微乳毛細管電色譜電動進樣場放大堆積法檢測化妝品中糖皮質激素

李娟等

1引言

糖皮質激素是一類疏水性較強的中性化合物，具有抗炎、抗過敏、抑制纖維細胞增生、減少5羥色胺形成等作用，加入化妝品中可達到快速美白效果。但是，長期使用含有糖皮質激素的化妝品會產生毛囊萎縮、面部血管擴張、高血壓、免疫功能下降等副作用[1]，對人體造成嚴重傷害。我國衛生部頒發的《化妝品衛生規范》（2007版）中明確規定糖皮質激素為化妝品中的禁用組分。

為了解化妝品中糖皮質激素利用現狀，有必要對其進行適當的監測。目前糖皮質激素分析方法主要有高效液相色譜法[2～4]、 液相色譜質譜聯用法[5，6]、 固相萃取液相色譜法[7，8]和毛細管電泳法（CE）[9～11]等。采用液相色譜法，方法穩定，但是溶劑消耗大且檢測靈敏度較低；液相色譜質譜聯用法儀器價格昂貴；固相萃取液相色譜聯用需要對樣品進行凈化前處理和離線預富集，操作繁瑣且富集倍數較低；毛細管電泳分離方法因耗時少、分離效率高，在糖皮質激素分析中得到廣泛應用，但靈敏度和檢測限方面都較難達到微量或痕量檢測的要求。因此，針對糖皮質激素，建立一種簡單、準確、高靈敏度的檢測方法，對于化妝品的質量監控有重要的意義。

微乳毛細管電色譜法（Microemulsion electrokinetic chromatography， MEEKC）對疏水中性物質具有良好的分離能力，但是MEEKC在線富集的方法報道較少[12～14]。場放大堆積（Fieldamplified sample stacking，FASS）是一種常用的富集技術，與MEEKC聯用能兼顧分離選擇性和富集效果。電動進樣（Electric injection）不僅增加富集倍數，還增強了進樣選擇性，將富集作用擴展到進樣階段。但是，糖皮質激素中性不帶電，通常采用流體力學進樣，不能直接進行電動進樣。本研究通過調節樣品基質pH值，促使分析物發生電離，能夠以電遷移模式進入毛細管。本研究建立了MEEKCFASS聯用場放大進樣同時檢測化妝品中6種糖皮質激素的方法，與常規毛細管電泳法相比，方法靈敏度提高了2個數量級。本方法操作過程簡單、樣品用量少、經濟快速，具有良好的分離度和靈敏度。

2實驗部分

2.1儀器與試劑

TH3100型高效毛細管電泳儀（保定天惠分離科學研究所），熔融石英毛細管（河北永年瑞灃光導纖維廠，65 cm×50 μm，有效長度50 cm）。SK2200H超聲波清洗器（上海科導超聲儀器有限公司）； NW10VF0酸度計（鄭州南北儀器設備有限公司）；TGL16G高速離心機（上海安亭科學儀器廠）；旋轉蒸發儀（鞏義市英峪高科儀器廠）；Milli Q Refrence超純水機（美國Millipore公司）。

潑尼松、氫化可的松、醋酸可的松、丙酸氟替卡松、曲安奈德、地塞米松標準品（J&K公司）。十二烷基硫酸鈉（SDS）、硼砂、HBO3、NaH2PO4、NaOH、正丁醇、正辛烷（分析純，上海國藥集團化學試劑有限公司）。實驗用水均為超純水。化妝品樣品購于無錫某超市。

2.2實驗方法

2.2.1標準溶液的配制

稱取適量潑尼松、氫化可的松、醋酸可的松、丙酸氟替卡松、曲安奈德、地塞米松分別加甲醇溶解，配制成 2 g/L的6種標準儲備液，于4 ℃冰箱內避光保存，使用時根據需要稀釋成不同濃度的標準液。

3結果與討論

3.1樣品基質pH值及濃度的影響

采用電動進樣時中性分析物的解離度會顯著影響FASS的富集效果。糖皮質激素在中性或酸性條件下難解離，而隨著堿性的增強， 解離度增大，因此選擇堿性樣品基質有利于電動進樣。由于背景緩沖液為強酸性，堿性過強可能會發生背景緩沖液區帶與樣品區帶發生酸堿中和，使樣品和樣品區帶均呈電中性，造成嚴重峰裂分和重疊或不出峰。實驗考察了pH 7.5～9.5的硼砂緩沖液作為樣品基質，發現在pH 8.5時峰形良好，富集效果最好。

硼砂緩沖液的濃度影響樣品基質的離子強度和電導率，理論上，低濃度基質溶液在樣品進口端形成低電場，能推動更多的樣品離子進入毛細管。實驗結果如圖1所示，硼砂濃度在1～ 9 mmol/L范圍內，1 mmol/L硼砂緩沖液富集效果最佳。若硼砂緩沖液濃度低于1 mmol/L，過低的離子強度和電導率會影響樣品區帶的電場強度，場強過低引起分析物遷移速度過慢，對富集不利，且過低濃度的基質在進樣端口形成的電場過低，造成樣品進樣不完全，在進樣階段存在樣品損失，降低富集效率，造成實驗結果不穩定，甚至不出峰。因此，樣品基質濃度選擇為1 mmol/L。

3.2水柱長度的影響

1引言

糖皮質激素是一類疏水性較強的中性化合物，具有抗炎、抗過敏、抑制纖維細胞增生、減少5羥色胺形成等作用，加入化妝品中可達到快速美白效果。但是，長期使用含有糖皮質激素的化妝品會產生毛囊萎縮、面部血管擴張、高血壓、免疫功能下降等副作用[1]，對人體造成嚴重傷害。我國衛生部頒發的《化妝品衛生規范》（2007版）中明確規定糖皮質激素為化妝品中的禁用組分。

為了解化妝品中糖皮質激素利用現狀，有必要對其進行適當的監測。目前糖皮質激素分析方法主要有高效液相色譜法[2～4]、 液相色譜質譜聯用法[5，6]、 固相萃取液相色譜法[7，8]和毛細管電泳法（CE）[9～11]等。采用液相色譜法，方法穩定，但是溶劑消耗大且檢測靈敏度較低；液相色譜質譜聯用法儀器價格昂貴；固相萃取液相色譜聯用需要對樣品進行凈化前處理和離線預富集，操作繁瑣且富集倍數較低；毛細管電泳分離方法因耗時少、分離效率高，在糖皮質激素分析中得到廣泛應用，但靈敏度和檢測限方面都較難達到微量或痕量檢測的要求。因此，針對糖皮質激素，建立一種簡單、準確、高靈敏度的檢測方法，對于化妝品的質量監控有重要的意義。

微乳毛細管電色譜法（Microemulsion electrokinetic chromatography， MEEKC）對疏水中性物質具有良好的分離能力，但是MEEKC在線富集的方法報道較少[12～14]。場放大堆積（Fieldamplified sample stacking，FASS）是一種常用的富集技術，與MEEKC聯用能兼顧分離選擇性和富集效果。電動進樣（Electric injection）不僅增加富集倍數，還增強了進樣選擇性，將富集作用擴展到進樣階段。但是，糖皮質激素中性不帶電，通常采用流體力學進樣，不能直接進行電動進樣。本研究通過調節樣品基質pH值，促使分析物發生電離，能夠以電遷移模式進入毛細管。本研究建立了MEEKCFASS聯用場放大進樣同時檢測化妝品中6種糖皮質激素的方法，與常規毛細管電泳法相比，方法靈敏度提高了2個數量級。本方法操作過程簡單、樣品用量少、經濟快速，具有良好的分離度和靈敏度。

2實驗部分

2.1儀器與試劑

TH3100型高效毛細管電泳儀（保定天惠分離科學研究所），熔融石英毛細管（河北永年瑞灃光導纖維廠，65 cm×50 μm，有效長度50 cm）。SK2200H超聲波清洗器（上海科導超聲儀器有限公司）； NW10VF0酸度計（鄭州南北儀器設備有限公司）；TGL16G高速離心機（上海安亭科學儀器廠）；旋轉蒸發儀（鞏義市英峪高科儀器廠）；Milli Q Refrence超純水機（美國Millipore公司）。

潑尼松、氫化可的松、醋酸可的松、丙酸氟替卡松、曲安奈德、地塞米松標準品（J&K公司）。十二烷基硫酸鈉（SDS）、硼砂、HBO3、NaH2PO4、NaOH、正丁醇、正辛烷（分析純，上海國藥集團化學試劑有限公司）。實驗用水均為超純水。化妝品樣品購于無錫某超市。

2.2實驗方法

2.2.1標準溶液的配制

稱取適量潑尼松、氫化可的松、醋酸可的松、丙酸氟替卡松、曲安奈德、地塞米松分別加甲醇溶解，配制成 2 g/L的6種標準儲備液，于4 ℃冰箱內避光保存，使用時根據需要稀釋成不同濃度的標準液。

3結果與討論

3.1樣品基質pH值及濃度的影響

采用電動進樣時中性分析物的解離度會顯著影響FASS的富集效果。糖皮質激素在中性或酸性條件下難解離，而隨著堿性的增強， 解離度增大，因此選擇堿性樣品基質有利于電動進樣。由于背景緩沖液為強酸性，堿性過強可能會發生背景緩沖液區帶與樣品區帶發生酸堿中和，使樣品和樣品區帶均呈電中性，造成嚴重峰裂分和重疊或不出峰。實驗考察了pH 7.5～9.5的硼砂緩沖液作為樣品基質，發現在pH 8.5時峰形良好，富集效果最好。

硼砂緩沖液的濃度影響樣品基質的離子強度和電導率，理論上，低濃度基質溶液在樣品進口端形成低電場，能推動更多的樣品離子進入毛細管。實驗結果如圖1所示，硼砂濃度在1～ 9 mmol/L范圍內，1 mmol/L硼砂緩沖液富集效果最佳。若硼砂緩沖液濃度低于1 mmol/L，過低的離子強度和電導率會影響樣品區帶的電場強度，場強過低引起分析物遷移速度過慢，對富集不利，且過低濃度的基質在進樣端口形成的電場過低，造成樣品進樣不完全，在進樣階段存在樣品損失，降低富集效率，造成實驗結果不穩定，甚至不出峰。因此，樣品基質濃度選擇為1 mmol/L。

3.2水柱長度的影響

1引言

糖皮質激素是一類疏水性較強的中性化合物，具有抗炎、抗過敏、抑制纖維細胞增生、減少5羥色胺形成等作用，加入化妝品中可達到快速美白效果。但是，長期使用含有糖皮質激素的化妝品會產生毛囊萎縮、面部血管擴張、高血壓、免疫功能下降等副作用[1]，對人體造成嚴重傷害。我國衛生部頒發的《化妝品衛生規范》（2007版）中明確規定糖皮質激素為化妝品中的禁用組分。

為了解化妝品中糖皮質激素利用現狀，有必要對其進行適當的監測。目前糖皮質激素分析方法主要有高效液相色譜法[2～4]、 液相色譜質譜聯用法[5，6]、 固相萃取液相色譜法[7，8]和毛細管電泳法（CE）[9～11]等。采用液相色譜法，方法穩定，但是溶劑消耗大且檢測靈敏度較低；液相色譜質譜聯用法儀器價格昂貴；固相萃取液相色譜聯用需要對樣品進行凈化前處理和離線預富集，操作繁瑣且富集倍數較低；毛細管電泳分離方法因耗時少、分離效率高，在糖皮質激素分析中得到廣泛應用，但靈敏度和檢測限方面都較難達到微量或痕量檢測的要求。因此，針對糖皮質激素，建立一種簡單、準確、高靈敏度的檢測方法，對于化妝品的質量監控有重要的意義。

微乳毛細管電色譜法（Microemulsion electrokinetic chromatography， MEEKC）對疏水中性物質具有良好的分離能力，但是MEEKC在線富集的方法報道較少[12～14]。場放大堆積（Fieldamplified sample stacking，FASS）是一種常用的富集技術，與MEEKC聯用能兼顧分離選擇性和富集效果。電動進樣（Electric injection）不僅增加富集倍數，還增強了進樣選擇性，將富集作用擴展到進樣階段。但是，糖皮質激素中性不帶電，通常采用流體力學進樣，不能直接進行電動進樣。本研究通過調節樣品基質pH值，促使分析物發生電離，能夠以電遷移模式進入毛細管。本研究建立了MEEKCFASS聯用場放大進樣同時檢測化妝品中6種糖皮質激素的方法，與常規毛細管電泳法相比，方法靈敏度提高了2個數量級。本方法操作過程簡單、樣品用量少、經濟快速，具有良好的分離度和靈敏度。

2實驗部分

2.1儀器與試劑

TH3100型高效毛細管電泳儀（保定天惠分離科學研究所），熔融石英毛細管（河北永年瑞灃光導纖維廠，65 cm×50 μm，有效長度50 cm）。SK2200H超聲波清洗器（上海科導超聲儀器有限公司）； NW10VF0酸度計（鄭州南北儀器設備有限公司）；TGL16G高速離心機（上海安亭科學儀器廠）；旋轉蒸發儀（鞏義市英峪高科儀器廠）；Milli Q Refrence超純水機（美國Millipore公司）。

潑尼松、氫化可的松、醋酸可的松、丙酸氟替卡松、曲安奈德、地塞米松標準品（J&K公司）。十二烷基硫酸鈉（SDS）、硼砂、HBO3、NaH2PO4、NaOH、正丁醇、正辛烷（分析純，上海國藥集團化學試劑有限公司）。實驗用水均為超純水。化妝品樣品購于無錫某超市。

2.2實驗方法

2.2.1標準溶液的配制

稱取適量潑尼松、氫化可的松、醋酸可的松、丙酸氟替卡松、曲安奈德、地塞米松分別加甲醇溶解，配制成 2 g/L的6種標準儲備液，于4 ℃冰箱內避光保存，使用時根據需要稀釋成不同濃度的標準液。

3結果與討論

3.1樣品基質pH值及濃度的影響

采用電動進樣時中性分析物的解離度會顯著影響FASS的富集效果。糖皮質激素在中性或酸性條件下難解離，而隨著堿性的增強， 解離度增大，因此選擇堿性樣品基質有利于電動進樣。由于背景緩沖液為強酸性，堿性過強可能會發生背景緩沖液區帶與樣品區帶發生酸堿中和，使樣品和樣品區帶均呈電中性，造成嚴重峰裂分和重疊或不出峰。實驗考察了pH 7.5～9.5的硼砂緩沖液作為樣品基質，發現在pH 8.5時峰形良好，富集效果最好。

硼砂緩沖液的濃度影響樣品基質的離子強度和電導率，理論上，低濃度基質溶液在樣品進口端形成低電場，能推動更多的樣品離子進入毛細管。實驗結果如圖1所示，硼砂濃度在1～ 9 mmol/L范圍內，1 mmol/L硼砂緩沖液富集效果最佳。若硼砂緩沖液濃度低于1 mmol/L，過低的離子強度和電導率會影響樣品區帶的電場強度，場強過低引起分析物遷移速度過慢，對富集不利，且過低濃度的基質在進樣端口形成的電場過低，造成樣品進樣不完全，在進樣階段存在樣品損失，降低富集效率，造成實驗結果不穩定，甚至不出峰。因此，樣品基質濃度選擇為1 mmol/L。

3.2水柱長度的影響