早期糖尿病腎病泛素-核糖體融合蛋白52和尿微量清蛋白關系研究

張 艷，任 榮，梁新華，張 蕾

糖尿病腎病(DN)在糖尿病人群中發病率為20%～40%，是糖尿病的主要并發癥和死亡原因。近年來，隨著糖尿病患者數量的快速增長，DN發病率亦逐年上升，已經成為終末期腎病(ESRD)的首位病因。因此，早發現、早治療對于改善DN患者預后、降低醫療開支及社會經濟負擔有著積極作用。而尿微量清蛋白(microalbuminuria，MAU)是目前公認的診斷早期DN的標志性尿蛋白，但易受多種因素影響，如血糖、血壓控制不佳、24 h內劇烈活動、全身或尿路感染、血尿、充血性心力衰竭、發熱、使用非甾體抗炎藥和血管緊張素轉換酶抑制劑、吸煙、妊娠等[1]，使其在早期DN診斷中準確性及預測價值降低。

DN是以腎小球系膜細胞病變為主的疾病，內皮細胞損傷和足細胞丟失在DN發病過程中起關鍵作用。近期研究發現，相對于腎小球病變，腎小管病變與腎功能惡化有更密切的關系[2]。腎小管間質改變并非繼發于腎小球病變，而是DN早期病變和原始特征之一[3-6]。近年來，隨著蛋白質組學技術在生物醫學領域的廣泛應用，研究者已經開始利用蛋白質組學技術篩選出能更早、更準確地預測或診斷DN病情進展與監測預后的生物標志物。Dihazi等[7]研究DN及糖尿病合并其他腎病患者尿液蛋白質譜發現，DN患者尿液特異性表達質核比為14∶766，并提出該蛋白可作為DN診斷性尿蛋白；后證實該蛋白為泛素-核糖體融合蛋白52(UBA52)，DN可通過高糖和各種應激反應激活相應增強子，加強轉錄，表達UBA52[8-9]。本研究通過檢測血UBA52、尿UBA52、MAU及尿蛋白定量等指標，初探早期DN患者UBA52的表達及其與MAU的關系。

表1 3組臨床資料比較

注：與對照組比較，*P<0.05；與糖尿病組比較，△P<0.05；▲為χ2值

表2 3組血UBA52、尿UBA52、尿蛋白定量和MAU比較

注：與對照組比較，*P<0.05；與糖尿病組比較，△P<0.05；UBA52=泛素-核糖體融合蛋白52，MAU=尿微量清蛋白

1 資料與方法

1.1 納入標準 (1)年齡≥18歲，血肌酐<265 μmol/L，自愿參加試驗；(2)符合2010年《中國2型糖尿病防治指南》中的糖尿病診斷標準，且尿蛋白肌酐比率(ACR)≥30 μg/mg。

1.2 排除標準 (1)合并發熱、腫瘤、妊娠、充血性心力衰竭；(2)DN患者內生肌酐清除率≥265 μmol/L，其他原因所致的腎臟損害，如高血壓腎損害、原發性腎炎、腎病綜合征、IgA腎病。

1.3 一般資料 選取2012年2月—2013年3月新疆醫科大學第五附屬醫院收治的糖尿病患者20例(糖尿病組)，DN患者59例(DN組)。另選取同期在本院體檢健康者22例作為對照組。

1.4 方法

1.4.1 血標本采集 于清晨空腹狀態下采集3組受試者靜脈血3 ml，分別裝入免疫管和生化管。

1.4.2 尿標本采集 尿標本：空腹8 h后晨起采集第1次清潔中段尿5 ml。尿蛋白定量標本：試驗前24 h禁服利尿劑，留取24 h尿，期間保持適當的水分攝入，禁服咖啡、茶等利尿性物質，準確計量全部尿量(ml)。

1.4.3 MAU、UBA52檢測方法 采用免疫透射比濁法檢測3組受試者MAU，檢測儀器為BECKMAN 8000，由同一名經驗豐富的檢驗醫師檢驗；采用ELISA法檢測3組受試者UBA52，試劑盒購自北京華夏遠洋公司，酶標比色計波長為450 nm，由3名培訓合格的研究人員進行檢驗操作。

2 結果

2.1 3組臨床資料比較 3組性別、年齡、BMI比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；3組血糖、糖化血紅蛋白、總膽固醇比較，差異均有統計學意義(P<0.05)，其中DN組血糖、糖化血紅蛋白、總膽固醇均高于對照組，糖尿病組血糖和糖化血紅蛋白均高于對照組，DN組糖化血紅蛋白和總膽固醇均高于糖尿病組，差異有統計學意義(P<0.05，見表1)。

2.2 3組血UBA52、尿UBA52、尿蛋白定量和MAU比較 3組血UBA52、尿UBA52、尿蛋白定量和MAU比較，差異均有統計學意義(P<0.05)，其中DN組血UBA52、尿UBA52、尿蛋白定量和MAU均高于對照組和糖尿病組，糖尿病組尿蛋白定量、MAU均高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05，見表2)。

2.3 多元線性回歸分析 以DN患者尿UBA52為因變量，以血糖、糖化血紅蛋白、總膽固醇、MAU為自變量，進行多元線性回歸分析，結果顯示，MAU和糖化血紅蛋白進入回歸方程(P<0.05，見表3)。

表3 DN患者尿UBA52水平影響因素的多元線性回歸分析

Table3 Multiple linear regression analysis on influencing factors for urine UBA52 in DN patients

偏回歸系數標準偏回歸系數t值P值常數項-2306-06240536MAU 0018 039042570000糖化血紅蛋白 1614 025427710007

3 討論

糖尿病是全球最常見的慢性病之一，已成為重大的社會衛生問題。據統計，至2010年全球糖尿病患者達2.8億，預計其每年增長率為2.2%。發展中國家傳統生活方式改變、糖尿病診斷標準改變、公眾意識提高、總體人群病死率下降、肥胖率增加等，均會導致2型糖尿病的發生。WHO調查顯示，到2025年，中國和印度將有1.3億糖尿病患者，將消耗醫療預算的40%，嚴重阻礙經濟的發展。DN是常見的糖尿病微血管病并發癥，臨床上以微量清蛋白尿到大量蛋白尿為主要表現。在美國，30%～40%的DN由糖尿病導致[10]。然而，DN發病機制尚未完全清楚，臨床治療措施有限。2013年，本科住院患者DN患病率達17.8%，而40%的DN患者在住院開始即進行血液透析。目前就DN的診斷而言，傳統的腎活檢由于具有一定的創傷性，限制了其臨床應用，而尿清蛋白的檢測又存在特異度不高的缺陷[11-12]。因此，篩選早期、更準確的DN生物標志物不僅有助于更好地闡明DN的發生機制，且對DN的早期診斷、治療效果的檢測及預后的判斷均具有重大意義。最新研究發現，相對于腎小球病變，腎小管病變對腎功能惡化有更密切的關系，故選擇UBA52，其表達在腎小管，且證實與DN進展密切相關[13]。DN可以通過高糖和各種應激反應激活相應增強子，加強轉錄，表達UBA52，在泛素水解酶的作用下可水解釋放大量游離泛素分子維系泛素-蛋白酶體途徑(ubiquitin-ptoteasome path，UPP)的活性[14]。UPP是真核生物降解蛋白質的主要途徑，80%～90%的蛋白質被泛素蛋白酶系統降解。國內外多項研究提示，UPP參與了DN腎臟纖維化多條信號通路中重要蛋白分子，如轉化生長因子-β(TGF-β)、絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)、核因子-κB(NF-κB)負調節因子的降解[15-16]，引起信號通路的過度持久活化，對腎小球系膜細胞凋亡、抗原提呈、炎性演進和基因轉錄等多方面進行上調或下調，并促進腎臟纖維化，在DN的進展中起到重要作用。因UPP在DN患者中特異性表達，故其可以提高診斷早期DN的特異度。

本研究分別測定3組患者血UBA52、尿UBA52、尿蛋白定量及MAU等指標。結果顯示，DN組血UBA52、尿UBA52顯著高于糖尿病組和對照組，而糖尿病組與對照組比較無差異，具有干擾因素少、取材方便、無創性等優勢；而DN組和糖尿病組MAU均高于對照組，故在DN早期缺乏特異性。本研究結果亦顯示，MAU和糖化血紅蛋白水平升高可增加UBA52水平。近年來，許多研究證明，腎小管損傷在DN發生發展中起著重要作用。DN腎小管損傷的主要病理表現是小管細胞增生、肥大、萎縮、凋亡、轉分化等改變，同時腎小管周圍有炎性細胞浸潤及不同程度腎小管間質纖維化，重視并深入研究DN小管細胞損傷的機制對防治DN進展具有重要意義。動態監測尿UBA52，并對DN按照腎小球濾過率(GFR)進行分期，檢測其與腎小球濾過功能的關系，在給予血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑(ARB)干預，評價其是否可作為臨床疾病轉歸的指標具有重要意義。

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