗜酸性粒細胞具有趨化作用的細胞因子不止eotaxin，還有IL-5、白三烯B4、血小板衍生生長因子等，其中IL-5是EOS家族最具特異性及對EOS選擇性終端分化負責的細胞因子，同時IL-5也能刺激EOS從骨髓釋放到外周循環中［4］。但與其他作用于嗜酸性粒細胞的細胞因子相比，eotaxin是一種表現出對嗜酸性粒細胞遷移更高選擇性的趨化因子。Toru Yao等發現在嗜酸性粒細胞鼻息肉中eotaxin濃度比非嗜酸性粒細胞鼻息肉中eotaxin濃度明顯增加，進一步指出在鼻息肉組織中嗜酸性粒細胞的募集是一個自我放大的過程［5］。

CCR3最早從單核細胞、嗜酸性粒細胞克隆而來，屬于G蛋白耦聯受體家族。它主要表達在嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞和TH2細胞，介導遷移及脫顆粒反應。CCR3是一種非特異性趨化因子受體，可與多種趨化因子結合發生作用，包括eotaxin、eotaxin-1、eotaxin-2、eotaxin-3、RANTES等。趨化因子與CCR3結合后可產生一系列生化反應，選擇性促進嗜酸性粒細胞募集浸潤到炎癥部位。Bryan等［6］研究發現，eotaxin可通過與CCR3的結合可誘導部分CCR3內陷和嗜酸性粒細胞變形，有助于嗜酸性粒細胞的活化和遷移。

Eotaxin最早于致敏豚鼠的支氣管肺泡灌洗液中分離獲得，指出eotaxin在氣道疾病中起了一定的作用。既然eotaxin能在支氣管肺泡灌洗液中發現，作者也能假設在鼻息肉患者的鼻腔分泌物中分離獲得。鑒于這個假設及獲取鼻腔分泌物法與血清及鼻息肉勻漿組織法相比具有無創性，簡便性、費用低、隨訪性高等特點，根據先前學者文獻資料提供提取鼻腔分泌物的辦法及自己的臨床實驗尋找到一種方便、簡單的負壓吸引法（將嬰兒吸痰管一端接負壓裝置，一端接吸引器，通過鼻內窺鏡將鼻腔分泌物吸入儲留瓶中保存）此法時間短，有效減輕患者的痛苦，費用低，提取量充足。避免了明膠海綿填塞法的時間長，提取量少等缺點，也避免了鼻腔灌洗法的患者配合不佳、稀釋倍數計算不精確等缺點。實驗結果顯示鼻息肉、慢性鼻竇炎患者鼻腔分泌物eotaxin濃度比鼻中隔患者鼻腔分泌物eotaxin濃度顯著增加（P＜0.05），表明通過提取鼻息肉、慢性鼻竇炎、鼻中隔偏曲患者的鼻腔分泌物經ELISA實驗來檢測鼻腔分泌物中eotaxin濃度的方法是具有可行性的。避免了免疫組織化學法及RT-PCR法時間長、費用高、操作復雜等特點，是個值得在臨床上推廣的方法。

Shin等［7］用原位雜交方法檢測顯示鼻息肉組織與正常下鼻甲組織中eotaxin基因的表達差異有統計學意義。Hiroyuki Seto等［8］通過免疫組織化學法可發現在正常上頜竇黏膜組織中少量的eotaxin蛋白陽性細胞，但在鼻息肉組織固有層中可見大量的eotaxin蛋白陽性細胞。OIze等［9］通過免疫組化方法研究顯示，eotaxin家族的eotaxin、eotaxin-2、eotaxin-3蛋白在鼻息肉組織中的表達明顯高于正常下鼻甲組織，且3者蛋白水平與組織中EOS數量呈正相關。國內學者用免疫組化和RT-PCR從蛋白和基因兩個水平檢測鼻息肉組織和正常下鼻甲中的eotaxin的表達，結果顯示兩者間蛋白表達量為（18.56±3.59）和（0.97±0.11）；兩組 mRNA 表達水平為（1.02±0.193）與（0.19±0.126），差異均有統計學意義（P＜0.05）［10］。Chao等［11］使用 ELISA 試驗檢測亞洲人慢性鼻竇炎、鼻息肉患者的血清中eotaxin比健康對照組的血清eotaxin明顯的提高（P＜0.01），表明趨化因子與疾病的炎癥程度具有密切的相關性。而本次實驗結果得出鼻息肉患者鼻腔分泌物eotaxin濃度為（468.82±440.64）pg／mL，慢性鼻竇患者鼻腔分泌物eotaxin濃度為（443.85±334.68）pg／mL，鼻中隔偏曲患者鼻腔分泌物eotaxin濃度為（149.23±49.01）pg／mL。鼻息肉、慢性鼻竇炎患者鼻腔分泌物eotaxin濃度比鼻中隔偏曲患者鼻腔分泌物eotaxin濃度顯著升高（P＜0.05），這與先前文獻得出的鼻息肉患者比健康對照組eotaxin量顯著增加的結論是一致的。

雖然目前對eotaxin研究的文獻不少，但通過使用ELISA方法檢測鼻腔分泌物中eotaxin濃度的方法還是很少的，本研究結果得出鼻息肉組、慢性鼻竇炎組鼻腔分泌物eotaxin濃度均高于鼻中隔偏曲組鼻腔分泌物eotaxin濃度，差異有統計學意義（P＜0.05）。進一步說明eotaxin在鼻息肉疾病發生、發展中所起重要作用，本實驗不足之處在于并沒有對eotaxin家族eotaxin-1、eotaxin-2、eotaxin-3在鼻息肉發病的不同時期所起的作用進行研究，鑒于eotaxin家族eotaxin-1、eotaxin-2、eotaxin-3在哮喘不同時期所起的作用不同，今后也可在這方面進行研究。之前有研究也發現CCR3在以嗜酸性粒細胞聚集為主的變態反應性疾病中同樣也起了重要作用，如：哮喘，變應性鼻炎等。Joubert等［12］發現，eotaxin作用于氣道平滑肌細胞CCR3可誘導平滑肌細胞遷移和增殖，使細胞內Ca2＋增高，哮喘患者支氣管黏膜中CCR3mRNA表達增加。而目前臨床上廣泛使用CCR3拮抗劑治療哮喘及變應性鼻炎，如抗CCR3單克隆抗體已是目前最具有研究價值的藥物，它通過有效的抑制嗜酸性粒細胞在局部組織的募集從而在變應性鼻炎中發揮重要作用。這為今后進一步研究CCR3拮抗劑治療鼻息肉提供了一定的理論依據。

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