不同取材及處理方法對脂肪細胞影響的研究

趙延峰，董稚明，董宏華，陶紅宇

（1.石家莊星源醫療美容醫院河北石家莊050000；2河北醫科大學附屬第四人民醫院病理科河北石家莊050000）

不同取材及處理方法對脂肪細胞影響的研究

趙延峰1，董稚明2，董宏華1，陶紅宇1

（1.石家莊星源醫療美容醫院河北石家莊050000；2河北醫科大學附屬第四人民醫院病理科河北石家莊050000）

目的：探討不同取材及處理方法對脂肪細胞的影響。方法：隨機選取臨床行脂肪移植的就醫者10名，在同一受術者雙側大腿前內側分別用20ml注射器及吸脂機（吸脂負壓60kPa）抽吸脂肪，吸脂針頭直徑均為2.5mm，將取出的脂肪經過靜置及不同轉速和不同時間的離心處理，采用完整脂肪細胞計數及組織學觀察脂肪細胞的形態。結果：應用注射器法和吸脂機法吸出的脂肪經靜置后，兩組在完整脂肪細胞計數上無統計學差異，組織學也顯示兩組的脂肪細胞細胞壁均較完整；對比不同轉速（1000轉2min和3000轉2min）完整脂肪細胞計數情況，分別為77%和74.5%，兩者無統計學差異；對比不同離心時間（2000轉1min和2000轉3min），兩組完整脂肪細胞比率分別為71%和68.7%，兩組差異無統計學意義。組織學上看到，高的離心轉速和長的離心時間相對于低的轉速及短的離心時間而言，在脂肪細胞擠壓變形及細胞壁受壓情況要更加明顯一些。離心后與離心前完整脂肪細胞計數無統計學差異，但組織學切片上仍可觀察到離心后較離心前脂肪細胞有不同程度的變形。結論：在一定離心轉速及離心時間范圍內，離心與否以及不同轉速與時間在脂肪細胞完整率上無明顯差別，離心與靜置相比以及高的離心轉速和長的離心時間較低的離心轉速和短的離心時間相比，脂肪細胞受壓變形更明顯一些。

脂肪移植；脂肪細胞；組織學

自體脂肪移植是目前臨床上應用比較廣泛的一項技術，如用于隆乳、額顳部及面頰部填充、各部位凹陷畸形的填充矯正等等[1,7]。自體脂肪移植在臨床應用中與效果最密切的就是移植脂肪成活的多少，而影響成活率的關鍵之一就是脂肪細胞的提取和處理過程，目前爭議的焦點多集中在注射器手動吸脂還是吸脂機電動吸脂以及過濾離心的應用等，對此學者們各自發表了不同的看法和觀點[2-10]，但均缺乏系統詳盡的研究，為進一步明確這些問題筆者進行了以下研究。

1 資料和方法

1.1 研究對象：選取臨床行自體脂肪移植的就醫者10例，均為女性，年齡22～42歲，平均28歲，其中自體脂肪隆乳5例，豐臀1例，額顳部填充4例。脂肪均取自大腿。

1.2 方法：將就醫者依手術時間標記為1～10號，奇數號左側用注射器手動抽吸（20ml抽吸前預抽5ml鹽水），右側采用電動吸脂機抽吸（負壓60kPa）；偶數號者反之。術前注射同樣配比的腫脹液（500ml鹽水+2%利多卡因15ml+0.5ml腎上腺素），在同一受術者雙側大腿前內側分別用注射器及吸脂機抽脂，吸脂針直徑均為2.5mm。分別靜置10min，對比注射器和吸脂法脂肪細胞的情況，然后進行離心，注射器法分別用1 000轉2min及3 000轉2min進行離心以比較不同轉速的影響，吸脂機抽吸的脂肪靜置后分別用2 000轉1min和2 000轉3min進行離心以比較不同離心時間的影響，以上分別標記為A～F組（見圖1），脂肪細胞提取和以上處理均由同一術者完成。然后分別計算每組的平均完整脂肪細胞比率并對每組的脂肪細胞進行組織學觀察。組織學觀察由同一病理醫師完成。對完整脂肪細胞比率采用SPSS20.0統計軟件進行配對檢驗。

1.3 完整脂肪細胞比率的計算方法及實驗步驟

1.3.1 完整脂肪細胞比率的計算方法：顯微鏡下選取脂肪組織完整的部位，在高倍鏡（×400）下計數500個脂肪細胞，以完整脂肪細胞數/總脂肪細胞數×100%得出完整脂肪細胞百分率。

1.3.2 實驗步驟：①應用不同方法采集的脂肪組織經OTC包埋，連續5um冰凍切片；②冰凍切片經吹風機吹干，雙蒸水浸泡2min×2；③蘇木素染色1min，雙蒸水洗1 min×2，鹽酸酒精分化，雙蒸水洗1 min×2；④伊紅染色30s，梯度酒精脫水；⑤樹膠封片，顯微鏡觀察。

圖1實驗方法組織結構圖

2 結果

2.1 各組完整脂肪細胞百分率見表1。

2.2脂肪細胞組織學觀察：A組：細胞壁完整，有血管、纖維，發育尚未成熟的脂肪細胞，脂肪細胞無變形（圖1）；B組：脂肪細胞基本完好，部分細胞壁受擠壓有破裂（圖中右側）（圖2）；C組：部分細胞壁受擠壓有破裂，呈現融合（圖3）；D組：細胞壁完整，脂肪細胞無明顯變形及破裂（圖4）；E組：細胞形態雖然有擠壓、變形，但基本完好（圖5）；F組：細胞有較明顯的受擠壓，呈現細胞影（右下方呈現破潰）（圖6）。

圖1細胞壁完整，有血管、纖維，發育尚未成熟的脂肪細胞，脂肪細胞無變形；圖2脂肪細胞基本完好，部分細胞壁受擠壓有破裂（圖中右側）；圖3部分細胞壁受擠壓有破裂，呈現融合；圖4：細胞壁較完整，脂肪細胞無明顯變形及破裂；圖5細胞形態雖然有擠壓、變形，但基本完好；圖6細胞有較明顯的受擠壓，呈現細胞影（右下方呈現破潰）。

3 討論

整形美容外科臨床中自體脂肪移植應用范圍廣泛，但脂肪移植后的吸收是一個影響術后效果的決定因素，移植后的吸收很大程度上取決于提取過程脂肪的破壞情況，對于提取和處理方法目前探討較多的是注射器和吸脂機吸脂的不同以及離心與否和離心速度及離心時間的不同對脂肪細胞的影響[2-6]。通過筆者本次研究，注射器法吸出脂肪靜置后（A組）和吸脂機吸出脂肪靜置后（D組）兩組在完整脂肪細胞計數上無統計學差異，組織學也顯示兩組的脂肪細胞細胞壁均較完整，脂肪細胞無明顯變形及破裂（圖1、圖4）。進一步研究離心轉速和離心時間對脂肪細胞完整率的影響情況，對比B（1 000轉2min）和C組（3 000轉2min）完整脂肪細胞計數情況，B組為77%，C組為74.5，兩者無統計學差異，提示離心轉速對脂肪細胞完整性無明顯影響（轉速過大的情況除外），然后對比E組（2 000轉1min）和F組（2 000轉3min），E組為71%，F組為68.7%，兩組差異無統計學意義，提示離心時間對完整脂肪細胞計數無明顯影響。但同時在組織學上筆者看到，雖然完整脂肪細胞計數無明顯差異，但高的離心轉速（C組）和長的離心時間（F組）較低的轉速（D組）及短的離心時間（E組）在脂肪細胞擠壓變形上還是有組織學差異的，前者情況脂肪細胞細胞壁受壓情況要更加明顯一些（圖2～3；圖5～6）。同樣離心后與離心前完整脂肪細胞計數無統計學差異，但組織學切片上仍可觀察到離心后較離心前脂肪細胞有不同程度的變形（圖2、3Vs圖1；圖5、6Vs圖4）。而對于變形但細胞壁尚完整的脂肪細胞在移植后的成活是否會明顯低于無變形的脂肪細胞尚需進一步研究。

表1 10名病例完整脂肪細胞百分率（%）

張新合等[2]曾對比減碎法、注射器法及吸管法三種方法對脂肪細胞的損傷程度進行了研究，得出剪碎法對脂肪細胞損傷率為8.6%±1.8%；注射器法為15.7%±2.4%；吸管法為76.4%±8.7%，而得出結論剪碎法對脂肪細胞損傷程度最輕，注射器法居中，吸管法損傷最重。但他們用吸管法吸脂的吸引頭直徑8mm，負壓一個標準大氣壓（相當于101kPa），而筆者采用的吸引頭直徑是2.5mm，負壓是60kPa，吸力過大筆者認為是實驗中造成脂肪破壞過多的重要原因，而注射器法的研究中，他們應用的是22號鈍頭抽吸針和20ml注射器，與筆者應用的2.5mm直徑抽吸針和注射器大小基本一致，故得出的注射器法的脂肪細胞破壞率基本一致。根據研究結果，筆者認為只要在低負壓和同樣吸脂管徑的情況下，注射器法和吸脂機抽吸對脂肪細胞的完整性無明顯影響。臨床上可根據具體情況選用，對于只進行面部填充等需要小量脂肪時可采用注射器抽吸，根據筆實驗結果，筆者推薦還是進行離心，這樣可以使水和油滴進一步分離，提高有效脂肪細胞數量同時減少油滴注入后栓塞等嚴重并發癥的風險，離心速度和時間筆者推薦3 000轉3min。對于如自體脂肪豐胸需要大量脂肪時筆者推薦還是吸脂機低負壓吸引。

本次試驗中筆者還看到個別病例（病例3，見表1紅色斜體）完整脂肪細胞比例在各個處理環節都比較少，而部分病例（病例10，見表1綠色斜體）則情況相反，提示在相同提取和處理條件的情況下，脂肪細胞完整性還因個體差異而有明顯不同，鑒于此，術前與就醫者溝通時應予以提示。

[1]王陽,戚可銘,馬越波,等.我院自體脂肪顆粒注射移植十年回顧[J].中華整形外科雜志,2002,18（2）：95-97.

[2]張新合,郭東來,高建華.取材方法對脂肪細胞損傷程度的人體觀察[J].中華整形外科雜志,2001,17（5）：290-291.

[3]李青峰.自體脂肪顆粒移植臨床應用回顧與分析[J].中國美容醫學,2005,14（1）：17-18.

[4]Boschert MT,Beckert BW,Puckett CL,et al.Analysis of lipocyte viability after liposuction[J].Plast Reconstr Surg, 2002,109(2):761-765.

[5]Botti G1,Pascali M,Botti C,et al.A Clinical Trial in Facial Fat Grafting:Filtered and Washed versus Centrifuged Fat[J]. PlastReconstr Surg,2011,127(6):2464-2473.

[6]高明英,李禹楠,孫曉杰.提高自體脂肪移植成活率的研究進展及臨床應用[J].吉林醫學,2013,34（4）：719-721.

[7]司義湘,曾詔群,梁曉媚.自體顆粒脂肪移植在整形美容術中的應用體會[J].中國美容醫學,2014,23（10）:796-797.

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[9]李雅進,馬桂娥.提高自體脂肪顆粒移植成活率的研究進展[J].中國美容醫學,2012,21(10):1881-1883.

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編輯/張惠娟

Rea rch o f the ad ipoc yte inju ries o f d iffe ren t ha rvesting and p rocessing m e thods.

ZHAO Yan-feng1,DONG Zhi-m ing2,DONG Hong-hua1,TAO Hong-yu1
（1.Shijiazhuang Xingyuan Cosm etic Hospital,Shijiazhuang,Shijiazhuang 050000,Hebei,China; 2.Department of Pathology,The Fourth Peop le's Hosp ital Affiliated to Hebei Medical University, Shijiazhuang 050000,China）

Ob jective To research the influence to ad ipocyte of different obtain and p rocessing m ethod.M ethods We have choose 10 patients that undergo fat transp lantition,liposuction was done w ith syringe(20m l)and fat attac ting machine(60kPa negative p ressure)from b ilateral inner thighrespec tively,diameter of liposuc tion need le was 2.5mm.Fat that gained was standing and then centrifugation by different rpm and time.The fat cells were evaluated underm icroscope and comp lete fat cell count.Resu lts Ratio of com p lete fat cellwas sim ilar between syringe g roup and fat attacting m achine group.To d ifferent centrifugalspeed(1000rpm and 3000rpm),ratio of comp lete fat cellwas 77%and 74.5%respec tively and has no statistical differences.To d ifferent centrifugal time(1m in and 3m in),ratio of comp lete fat cellwas 71%and 68.7%respectively and has no statisticald ifferences.But by histolog ical observe,higher centrifugal speed and longer centrifugal tim e has m ore obvious deformation of ad ipocyte than lower centrifugalspeed and short centrifugal time.Ratio of comp lete fat cell has no statistical differences between groups that before and after the centrifugal.Conclusion Centrifugal or not and different speed and tim e that within a certain range has no obvious difference on the com p lete rate in fat cells.higher centrifugal speed and longer centrifugal time has more obvious deformation of adipocyte than lower centrifugalspeed and short centrifugal time.

fat transp lantation;adipocye;histology

Q813.1

A

1008-6455（2014）22-1896-04

2014-09-16

2014-10-29