呼吸道感染488例非典型病原體及病毒IgM抗體檢測分析

童春堂，車曉宇，李雪輝，尤蘭華，郭沛艷，陳杭薇

目前非典型病原體(主要指肺炎支原體、嗜肺軍團菌)及病毒在呼吸道感染患者中的檢出率日漸升高，隨著檢測方法的改進及研究的深入，該病原體及病毒檢測在呼吸道感染診治中的地位越來越受到臨床醫師的重視。本研究采用間接免疫熒光法(indirect immuno fluorescence，IIF)快速定性檢測住院呼吸道感染患者血清9種常見呼吸道病原體及病毒急性期IgM抗體，現將結果報告如下。

1 對象與方法

1.1 檢測對象 北京軍區總醫院呼吸內科2012年2月1日—2013年5月31日收治呼吸道感染488例，男300例，女188例;年齡17～99(62.3±21.4)歲。病種:急性支氣管炎、肺炎、慢性阻塞性肺疾病急性加重期(acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease，AECOPD)、支氣管擴張、支氣管哮喘急性發作、間質性肺病、肺癌、發熱待查等。

1.2 檢測試劑 9種呼吸道感染病原體及病毒IgM抗體檢測試劑盒為西班牙VIRCELL公司原裝進口產品，購自鄭州安圖科技發展有限公司。采用IIF技術可檢測9種IgM抗體:嗜肺軍團菌(legionella pneumophila，LP)血清1型(孔1)，肺炎支原體(mycoplasma pneumonia，MP，孔2)，貝氏柯克斯體(coxiella burnetii，Cb，孔 3)，肺炎衣原體(chlamydia pneumonia，CP，孔 4)，腺病毒(adenovirus，ADV，孔5)，呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV，孔6)，流感病毒 A(influenza virus A，FluA，孔7)，流感病毒 B(influenza virus B，FluB，孔8)，副流感病毒(parainfluenza virus，PIV)1、2、3 型(孔 9)，孔10為質控孔，有效期內按照試劑盒使用說明書操作。

1.3 檢測方法

1.3.1 標本收集與處理:①患者入院24 h內，靜脈穿刺采集血液2～3 ml，2000 r/min離心5 min后取血清待測，按1∶1比例稀釋血清樣本;②向稀釋后的血清加入吸附劑，以3000 r/min離心10～15 min，于試劑盒內自帶“載玻片”的每孔(9個檢測孔和1個質控孔)中加入15μl處理后血清，于37℃下溫育90 min;③用磷酸鹽緩沖液緩慢沖洗載玻片后放置水平搖床搖動10 min，再用蒸餾水緩慢沖洗;④將載玻片自然晾干，每孔加入15μl熒光素標記的抗人IgM磷酸緩沖液后放入試劑盒37℃溫育30 min，晾干后加封閉介質，加蓋玻片，即刻在熒光顯微鏡下觀察結果，如不能立即觀察，可2～8℃避光放置，但不能超過24 h。

1.3.2 結果判定標準:陽性:FluA、FluB、ADV、PIV、RSV抗原與血清IgM抗體結合后細胞質、細胞核或細胞膜出現蘋果綠色熒光(在PIV、RSV與IgM抗體結合后的細胞中可能同時觀察到著色的合胞);CP、LP、Cb與IgM抗體結合后的整個細胞呈現蘋果綠色熒光;MP與陽性血清結合后在細胞外圍呈現蘋果綠色熒光。陰性:CP、LP和Cb與IgM抗體結合后整個細胞無熒光，MP、FluA、FluB、ADV、PIV 和 RSV與IgM抗體結合后的細胞呈紅色。

1.4 統計學方法 應用SPSS 19.0軟件進行統計學分析，計數資料采用χ2檢驗及Fisher確切概率法，α=0.05為檢驗水準。

2 結果

2.1 呼吸道病原體及病毒IgM抗體檢測結果 488例9種呼吸道病原體及病毒IgM抗體陽性總檢出率為57.0%(278/488，設定1種病原體及病毒IgM抗體陽性即算作1例)，Cb未檢出，見表1。

表1 住院呼吸道感染患者呼吸道病原體及病毒IgM抗體檢測結果(n=488)

2.2 呼吸道病原體及病毒IgM抗體混合感染檢出情況 488例中FluA+FluB陽性9例，FluA+LP陽性11例，FluA+MP陽性7例，FluA+PIV陽性3例，FluB+MP陽性 3例，FluB+LP陽性 2例，FluB+PIV陽性2例，LP+ADV陽性3例，LP+MP陽性4例，LP+PIV陽性1例。兩種及以上混合感染陽性檢出率為13.9%(68/488)，其中 FluA、LP、FluB、MP合并其他病原體及病毒IgM抗體陽性分別為 36、25、20、18 例。

2.3 不同季節、病種、年齡段呼吸道病原體及病毒IgM抗體檢出情況 春季和冬季FluA IgM抗體陽性檢出率分別為 20.0%(40/200)、27.8%(35/126)，顯著高于夏秋季，差異均有統計學意義(P＜0.01);春季LP IgM抗體陽性檢出率為22.0%(44/200)高于秋季的6.0%(5/84)，差異有統計學意義(P＜0.01);其他病原體及病毒不同季節間IgM抗體陽性檢出率差異無統計學意義(P＞0.05)，見表2。不同病種間呼吸道病原體及病毒IgM抗體陽性檢出率比較差異無統計學意義(P＞0.05)，見表3。15～65歲年齡段LP及MP IgM抗體陽性檢出率分別為 19.0%(43/226)、11.9%(27/226)，高于 65～99歲年齡段的 10.7%(28/262)、6.1%(16/262)，差異均有統計學意義(P＜0.05)，兩年齡段其余病原體及病毒IgM抗體陽性檢出率比較差異無統計學意義(P＞0.05)，見表4。

表2 住院呼吸道感染患者不同季節呼吸道病原體及病毒IgM抗體陽性檢出結果

表3 不同病種住院呼吸道感染患者呼吸道病原體及病毒IgM抗體陽性檢出結果

表4 不同年齡住院呼吸道感染患者呼吸道病原體及病毒IgM抗體陽性檢出結果

注:FluA:流感病毒A，LP:嗜肺軍團菌，MP:肺炎支原體，FluB:流感病毒B，PIV:副流感病毒，ADV:腺病毒，RSV:呼吸道合胞病毒，CP為肺炎衣原體;aP＜0.05

3 討論

研究表明，近年來肺炎鏈球菌的感染率有所下降，而呼吸道非典型病原體及病毒的感染率不斷上升［1-2］。呼吸道非典型病原體及病毒致病性強、傳播快、起病急，人群不易形成持久免疫力，臨床特征缺乏特異性，容易造成抗生素的濫用，給疾病的診治及防控造成了一定的困難［3］。因而，快速高效地檢出呼吸道非典型病原體及病毒對疾病的及時診治及疫情報告有重要意義。

呼吸道非典型病原體及病毒的檢測方法包括病原體的分離和培養、血清學檢測和聚合酶鏈反應(PCR)等方法，但上述方法由于檢測時間長、操作復雜、設備昂貴等缺點而導致病原診斷延遲。本研究采用IIF檢測9種呼吸道病原體及病毒IgM抗體，該法可對血清中反映新近發生感染的急性期IgM抗體進行定性檢測［4］，具有檢測快速、操作簡便、準確性高、檢測范圍廣、利于早期發現且價格低廉等優點［5］。本研究結果顯示，488例9種呼吸道病原體及病毒IgM抗體陽性總檢出率高達57.0%，以FluA IgM抗體陽性檢出率最高，其次為LP、MP、FluB，高于劉又寧等［6］2004年進行的一項呼吸道病原學調查結果。考慮此次檢測對象并不能排除有IgM抗體長期攜帶者，因有相關研究報道部分呼吸道感染患者產生的IgM抗體可持續存在1年或更長時間［7］。本研究488例中存在一定比例的混合感染，以FluA、LP、FluB、MP合并其他病原體及病毒最為多見，再度證明了FluA、LP和MP是呼吸道感染的主要病原［8-9］，混合感染是其特點［10-12］，提示臨床醫師應當重視非典型病原體及病毒在成人呼吸道感染中的危害。

本研究結果顯示，FluA IgM抗體在春季和冬季的陽性檢出率均顯著高于夏秋季節;而春季LP IgM抗體陽性檢出率高于秋季，與文獻［13］報道不太相符。本研究結果還顯示，呼吸道非典型病原體及病毒在15～65歲年齡段患者中LP及MP IgM抗體陽性檢出率較高，與智霞萍等［14］調查結果一致。提示呼吸道非典型病原體及病毒的分布與患者檢測季節、年齡密切相關，與近年流感流行的季節相符。上述結果對呼吸道感染患者的臨床經驗性治療有著重要的指導意義。

綜上所述，呼吸道非典型病原體及病毒為呼吸道感染的重要病原，其混合感染不容忽視，此外還應重視季節、年齡、環境等因素對呼吸道非典型病原體及病毒分布的影響。

［1］ Ruiz González A，Falguera M，Nogués A，et al.Is Streptococcus pneumoniae the leading cause of pneumonia of unknown etiology?Amicrobiologic study of lung aspirates in consecutive patients with community-acquiredpneumonia［J］.Am J Med，1999，106(4):385-390.

［2］ Capelastegui A，Espa?a PP，Bilbao A，et al.Etiology of community-acquired pneumonia in a population-based study:link between etiology and patients characteristics，process-of-care，clinical evolution and outcomes［J］.BMC Infect Dis，2012，12:134.

［3］ 尤蘭華，郭沛艷，李雪輝，等.兒童呼吸道非典型病原體的檢測及方法評價［J］.西部醫學，2013，25(1):46-47，50.

［4］ 龔非力.醫學免疫學［M］.2版.北京:科學出版社，2007:35.

［5］ 秦茵茵，吳國鋒，秦笙，等.九項呼吸道聯檢試劑對多種呼吸道感染病原體檢測的臨床意義［J］.中華生物醫學工程雜志，2012，18(2):124-127.

［6］ 劉又寧，趙鐵梅，姚婉貞，等.北京地區成人社區獲得性肺炎非典型病原體流行病學調查［J］.中華結核和呼吸雜志，2004，27(1):27-30.

［7］ Thacker W L，Talkington D F.Analysis of complement fixation and commercial enzyme immunoassays for detection of antibodies to Mycoplasma pneumoniae in human serum［J］.Clin Diagn Lab Immunol，2000，7(5):778-780.

［8］ 葉婷，劉靳波，鄧劍，等.瀘州地區冬春季兒童呼吸道感染病原體研究［J］.現代醫藥衛生，2012，28(24):3687-3688，3690.

［9］ 劉曉宇，徐華，戴宏偉，等.小兒重癥肺炎支原體肺炎20例臨床分析［J］.空軍醫學雜志，2010，26(4):194-195.

［10］鮑中英，苑曉冬，王蕾，等.402例社區獲得性肺炎的發病狀況及病原學分析［J］.中華全科醫學，2013，11(3):362-363.

［11］郝麗杰，馮明，李耘.老老年社區獲得性肺炎44例臨床分析［J］.疑難病雜志，2011，10(5):339-341.

［12］崔振澤，陳海霞，黃燕.兒童社區獲得性肺炎住院患兒366例肺炎支原體感染狀況的觀察［J］.中國醫藥，2010(1):71-72.

［13］張穎，張健，鞏向麗，等.2006～2010年廣州市公共場所軍團菌污染狀況分析［J］.中國衛生檢驗雜志，2012(4):820-822，824.

［14］智霞萍，王素萍，趙啟玉，等.太原地區成人及兒童社區獲得性肺炎非典型病原體流行病學調查［J］.中國藥物與臨床，2009，9(5):367-371.