艾灸足三里穴與關(guān)元穴對(duì)訓(xùn)練小鼠免疫功能的影響*

容賢冰，鄧武裝,蔣曉明，葉素英，華 巖

(1.桂林電子科技大學(xué)體育部，廣西桂林 541004；2.周口師范學(xué)院體育學(xué)院，河南周口 466000；3.欽州學(xué)院體育學(xué)院，廣西欽州 535000；4.桂林航天工業(yè)學(xué)院體育部，廣西桂林 541004)

大強(qiáng)度或激烈運(yùn)動(dòng)會(huì)降低運(yùn)動(dòng)員免疫力，表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)能力下降，對(duì)疾病的防御能力降低，如何提高大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)后運(yùn)動(dòng)員的免疫功能，是眾多運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)研究者共同關(guān)注的重點(diǎn)。艾灸療法是我國(guó)悠久的保健方法之一。已有研究表明，艾灸不同穴位可以起到抗氧化、延年益壽的作用，對(duì)大強(qiáng)度訓(xùn)練后腎臟的自由基清除也有一定的療效[1-3]。到目前為止，艾灸能否改善過度訓(xùn)練導(dǎo)致的運(yùn)動(dòng)性免疫抑制報(bào)道較少，本研究擬通過建立小鼠大強(qiáng)度訓(xùn)練模型，探討艾灸對(duì)訓(xùn)練后小鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞(NK)、自然殺傷T細(xì)胞(NKT)數(shù)量及脾臟、胸腺抗氧化能力的影響，為穴位艾灸法在競(jìng)技體育訓(xùn)練

表1 各組小鼠

▲：P<0.05，與A組比較；*：P<0.05，與B組比較。

表2 各組小鼠脾臟、胸腺組織MDA含量

▲:P<0.05,與A組(脾臟)比較；*：P<0.05，與B組(脾臟)比較；#：P<0.05，與A組(腺臟)比較。▼：P<0.05，與A組(胸腺)比較；○：P<0.05，與B組(胸腺)比較；■：P<0.05，與A組(腺臟)比較。

中的應(yīng)用和推廣提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明雄性小鼠30只，8 周齡(體質(zhì)量18～20 g)。小鼠5只一籠飼養(yǎng)，自由進(jìn)食、進(jìn)水。動(dòng)物飼養(yǎng)室自然晝夜規(guī)律照明，溫度(28±2)℃，濕度50%～60%。

1.2 儀器與試劑 動(dòng)物游泳缸自制；Epics-XL流式細(xì)胞儀和Q-Prep流式細(xì)胞儀、標(biāo)本制備儀購(gòu)自美國(guó)貝克曼公司；CD3+、CD4+、CD8+單克隆抗體購(gòu)自武漢新啟迪生物有限公司；TGL-16G臺(tái)式高帶冷凍離心機(jī)購(gòu)自北京沃德生物醫(yī)學(xué)儀器公司；FSH-2高速電動(dòng)勻漿機(jī)購(gòu)自北京瑞麗分析儀器公司)；丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)試劑盒均購(gòu)自南京建成生物有限公司；無煙艾粒購(gòu)自南陽漢醫(yī)艾絨廠。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組及訓(xùn)練方案 小鼠適應(yīng)喂養(yǎng)1周后，按體質(zhì)量分為安靜對(duì)照組(A組，n=10)、運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組(B組，n=10)、運(yùn)動(dòng)+艾灸組(C組，n=10)。B組、C組小鼠先進(jìn)行3 d適應(yīng)性游泳訓(xùn)練，后采用6周的遞增負(fù)荷強(qiáng)度訓(xùn)練(每周6 d，起始周游泳時(shí)間為30 min/d，之后每周增加10 min，至第6周游泳至90 min/d，末次訓(xùn)練為負(fù)重8%的力竭游泳訓(xùn))。安靜對(duì)照組進(jìn)行正常的生理活動(dòng)。

1.4 艾灸方案 艾灸時(shí)間為游泳后間隔1h，艾灸方法依據(jù)參考文獻(xiàn)[3]。

1.5 方法 T淋巴細(xì)胞亞群、NK、NKT細(xì)胞數(shù)的測(cè)定：力竭游泳結(jié)束后，肝素真空采血針抽取小鼠腹部主靜脈血，流式管中加入100 μL抗凝血，后加入20 μL抗體，室溫避光孵育1 h，溶紅細(xì)胞后放入恒溫器20 min，1 200 r/min離心15 min，取上清液，生理鹽水洗2次，1 200 r/min離心5 min后，采用流式細(xì)胞儀測(cè)CD3+、CD4+、CD8+、NK、NKT細(xì)胞數(shù)。 胸腺、脾臟指數(shù)的測(cè)定：小鼠斷頸處死后，取出脾臟、胸腺，洗凈稱重計(jì)算脾臟指數(shù)(SI)與胸腺指數(shù)(TI)。

2 結(jié) 果

2.1 各組小鼠CD3+、CD4+/CD8+的值及NK、NKT比較 與A組相比，B組、C組CD3+、CD4+/CD8+比值、NK、NKT均顯著降低(P<0.05),B組SI、 TI顯著降低(P<0.05)；與B組相比，C組CD3+、CD4+/CD8+、NK、NKT、SI、 TI均顯著升高(P<0.05)，見表1。

2.2 各組小鼠脾臟、胸腺組織中MDA、GSH-PX、SOD、CAT比較 與A組相比，B組小鼠脾臟、胸腺組織中MDA含量顯著升高(P<0.05)，GSH-PX、SOD、CAT活性均顯著降低(P<0.05)；與A組相比，C組小鼠脾臟組織MDA含量顯著升高(P<0.05)，胸腺組織中SOD活性顯著升高(P<0.05)，CAT活性顯著降低(P<0.05)；與B組相比，C組小鼠脾臟、胸腺組織中MDA含量顯著降低(P<0.05)，GSH-PX、SOD、CAT均顯著升高(P<0.05)，見表2。

3 討 論

CD3+、CD8+、CD4+/CD8+、NK、NKT是免疫細(xì)胞中重要的檢測(cè)指標(biāo)。CD3+分布于成熟的T淋巴細(xì)胞表面，發(fā)揮輔助和誘導(dǎo)作用，CD8+發(fā)揮殺傷和抑制作用。CD4+/CD8+的值在一定范圍內(nèi)上升，表明免疫應(yīng)答中的正調(diào)節(jié)占優(yōu)勢(shì)。NK具有自然殺傷的能力，在抗腫瘤、抗病毒感染等免疫調(diào)節(jié)中起到重要作用，NKT細(xì)胞的表面既有T細(xì)胞受體，又有NK細(xì)胞受體，常作為反映運(yùn)動(dòng)后免疫功能改變的指標(biāo)之一，主要受運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度和運(yùn)動(dòng)量的影響[4]。本研究中，訓(xùn)練后CD3+、CD4+/CD8+、NK、NKT顯著降低，表明大強(qiáng)度訓(xùn)練導(dǎo)致小鼠機(jī)體免疫功能下降。而艾灸足三里穴、關(guān)元穴可增加CD3+、CD4+/CD8+、NK、NKT，表明艾灸足三里穴、關(guān)元穴通過增加NK、NKT細(xì)胞數(shù)量，改善訓(xùn)練小鼠的細(xì)胞免疫功能。高明等[5]研究認(rèn)為，艾灸能提高男子中長(zhǎng)跑運(yùn)動(dòng)員大負(fù)荷運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練期間CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞亞群的含量，防止過度訓(xùn)練導(dǎo)致的CD3+、CD4+、CD8+等T淋巴細(xì)胞亞群含量的降低，預(yù)防CD4+/CD8+的比值下降。

胸腺、脾臟是機(jī)體重要的免疫器官，大量研究已正式，過量運(yùn)動(dòng)會(huì)損害機(jī)體的免疫器官，導(dǎo)致脾臟、胸腺重量降低，并發(fā)結(jié)構(gòu)的變化，使器官免疫能力降低[6]。本研究中，運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組小鼠的SI、TI顯著性下降，提示過度運(yùn)動(dòng)可能對(duì)小鼠的胸腺、脾臟構(gòu)成損傷，造成小鼠機(jī)體免疫能力下降。而艾灸足三里、關(guān)元穴可以抑制SI、TI的變化下降的趨勢(shì)。顧長(zhǎng)海[7]研究也認(rèn)為，艾灸足三里、關(guān)元穴可以抑制SI、TI降低。

大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)會(huì)導(dǎo)致體內(nèi)自由基累積，自由基攻擊機(jī)體生物膜系統(tǒng)的不飽和脂肪酸，引起生物膜的功能障礙，加重組織損傷[8]。MDA是脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物中的一種，是衡量機(jī)體內(nèi)自由基代謝的敏感指標(biāo)，GSH-PX、SOD、CAT是常見的抗氧化酶類，其主要作用是清除自由基。有研究證實(shí)，大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致機(jī)體胸腺、脾臟組織中抗氧化酶活性降低，MDA含量升高[9]。本研究中，訓(xùn)練后胸腺、脾臟組織中GSH-PX、SOD、CAT活性均呈現(xiàn)不同程度下降，而MDA含量上升，說明大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)使胸腺、脾臟抗氧化系統(tǒng)清除自由基的速率遠(yuǎn)小于自由基生成的速率。而艾灸足三里穴、關(guān)元穴能提高小鼠胸腺、脾臟組織中GSH-PX、SOD、CAT抗氧化酶的活性，及時(shí)清除運(yùn)動(dòng)過程中產(chǎn)生的自由基，阻止胸腺、脾臟組織中過氧化程度的加快，抑制MDA的生成。其可能的作用機(jī)制是：(1)與艾灸刺激的穴位有關(guān)，關(guān)元穴的位置在任脈，任脈的重要功能是調(diào)節(jié)陰陽氣血，其脈經(jīng)足三陰經(jīng)與陰經(jīng)脈交會(huì)，胸腺正處于任脈上，改善了胸腺的功能。而足三里是全身強(qiáng)壯穴、保健穴，改善胃機(jī)能，脾胃互為表里，必然促進(jìn)脾臟功能的改善。(2)與艾灸時(shí)產(chǎn)生的輻射有關(guān)，有研究表明，艾灸時(shí)產(chǎn)生的輻射能為機(jī)體細(xì)胞代謝提供活力也能為能量缺乏的病態(tài)細(xì)胞提供活化能，對(duì)損傷的細(xì)胞膜有一定的修復(fù)作用[10],提高胸腺、脾臟組織細(xì)胞膜的防御能力。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明,艾灸足三里穴、關(guān)元穴可提高訓(xùn)練小鼠外周血CD3+、NK、NKT細(xì)胞數(shù)量，預(yù)防CD4+/CD8+比值失調(diào)；同時(shí)抑制由于力竭訓(xùn)練造成的SI、TI的變化趨勢(shì)，增強(qiáng)胸腺、脾臟組織抗氧化酶的活性，減輕訓(xùn)練引起的免疫器官脂質(zhì)過氧化損傷。提示艾灸足三里、關(guān)元兩穴可改善力竭訓(xùn)練引起的免疫功能下降，提高機(jī)體免疫能力。然而，由于經(jīng)費(fèi)和實(shí)驗(yàn)條件的受限，本實(shí)驗(yàn)未涉及小鼠恢復(fù)過程中(如小鼠恢復(fù)12、24 h)外周血免疫指標(biāo)及免疫器官抗氧化指標(biāo)的變化情況，這將是本課題組今后的研究方向。

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