單核細(xì)胞趨化蛋白-1啟動子-2518 A/G位點(diǎn)基因多態(tài)性與狼瘡性腎炎關(guān)聯(lián)性的Meta分析

宋欣穎，馬 冰，王曉明

狼瘡性腎炎(lupus nephritis,LN)是系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)最為常見的并發(fā)癥之一，能夠?qū)颊咴斐奢^嚴(yán)重的臟器損傷，甚至導(dǎo)致死亡[1]。LN患者體內(nèi)，在促炎細(xì)胞因子與免疫復(fù)合物刺激的免疫應(yīng)答反應(yīng)中，單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)對單核細(xì)胞和B細(xì)胞有很強(qiáng)的趨化作用。并且已經(jīng)有報(bào)道LN患者尿中MCP-1的水平明顯升高[2]。有研究表明MCP-1啟動子-2518 A/G位點(diǎn)基因的多態(tài)性能夠影響在炎癥刺激條件下MCP-1的表達(dá)水平，并且其等位基因G與介導(dǎo)MCP-1轉(zhuǎn)錄的白介素-1(interleukin-1,IL-1)以及MCP-1的循環(huán)濃度存在較密切的聯(lián)系[3]。Lee等[4]對MCP-1啟動子-2518位點(diǎn)的多態(tài)性和LN的關(guān)系進(jìn)行了Meta分析，但是并沒有發(fā)現(xiàn)存在任何聯(lián)系。隨著近年來新研究的發(fā)表，本研究將重新探索MCP-1啟動子-2518位點(diǎn)的多態(tài)性與LN的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 檢索策略 通過電子數(shù)據(jù)庫檢索和手工檢索MCP-1啟動子-2518 A/G位點(diǎn)基因多態(tài)性與LN的相關(guān)研究。中文數(shù)據(jù)庫包括中國學(xué)術(shù)期刊網(wǎng)全文數(shù)據(jù)庫(CNKI)、萬方科技期刊全文數(shù)據(jù)庫、中國生物醫(yī)學(xué)數(shù)據(jù)庫(CBM)，以單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)、多態(tài)性、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、狼瘡性腎炎為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索。英文數(shù)據(jù)庫包括Pubmed、Embase、The web of science，以monocyte chemoattractant protein-1(MCP-1)、polymorphism、systemic lupus erythematosus (SLE)、lupus nephritis(LN)為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索。手工檢索中華風(fēng)濕病學(xué)雜志、免疫學(xué)、中國神經(jīng)精神疾病雜志等，并對相關(guān)學(xué)術(shù)會議、報(bào)刊文獻(xiàn)等進(jìn)行相應(yīng)檢索。最后一次檢索日期為2013-06-07。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) (1)國內(nèi)外獨(dú)立發(fā)表的關(guān)于MCP-1啟動子-2518 A/G位點(diǎn)基因多態(tài)性和LN的文獻(xiàn)；(2)原始研究為病例對照研究；(3)原始研究能夠提供對照組和病例組的總?cè)藬?shù)，以及各個(gè)基因型的人數(shù)；(4)研究對象為人類；(5)語言不限，樣本量不限。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) (1)綜述，病例報(bào)告，評論；(2)重復(fù)發(fā)表或者屬于同一人群二次發(fā)表的文章；(3)動物實(shí)驗(yàn)。

1.3 質(zhì)量評價(jià)方法 通過紐卡斯?fàn)?渥太華量表(the Newcastle-Ottawa Scale,NOS)對所有納入的文章進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)，并由兩名研究者分別獨(dú)立進(jìn)行評分[5]。有爭議時(shí)通過咨詢第三者進(jìn)行解決。評分滿分為9分，一般認(rèn)為納入Meta分析的文獻(xiàn)不低于5分。

1.4 提取數(shù)據(jù) 對納入的研究由兩名研究人員分別提取相關(guān)數(shù)據(jù)，包括：第一作者、發(fā)表時(shí)間、國家、種族、基因檢測方法、對照組的來源、對照組和病例組各個(gè)基因型的人數(shù)及總?cè)藬?shù)。存在爭議時(shí)由第三者解決。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用Stata 11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。通過卡方擬合有度檢驗(yàn)對對照組進(jìn)行Hardy-Weinberg equilibrium(HWE)分析，P<0.05認(rèn)為不符合HWE定律。計(jì)算合并后的比值比(OR)及95%可信區(qū)間(95%CI)來估計(jì)MCP-1啟動子-2518 A/G位點(diǎn)基因多態(tài)性和LN之間的關(guān)聯(lián)強(qiáng)度。遺傳模型的選擇按照Thakkinstian等[6]在2005年提出的方法：首先分別計(jì)算出三個(gè)OR值，OR1等于GG/AA,OR2等于AG/AA,OR3等于GG/AG。然后通過下面的比較來選擇最優(yōu)的遺傳模型：(1)如果OR1=OR3≠1，并且OR2=1，選擇隱性模型；(2)如果OR1=OR2≠1，并且OR3=1，選擇顯性模型；(3)如果OR2=OR3≠1，并且OR1=1，選擇超顯性模型；(4)如果OR1>OR2>1并且OR1>OR3>1(或者OR1

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)檢索基本情況 根據(jù)上述的文獻(xiàn)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，共檢索出11篇相關(guān)文獻(xiàn)(見圖1)[8-18]，包括989名患者，1 935名健康對照者。納入研究的一般情況見表1。所有研究的對照組均符合HWE定律，NOS量表評價(jià)結(jié)果顯示最低分為5分，最高分為9分，均符合Meta分析的要求。

2.2 MCP-1啟動子-2518位點(diǎn)多態(tài)性和LN的關(guān)系 經(jīng)計(jì)算后的OR1、OR2、OR3值分別為1.60〔95%CI(1.00,2.59)〕，1.28〔95%CI(0.94，1.94)〕、1.34〔95%CI(1.06，1.70)〕,因此采用共顯性模型進(jìn)行分析。表2顯示了MCP-1啟動子-2518 A/G位點(diǎn)基因多態(tài)性和LN相關(guān)性的總的結(jié)果。其中GG/AG、G/A兩組結(jié)果達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)水平，提示該位點(diǎn)的突變可能與LN存在密切的關(guān)系(見表2、圖2)。

按地區(qū)進(jìn)行亞組分析后，各地區(qū)間存在明顯的差異性(見表3、圖3)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在美洲人群中各基因型合并后的效應(yīng)值都明顯增大，并且除了在AG/AA組外，其余各組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而歐洲及亞洲人群該位點(diǎn)的變異與LN還沒有發(fā)現(xiàn)關(guān)聯(lián)性。

注：MCP-1=單核細(xì)胞趨化蛋白-1，LN=狼瘡性腎炎

圖1 文獻(xiàn)篩選流程圖

2.3 敏感性分析 由于所有研究的對照組都符合HWE定律，我們分別排除每一個(gè)研究后進(jìn)行敏感性分析。敏感性分析結(jié)果顯示總的效應(yīng)值并沒有發(fā)生較大變化，提示本研究結(jié)果穩(wěn)定。

2.4 發(fā)表偏倚 Egger線性回歸檢驗(yàn)沒有發(fā)現(xiàn)本研究存在發(fā)表偏倚(見表2)，提示本研究發(fā)表偏倚較小，結(jié)果具有可信性。

表2 MCP-1啟動子-2518 A/G位點(diǎn)基因多態(tài)性與LN相關(guān)性的Meta分析

Table2 Meta-analysis on relationship between MCP-1 promoter -2518 A/G polymorphism and LN

多態(tài)性文獻(xiàn)數(shù)量效應(yīng)值OR值 95%CI P值效應(yīng)模型模型 P值 I2值 發(fā)表偏倚P值GG/AA11160(100，259)0052R00016520%0484AG/AA11128(094，194)0120R00046150%0913GG/AG11134(106，170)0015F0419250%0706G/A11132(104，166)0020R00007210%0750

注：R為隨機(jī)效應(yīng)模型，F(xiàn)為固定效應(yīng)模型；MCP-1=單核細(xì)胞趨化蛋白-1，LN=狼瘡性腎炎

圖2 MCP-1啟動子-2518 A/G等位基因與LN相關(guān)性的Meta分析

Figure2 Meta analysis on relationship between MCP-1 promoter -2518 A/G polymorphism and LN

表3 按地區(qū)進(jìn)行亞組分析的MCP-1啟動子-2518 A/G位點(diǎn)基因多態(tài)性與LN的關(guān)系

Table3 Subgroup analysis on relationship between MCP-1 promoter -2518 A/G polymorphism and LN by regions

地區(qū)研究數(shù)量效應(yīng)值OR值 95%CI P值 GG/AA11160(100，259)0052 美洲3570(209，1550)0001 歐洲3138(084，247)0202 亞洲5090(059，136)0613AG/AA11128(094，194)0120 美洲3243(097，605)0058 歐洲3126(097，163)0087 亞洲5080(054，117)0244GG/AG11134(106，170)0015 美洲3247(144，423)0001 歐洲3109(066，180)0741 亞洲5117(085，160)0339G/A11132(104，166)0020 美洲3231(127，420)0006 歐洲3121(099，147)0061 亞洲5099(081，121)0906

3 討論

研究認(rèn)為MCP-1在自身性免疫疾病中組織炎癥的發(fā)生中起著較重要的作用，在腎臟損傷時(shí)，MCP-1是腎小球內(nèi)作用力很強(qiáng)的單核細(xì)胞趨化因子。MCP-1啟動子-2518 A/G位點(diǎn)基因多態(tài)性會影響炎癥刺激下MCP-1的轉(zhuǎn)錄活性，促炎性細(xì)胞因子作用下，攜帶G等位基因的個(gè)體會比AA基因型的個(gè)體產(chǎn)生更多的MCP-1蛋白[19]。已經(jīng)有采用動物模型的研究證明MCP-1在LN的發(fā)病過程中起著非常重要的作用，并且在LN的患者中也發(fā)現(xiàn)了該趨化因子的過度表達(dá)[20]。MCP-1可以通過增加細(xì)胞內(nèi)的鈣離子釋放，從而導(dǎo)致超氧陰離子和溶酶體酶的釋放及刺激黏附分子和細(xì)胞因子的產(chǎn)生。這些都可能是MCP-1啟動子-2518 A/G位點(diǎn)基因多態(tài)性導(dǎo)致LN的機(jī)制。

圖3 不同地區(qū)MCP-1啟動子-2518 A/G等位基因與LN相關(guān)性的Meta分析

Figure3 Meta-analysis on relationship between MCP-1 promoter -2518 A/G polymorphism and LN by regions

近年來關(guān)于MCP-1啟動子-2518 A/G位點(diǎn)基因多態(tài)性與SLE相關(guān)性的報(bào)道越來越多，不過研究的結(jié)果一直存在爭議性，之前的Meta分析并沒有發(fā)現(xiàn)兩者之間存在聯(lián)系性[21]。LN是SLE累及腎臟所引起的一種免疫復(fù)合物沉積性腎炎，是SLE主要的合并癥和死亡原因。Lee等[4]的研究顯示無論是在顯性模型、隱性模型還是等位基因位點(diǎn)的比較中，并沒有發(fā)現(xiàn)MCP-1啟動子-2518 A/G位點(diǎn)多態(tài)性與LN存在關(guān)聯(lián)性，不過該分析僅納入了6個(gè)研究，人群只包括亞裔和歐裔。隨著近幾年新研究的進(jìn)行及相關(guān)文章的發(fā)表，本研究對MCP-1啟動子-2518 A/G位點(diǎn)基因多態(tài)性與LN的相關(guān)性重新進(jìn)行了評估。

本研究在遺傳模型選擇上不同于之前的Meta分析，是參照了Thakkinstian等[6]提出的遺傳性Meta分析中基因模型選擇方法，最終采用共顯性模型進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，MCP-1啟動子-2518 A/G位點(diǎn)基因多態(tài)性與LN存在聯(lián)系，除了基因型AG/AA沒有發(fā)現(xiàn)關(guān)聯(lián)外，其余各組均達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。按照地區(qū)進(jìn)行亞組分析后，各組間的異質(zhì)性明顯降低，可見不同地區(qū)間存在較大差異,是研究中異質(zhì)性的主要來源。分組結(jié)果發(fā)現(xiàn)在美洲人群這種聯(lián)系尤為明顯，而在亞洲和歐洲人群中并沒有發(fā)現(xiàn)，這與之前的研究在一定程度上一致[4]。但是美洲人群中對照組的G等位基因的分布頻率較病例組明顯偏低，這是導(dǎo)致美洲人群MCP-1啟動子-2518 A/G位點(diǎn)基因多態(tài)性與其他地區(qū)人群不同的主要原因。本研究的對照組全部滿足HWE定律，同時(shí)沒有發(fā)表偏倚的存在，提示結(jié)果可信性較好。敏感性分析結(jié)果中也沒有發(fā)現(xiàn)在剔除單個(gè)研究中整個(gè)研究合并后的效應(yīng)值發(fā)生較大的變化，提示本研究穩(wěn)定性較好。

本研究還存在一定的局限性。首先，納入的文獻(xiàn)數(shù)目有限，尤其是在按地區(qū)分成亞組后，文獻(xiàn)數(shù)目進(jìn)一步減少。其次，研究中并不是涉及所有地區(qū)的人群，所以結(jié)果適用范圍有限。最后，由于缺少數(shù)據(jù)，還不能說明MCP-1啟動子-2518 A/G位點(diǎn)基因多態(tài)性與LN的嚴(yán)重程度及同時(shí)伴有其他疾病時(shí)的關(guān)系。另外，由于受研究數(shù)目和樣本量的限制，系統(tǒng)誤差也是不可避免的。

總之，通過Meta分析，本研究發(fā)現(xiàn)MCP-1啟動子-2518 A/G多態(tài)性與LN存在關(guān)聯(lián)性。這種聯(lián)系在美洲人群中更加明顯，而在亞洲和歐洲人群中目前的證據(jù)還不支持二者之間的聯(lián)系。因此還需要更多大樣本的同質(zhì)性研究。

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