脫氫紫堇堿對內毒素血癥大鼠心肌保護作用研究*

李 杏 黃小民 蔣旭宏△ 周晶晶

（1.浙江中醫藥大學第一臨床醫學院，浙江 杭州 310053；2.浙江中醫藥大學附屬第一醫院，浙江 杭州 310006）

內毒素血癥是臨床急診常見的危重病。心肌損傷是內毒素血癥的常見并發癥，死亡率極高［1］。研究發現脫氫紫堇堿（DHC）有明顯的抗心肌缺氧缺血作用，減少心肌細胞鈣超載，有效擴張冠狀動脈，改善循環、降低耗氧量［2］。本研究旨在探討DHC防治內毒素血癥性心肌損傷的作用機制。現報告如下。

1 材料與方法

1.1 試劑 DHC為大連美侖生物技術有限公司產品；脂多糖（LPS）為 Sigma 公司產品；心肌酶（CK）、心肌同工酶（CK-MB）、心肌肌鈣蛋白（TnI）試劑為北京利德曼有限公司產品；腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）ELISA檢測試劑盒為杭州誠維生物科技有限公司產品。

1.2 動物及分組 健康雄性Wistar大鼠50只，體質量200～220 g，SPF級，由浙江中醫藥大學實驗動物中心提供。按隨機數字隨機分為對照組、模型組、DHC低、中、高（2.5、5、10mg/kg）劑量組，每組 10 只。

1.3 造模及給藥 采用一次性尾靜脈注射LPS溶液的方法，制備大鼠內毒素血癥模型。LPS模型組、DHC各組均注射LPS溶液5mg/kg，用生理鹽水稀釋至1mL。對照組、模型組注射等容積生理鹽水。造模結束后，DHC各組予尾靜脈注射相應劑量DHC溶液。

1.4 標本采集與檢測 給藥1 h后25%水合氯醛溶液麻醉大鼠，取左心室心肌組織，以10%甲醛固定，用于制作常規病理組織切片；腹主動脈取血，分離血清，采用酶學速率法進行測定CK、CK-MB、TnI，根據吸光度的變化，計算出酶的活性。ELISA法測定TNF-α、IL-1β，操作過程嚴格按試劑盒的說明書進行操作。

1.5 統計學處理 應用SPSS17.0統計軟件包。計量資料以（±s）表示。各組均數比較采用單因素方差分析，均數間兩兩比較用最小的顯著差異法分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

圖1 各組心肌組織變化觀察

2.1 心肌組織病理學觀察 見圖1。HE染色后鏡下觀察提示對照組大鼠心肌細胞結構清晰，心肌纖維完整，排列整齊，未見明顯的炎細胞及滲出物。模型組可見心肌細胞水腫明顯，心肌纖維結構紊亂，心肌組織內布滿炎性細胞，部分壞死灶。DHC低、中劑量組心肌細胞輕度水腫，結構可辨，心肌組織內少量炎性細胞浸潤，少量壞死灶；DHC高劑量組心肌細胞水腫情況及壞死狀況介于模型組與中劑量組之間。

2.2 血清中CK、CK-MB、TnI含量的測定 見表1。與對照組相比，模型組CK、CK-MB、TnI的含量增加，差異有統計學意義（P＜0.01）。而在DHC各組中CK、CK-MB、TnI的含量增加相對較少，低、中劑量組與模型組相比差異有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01），而高劑量組與LPS模型組相比差異無統計學意義。

表 1 大鼠血清中 CK、CK-MB、TnI水平比較（±s）

表 1 大鼠血清中 CK、CK-MB、TnI水平比較（±s）

與對照組比較， *P＜0.05， **P＜0.01； 與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。下同。

組 別 n TnI（μg/L）對照組 10 0.016±0.005模型組 10 0.256±0.018**DHC低劑量組 10 0.116±0.309**##CK（U/L） CK-MB（U/L）1121.1±252.3 924.8±174.6 2216.2±412.1**2007.1±435.9**1802.9±376.7**#1613.0±401.6**#DHC中劑量組 10 0.067±0.012**##1475.7±349.8*##1328.3±362.2*##DHC 高劑量組 10 2035.8±468.3**1741.3±383.9**0.251±0.026**

2.3 血清中TNF-α、IL-1β含量的測定 見表2。與對照組相比較，模型組、DHC干預組的大鼠血清中TNF-α、IL-1β 的含量均有顯著增加 （P＜0.01）。 而在DHC低、中、高劑量組中TNF-α、IL-1β的含量增加與模型組相比顯著減少（P＜0.01），中劑量減少最明顯。

表 2 大鼠血清中 TNF-α、IL-1β 的測定結果（pg/mL，±s）

表 2 大鼠血清中 TNF-α、IL-1β 的測定結果（pg/mL，±s）

組 別 n對照組 10模型組 10 DHC低劑量組 10 TNF-α IL-1β 141.45±3.49 29.35±1.62 221.24±7.81** 40.09±1.55**179.48±7.54**## 35.73±1.47**##DHC 中劑量組 10 167.76±7.19**## 32.98±1.38**##DHC 高劑量組 10 189.25±10.77**## 36.93±1.37**##

3 討 論

研究表明，內毒素血癥早期即存在心血管功能異常，臨床表現為心室擴張、心肌收縮功能及射血分數降低，并伴有嚴重外周血管舒張、血容量反應性降低［3］。臨床實踐中，心肌酶可反映心肌細胞的完整性，故常用心肌酶檢測法來測定心肌受損程度。CK、CK-MB及TnI是目前常用的與心肌損害有關的酶學檢查，CK主要分布在骨骼肌、心肌中，而CK-MB絕大部分存在于心肌細胞內，心肌以外的組織含量甚微，因而能更特異性的反映心肌損害嚴重程度；TnI對心肌損傷的敏感性和特異性都較高，是目前診斷心肌損傷的確定標志物，血清心肌酶濃度與心肌損害范圍呈正相關。

內毒素血癥心肌損傷的機制復雜多樣，TNF-α、IL-1β已被證實是內毒素血癥發病過程中重要的炎性介質，共同參與膿毒癥心肌功能障礙的病理生理改變［3］，其機制主要是通過抑制鈣離子轉運、刺激病理學NO增多、心肌能量代謝障礙［4］、影響心肌細胞興奮收縮偶聯，使心肌收縮力降低。Calson等［5］發現TNF-α亦能誘導心肌細胞凋亡，從而促進心功能障礙。IL-1β可由內毒素直接刺激產生，也可由TNF-α誘導產生，產生相同的協同作用。

延胡索味苦、辛，性溫，歸心、肝、脾經，主要功效為活血、行氣、止痛，臨床多用于氣血瘀滯痛證。《雷公炮炙論》稱“心痛欲死，速覓延胡”。DHC為其生物堿提取物，為其主要生物堿之一，近代臨床多用于心腦血管疾病的治療。本研究采用DHC干預內毒素血癥心肌損傷大鼠，實驗表明DHC低、中、高劑量組均能顯著降低TNF-α、IL-1β含量，但在心肌損傷方面，低、中劑量組明顯降低心肌酶的表達，對內毒素心肌損傷有保護作用，其保護機制可能與下調炎癥因子TNF-α、IL-1β有關，提示抑制炎癥因子可以很好的保護心肌組織。高劑量組并沒有降低心肌酶的表達，其作用機制還不明確，有待進一步研究。

［1］ Angus DC，Linde-ZwirbleWT，Lidicker J，etal.Epidemiology of severe sepsis in the United States： analysis of incidence，outcome， and associated costs of care［J］.Crit Care Med，2001，29：1303-1310.

［2］ 李杏，蔣旭宏，黃小民.脫氫紫堇堿的研究概況［J］.中國中醫急癥，2013，22（12）：2076-2078.

［3］ Prabhu SD.Cytok ine-inducedm odu lat ion of card iac function［J］.Circ Res，2004，95（12）： 1140-1153.

［4］ Merx MW，Weber C.Sepsis and the heart［J］.Circulation，2007，116（7）：793-802.

［5］ Carlson DL，Willis MS，White DJ， et al.Tumor necrosis factor-alpha-induced caspase activationmediates endotoxinrelated cardiac dysfunction［J］.Crit Care Med，2005，33（5）：1160-1162.