麻桔喘咳口服液對大鼠實驗性肺心病的影響

盧 云

(成都中醫藥大學附屬醫院，成都 610072)

慢性肺源性心臟病(簡稱肺心病)在我國是常見病、多發病，平均患病率為0.4%～0.47%。據估計，目前我國肺心病患病人數為550萬，由于肺心病是原發于重癥胸肺、肺血管基礎疾病的晚期并發病，后期累及心、肺，并發癥多而復雜、危重，住院病死率達15%左右。肺心病中81.8%的患者由慢性阻塞性肺疾病發展而來，隨著近年來慢阻肺發病率的增加，肺心病發病率也呈上升趨勢，嚴重影響了患者的生活質量[1]。自1993年以來我們在陳紹宏教授、張曉云教授帶領下開展了中西醫結合治療肺心病急性期的研究，于2006年開始采用循證醫學原則，按照《臨床藥品臨床試驗管理規范(GCP)》要求，進行前瞻性、多中心、隨機對照臨床研究，并研究了一個適合中國國情的中西醫結合治療肺心病的綜合治療方案，此方案可以降低病死率和致殘率，改善心肺功能，減少平均住院天數和復發次數，降低住院費用，提高生活質量。在此基礎上我們還開展了慢性肺源性心臟病急性發作期中醫綜合序貫治療方案研究和慢性肺源性心臟病急性發作期中藥篩選優化研究，證實三拗湯、栝樓薤白半夏湯(去白酒)、桔梗湯三方合方治療慢性肺源性心臟病急性發作期安全有效，說明中西醫結合治療肺心病急性發作期具有明顯的優勢。麻桔喘咳口服液是我們在前期工作基礎上開發的中藥制劑，目的在于為肺心病急性發作期患者提供一種新的簡便高效的中成藥合劑，本文報告了該藥對大鼠實驗性肺心病的治療作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

SD清潔級大鼠，體質量180～220 g，雌雄各半，由四川省實驗動物專委會養殖場提供(許可證號SCXK(川)2008-14)。動物飼養于成都中醫藥大學附屬醫院藥理實驗室(實驗動物使用許可證號SYXK(川)2008-028)。飼養觀察室溫度22～24 ℃，相對濕度65%～75%。全價鼠顆粒料由四川省實驗動物專委會養殖場提供。

1.2 藥品與試劑

1.2.1 實驗藥品 麻桔喘咳口服液由成都中醫藥大學附屬醫院藥劑科提供(麻桔喘咳口服液為院內制劑，批號20110908)，含量為3.5 g生藥/ml，臨床用量為1 g/kg。根據急性毒性試驗結果及臨床用量，臨用前將麻桔喘咳口服液用蒸餾水分別配成1.2、0.6與0.3 g生藥/ml的藥液，以10 ml/kg灌胃供大鼠試驗用，即高、中、低劑量組分別為臨床用藥劑量的12倍、6倍、3倍(根據動物體表面積計算，相當于人等效劑量的2倍、1倍、0.5倍)。肺力咳膠囊0.3 g/粒，貴州健興藥業有限公司生產(批號20110304、20120308，批準文號國藥準字Z20025420)，臨用前用蒸餾水將其配成0.108 g生藥/ml混懸液供大鼠試驗用，用蒸餾水配成0.075 g生藥/ml混懸液供小鼠試驗用。卡托普利片25 mg/片，汕頭金石制藥總廠生產(批號120109，批準文號國藥準字H44024904)，臨用前用蒸餾水配成1 mg/ml混懸液供大鼠試驗用。

1.2.2 實驗試劑 野百合堿由sigma公司生產，進口分裝；無水乙醇，分析純，成都金山化學試劑有限公司，500 ml/瓶(批號20110606)；烏來糖，國藥集團化學試劑有限公司，500 g/瓶(批號T20050610)；0.9%氯化鈉注射液，四川美大康佳藥業有限公司生產，500 ml/瓶(批號100722103，批準文號國藥準字H51022439)；內皮素檢測試劑盒，北京北方生物技術研究所(批號20120306)；NO檢測試劑盒，南京建成生物工程研究所(批號20120405)。

1.3 儀器

十萬分之一電子分析天平，德國Sartorius；電子天平T-1000型，美國G&G；BASIC半自動生化儀，法國SECOMAM；高壓滅菌鍋(YX-280D)，合肥華泰醫療設備有限公司。

1.4 方法

SD大鼠56只，體質量180～220 g，雌雄各半。按體質量和性別隨機分為7組，每組8只，分別為麻桔喘咳口服液高劑量組(12 g生藥/kg)、中劑量組(6 g生藥/kg)、低劑量組(3 g生藥/kg)，以下簡稱高劑量組、中劑量組、低劑量組和肺力咳組(1.08 g/kg)、卡托普利組(10 mg/kg)、模型組和正常對照組。除正常對照組外，各組大鼠以1%野百合堿溶液(無水乙醇∶生理鹽水=2∶3)腹腔一次性注射造模5 ml/kg，劑量為50 mg/kg。造模后1周開始灌胃給藥，每日1次，給藥容量為10 ml/kg，正常對照組及模型組灌胃等容量的蒸餾水，連續給藥14 d。末次灌胃給藥1 h后，眼眶后靜脈叢取血。分離血清，分光光度法檢測一氧化氮NO含量；分離血漿，放免法檢測內皮素ET-1含量。處死大鼠，取心臟解剖分離右心室(RV)和左心室(LV)+室間隔(S)分別稱重，計算各組右心肥厚指數。右心肥厚指數=右心室/(左心室+室間隔)，即RV/(LV+S)。以t檢驗對各組NO、ET-1、RV/(LV+S)進行比較，差異有統計學意義(P<0.05)。

1.5 統計學方法

取肺投入10%甲醛溶液中固定、石蠟包埋，切片4 μm，HE染色，光鏡下觀察。

1.5.1 肺動脈面積、肺動脈血管壁面積觀察檢測 先用低倍(100×)觀察HE染色切片肺組織內肺動脈，尋找5個肺動脈橫斷面大小接近的肺動脈作為測量目標，然后在中倍(200×)鏡下用圖像分析系統(Mias2000)測量5個肺動脈橫斷面血管的面積及相應肺動脈管壁面積，計算5個肺動脈橫斷面面積之和、5個肺動脈橫斷面管壁面積之和，表示肺動脈面積、肺動脈管壁面積。

1.5.2 肺動脈管腔面積檢測 上述5個肺動脈橫斷面面積之和減去相應5個肺動脈橫斷面管壁面積之和等于5個肺動脈橫斷面管腔面積之和，表示肺動脈管腔面積。

1.5.3 肺動脈血管壁面積絕對值、血管腔面積絕對值計算 為排除因選擇肺動脈大小不一致所致肺動脈管壁和管腔大小不一致導致的統計差異，統計時采用肺動脈管壁和肺動脈管腔的絕對值進行統計。肺動脈管壁面積絕對值=肺動脈管壁面積/肺動脈面積，肺動脈管腔面積絕對值=肺動脈管腔面積/肺動脈面積。

1.6 統計學方法

采用SPSS17.0統計軟件進行統計處理，計量資料用One-Way ANOVA-t檢驗，組間比較采用t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

表1顯示，與對照組比較，模型組大鼠血液中ET-1含量升高，NO含量降低，差異有統計學意義(P<0.05)，表明模型組大鼠形成肺心病模型的ET-1/NO失衡，血管收縮因子ET-1增加，血管舒張因子NO減少。與模型組比較，麻桔喘咳口服液能降低血漿ET-1水平，其中麻桔喘咳口服液中劑量組(6 g生藥/kg) 與模型組比較差異有統計學意義(P<0.01)；同時麻桔喘咳口服液能升高血清NO水平，中劑量組 (6 g生藥/kg)、小劑量組(3 g生藥/kg)與模型組比較差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01)。上述結果表明，麻桔喘咳口服液能通過降低ET-1水平、增加NO水平，從而改善肺心病模型的ET-1/NO失衡。與模型組比較，陽性藥卡托普利(10 mg/kg)同樣能明顯降低ET-1水平，增加NO水平(P<0.05)。

表1顯示，與對照組比較，模型組大鼠右心肥厚指數增高，差異有統計學意義(P<0.01)。與模型組比較，麻桔喘咳口服液給藥組右心肥厚指數有下降趨勢，但與模型組比較差異無統計學意義。陽性藥卡托普利(10 mg/kg)能明顯降低右心肥厚指數 (P<0.05)，說明卡托普利能減輕野百合堿所致肺心病大鼠右心肥厚。

表1 麻桔喘咳口服液對肺心病大鼠ET-1、NO、右心肥厚指數的影響

注：與對照組比較:#P<0.05，##P<0.01；與模型組比較:*P<0.05，**P<0.01

表2顯示，病理組織學統計結果顯示，麻桔喘咳口服液能不同程度地使肺動脈血管壁面積縮小，即使肺動脈血管壁變薄，同時使血管腔面積增大；麻桔喘咳口服液低劑量組可顯著降低肺動脈血管壁厚度、增加血管腔面積；麻桔喘咳口服液大、中劑量組有降低肺動脈血管壁厚度和增加血管腔面積的趨勢。

表2 麻桔喘咳口服液對肺心病大鼠肺動脈血管壁面積絕對值及血管腔面積絕對值的影響

注：與模型組比較：*P<0.05，與模型組比較：**P<0.01

病理照片如下：

4 討論

慢性肺源性心臟病屬于中醫“喘證、痰飲、肺脹”范疇。我們前期研究發現，肺心病急性發作期的基本病機為痰濕蘊肺、肺氣閉郁，以宣肺平喘、化痰止咳為治法。我們體會到中醫藥在救治肺心病中所起的作用：(1)稀釋痰液，促進痰液引流，改善通氣，提高抗感染的效果；(2)增進病人食欲，改善營養，防止呼吸肌疲勞，減少呼吸機待機時間；(3)降低肺動脈高壓，改善右心功能；(4)每劑中藥含K+為90～110 mmol/L,可補充K+，防止低鉀性堿中毒；(5)溫腎陽中藥能提高人體免疫力，減輕對糖皮質激素的依賴，縮短使用激素的時程。

麻桔喘咳口服液具有宣肺平喘、豁痰開胸的功效，臨床用于痰濁內阻所致肺脹、哮喘、咳嗽等療效顯著。因此在主要藥效學試驗中，采用野百合堿誘發大鼠肺心病模型評價麻桔喘咳口服液的治療作用。通過測定血管收縮因子內皮素(ET-1)和血管舒張因子一氧化氮(NO)的含量變化，探討麻桔喘咳口服液改善肺血管舒縮功能的作用；通過測定右心肥厚指數，探討麻桔喘咳口服液改善肺動脈高壓、減輕右心肥厚的效果；通過肺病理組織學，探討麻桔喘咳口服液減輕肺血管增生重構的效果。

實驗結果顯示，麻桔喘咳口服液高劑量組(12 g生藥/kg)、中劑量組(6 g生藥/kg)、低劑量組(3 g生藥/kg)能明顯改善野百合堿致肺心病模型大鼠血中血管收縮因子內皮素/血管舒張因子一氧化氮的失衡(P<0.05或P<0.01)，有減輕右心肥厚指數RV/(LV+S)的趨勢。病理組織學結果顯示，麻桔喘咳口服液能不同程度地降低肺動脈血管壁厚度，增加血管腔面積，說明麻桔喘咳口服液能減輕肺動脈的血管增生。

綜上所述，主要藥效學試驗結果表明，麻桔喘咳口服液能通過緩解ET-1/NO失衡、減輕右心肥厚和肺血管增生重構治療肺心病。在目前治療肺心病藥物較為匱乏的情況下，麻桔喘咳口服液的臨床應用前景廣闊。

[1] 程顯聲.肺心病防治研究進展和策略變化[J]．中華內科雜志，1996,35(11):723-724．

[2] 中華人民共和國衛生部藥政管理局.中藥新藥研究指南[M]．北京：人民衛生出版社，1994：209.

[3] 中華人民共和國衛生部藥政管理局．新藥(西藥)臨床前研究指導原則匯編[S]．北京：人民衛生出版社，1994：204-208.

[4] 國家藥品監督管理局.新藥審批辦法[S]．1999．

[5] 徐叔云,卞如濂，陳修.藥理實驗方法學[M]．3版.北京：人民衛生出版社，2001.

[6] 陳奇,鄧文龍，張世瑋，等.中藥藥理研究方法學[M].北京：人民衛生出版社，1993.