阿托伐他汀對老年大鼠心肌過氧化氫、丙二醛及谷胱甘肽過氧化物酶水平的影響

韓 磊 ，葉 平 ，李鳴皋

近年來，他汀類藥物的作用越來越為廣大學者所重視。大量的研究證實，除調脂作用外，他汀類藥物還具有抑制炎性反應、改善心室重構、保護血管內皮等多種保護作用［1-4］。然而，有關他汀類藥物與衰老及氧化應激方面的研究少見報道。本研究以老年大鼠為研究對象，觀察老年大鼠心肌過氧化氫(H2O2)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)等氧化應激與衰老相關指標的變化及阿托伐他汀干預對上述指標的影響，進而為研究衰老的病理生理機制和干預手段提供實驗數據。

1 材料與方法

1.1 動物 10月齡 Wistar大鼠90只［體質量(586.67±39.40)g］、3月齡 Wistar大鼠30只［體質量(245.83±11.38)g］(北京維通利華公司)，雌雄各半。

1.2 試藥、試劑與儀器 阿托伐他汀(大連輝瑞制藥有限公司，批號:73837005)，H2O2、MDA、GSH-Px檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所)，臺式高速離心機(Sigma公司)，高速冷凍離心機(Heraeus Labofuge 400)，水浴鍋(北京長風儀器儀表公司)，721A型分光光度計(上海光學儀器廠)。

1.3 方法

1.3.1 動物模型建立與分組:將90只10月齡Wistar大鼠飼養至20月齡后，隨機分成老年對照組、高劑量阿托伐他汀組(高劑量組)和低劑量阿托伐他汀組(低劑量組)，每組30只。將30只3月齡Wistar大鼠作為青年對照組，正常飼養，不做任何處理。

1.3.2 處理方法:高、低劑量組分別給予阿托伐他汀10 mg/(kg·d)和1 mg/(kg·d)灌胃，老年對照組大鼠給予等體積的0．9%氯化鈉溶液灌胃，共4個月。

1.4 心肌H2O2、MDA及GSH-Px含量的測定 常規麻醉大鼠，留取大鼠心肌標本。采用H2O2、MDA及GSH-Px檢測試劑盒，嚴格按說明書操作測定各組大鼠心肌H2O2、MDA及GSH-Px含量。

1.5 統計學方法 應用SPSS 13．0軟件進行統計學處理。計量資料以均數±標準差(±s)表示，組間比較采用單因素方差分析，α=0．05為檢驗水準。

2 結果

老年對照組心肌H2O2、MDA含量顯著高于青年對照組(P＜0．01)，GSH-Px活性顯著低于青年對照組(P＜0．01);高、低劑量組心肌H2O2、MDA含量均顯著低于老年對照組(P＜0.05，P＜0.01)，GSHPx活性顯著高于老年對照組(P＜0．01);高、低劑量組H2O2、MDA含量均顯著高于青年對照組(P＜0．05，P ＜0．01)，而 GSH-Px活性顯著低于青年對照組(P＜0．01)。與低劑量組比較，高劑量組上述3種指標變化更為顯著(P ＜0．05，P ＜0．01)。見表1。

表1 各組大鼠心肌過氧化氫、丙二醛及谷胱甘肽過氧化物酶水平變化情況(±s)

表1 各組大鼠心肌過氧化氫、丙二醛及谷胱甘肽過氧化物酶水平變化情況(±s)

注:青年對照組:3月齡Wister大鼠不做任何處理，老年對照組、高劑量組、低劑量組:20月齡Wister大鼠分別予0．9%氯化鈉溶液及阿托伐他汀10 mg/(kg·d)、1 mg/(kg·d)灌胃;*為灌胃4個月存活大鼠數;與青年對照組比較，a P＜0.05，b P ＜0．01;與老年對照組比較，c P ＜0．05，d P ＜0．01;與低劑量組比較，e P ＜0．05，f P ＜0．01

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3 討論

隨著老齡化社會的來臨，衰老及與衰老相關疾病導致的健康問題日益凸顯，衰老的病理生理機制及其干預措施也日益成為廣大醫務工作者關注的熱點。目前在衰老發生機制方面有多種學說［5］，主流的學說主要有衰老基因學說、復制性衰老理論與端粒酶學說、線粒體自由基學說、DNA損傷理論學說等，其中線粒體自由基學說具有較重要的地位。根據線粒體自由基學說［6-9］，代謝中產生的大量自由基如超氧陰離子(O2－)、過氧化脂質等是導致機體衰老的重要原因;過量表達的自由基會導致細胞膜與線粒體等細胞重要結構的損傷，還可引起蛋白質與酶的活性發生變化;當這種損傷超過了機體的承受能力時，就可引起細胞分化狀態的改變和喪失，最終導致與加速衰老的發生。

H2O2、MDA、GSH-Px等作為反映機體衰老與氧化應激水平的指標，已為研究者所公認。既往研究證實，MDA、H2O2在生物體內的含量隨年齡的增長而增高，GSH-Px活性降低［10-13］。上述指標在研究中亦常用于評價抗氧化及抗衰老干預措施的效果［14-16］。因此，本研究選擇上述指標作為反映老年大鼠心臟氧化應激水平和衰老狀態及評價阿托伐他汀干預效果的指標。

本研究結果表明，老年對照組心肌 H2O2及MDA含量較青年對照組顯著增高，GSH-Px活性顯著降低。這一結果提示，一方面，24月齡Wistar大鼠心臟出現了顯著的衰老性改變;另一方面，也提示老年大鼠心臟氧化應激水平較青年大鼠有了顯著提高，再次驗證了脂質過氧化在衰老發生、發展過程中起著重要的作用。

近年來，關于他汀類藥物在心血管保護作用方面的研究較多，但既往研究多集中于他汀類藥物在病理情況下的作用，而有關他汀類藥物長期干預在生理衰老情況下尤其是在心臟老化方面的研究則少有報道。本研究結果顯示，經過4個月的阿托伐他汀干預后，老年大鼠心肌H2O2、MDA含量顯著升高，GSH-Px活性顯著降低，提示阿托伐他汀可以顯著抑制心臟的衰老性改變;同時也提示，阿托伐他汀對抗大鼠心臟衰老性改變的作用可能與其對心臟脂質過氧化水平的抑制有關。既往研究也顯示，阿托伐他汀的長期干預可顯著增強大鼠心肌過氧化氫酶、超氧化物歧化酶、一氧化氮合酶等抗氧化酶的活性，也從另一個側面提示其抗衰老作用可能與其增強抗氧化酶活性、抑制脂質過氧化水平有關。此外，本研究結果顯示，高、低劑量組MDA、H2O2、GSH-Px水平較青年對照組仍有顯著差異，表明盡管阿托伐他汀干預可顯著抑制老年大鼠心肌的脂質過氧化水平，但仍未達到青年對照組水平。提示，阿托伐他汀干預并不能完全逆轉老年大鼠心肌過氧化水平，通過藥物干預只能延緩心臟衰老性改變，并不能完全逆轉這一生理趨勢。目前，關于阿托伐他汀抗衰老及抗氧化作用的具體機制尚不清楚，還需進一步研究。

［1］ Delgado Montero A，Zamorano J L．Atorvastatin calcium plus amlodipine for the treatment of hypertension［J］．Expert Opin Pharmacother，2012，13(18):2673-2685．

［2］ Kotl?ga D，Ciecwiez S，Turowska Kowalska J，et al．Pathogenetic justification of statin use in ischaemic stroke prevention according to inflammatory theory in development of atherosclerosis［J］．Neurol Neurochir Pol，2012，46(2):176-183．

［3］ 李曉濤，張惠軍，郭喜朝，等．阿托伐他汀對冠心病患者血清脂聯素和瘦素的影響［J］．首都醫科大學學報，2012，33(1):126-127．

［4］ Padhy B M，Yadav R，Gupta Y K．Hypolipidaemic and anti-inflammatory effects of fixed dose combination of atorvastatin plusezetimibe in Indian patients with dyslipidaemia［J］．Singapore Med J，2013，54(2):90-95．

［5］ 王福龍，王甄真，陳雁．衰老的分子機制與干預研究的最新進展［J］．中國細胞生物學學報，2012，34(8):739-748．

［6］ Schon E A，Przedborski S．Mitochondria:the next(neurode)generation［J］．Neuron，2011，70(6):1033-1053．

［7］ Harman D．Aging:a theory based on free radical and radiation chemistry［J］．JGerontol，1956，11(3):298-300．

［8］ Ashok B T，Ali R．The aging paradox:free radical theory of aging［J］．Exp Gerontol，1999，34(3):293-303．

［9］ Johnson F B，Sinclair D A，Guarente L．Molecular biology of aging［J］．Cell，1999，96(2):291-302．

［10］劉靈芝．丹紅注射液對自然衰老大鼠心臟、大腦組織SOD、MDA及GSH-Px的影響［J］．中國實用神經疾病雜志，2012，15(17):73-74．

［11］張書偉，張莉蓉．兩頭毛水提物對衰老小鼠心、肝及腎組織中MDA、GSH和SOD含量的影響［J］．鄭州大學學報(醫學版)，2011，46(5):735-736．

［12］魏曉東，鄧連瑞，張惠丹，等．靈芝多糖抗H2O2誘導的HDF細胞衰老及其機制的研究［J］．中國老年學雜志，2009，29(11):1347-1349．

［13］黃俊杰，王彩冰，黃麗娟，等．maFGF對慢性衰老大鼠肝組織ATP酶、SOD活力及丙二醛和羥自由基水平的影響［J］．重慶醫學，2011，40(34):3469-3471．

［14］宮鐵紅，付淑華，牛嗣云，等．衰老大鼠睪丸組織SOD、MDA和血清睪酮含量的變化［J］．承德醫學院學報，2012，29(1):14-16．

［15］鄧彩霞，藍賢俊，農文田，等．川芎對衰老小鼠腦組織SOD和MDA及羥自由基的影響［J］．醫學理論與實踐，2012，25(5):499-500．

［16］欒增強，曹文富，黃和賢，等．延衰合劑對D-半乳糖衰老小鼠血清SOD、MDA、IL-2和睪酮的影響［J］．中國藥房，2011，22(7):589-591．