高效液相色譜-二極管陣列檢測法同時測定香丹注射液中7種丹參酚酸類成分

于小靜

高效液相色譜-二極管陣列檢測法同時測定香丹注射液中7種丹參酚酸類成分

于小靜

目的對高效液相色譜-二極管陣列檢測法同時測定香丹注射液中 7種丹參酚酸類成分的效果進行分析探討。方法色譜柱為ThermoODS2柱，流動相為乙腈（A）0.05%磷酸（B），流速為1.0ml/min，波長為280nm。結果經統計發現，香丹注射液中丹參素、咖啡酸、原兒茶醛、迷迭香酸、丹參酚酸B、丹參酚酸A、紫草酸在試驗范圍內存在良好的線性關系，r均＞0.9991，精密度均＜1%，在48h內存在良好的穩定性，回收率均在98%～103%。結論經高效液相色譜-二極管陣列檢測法對香丹注射液中丹參酚酸類成分進行檢測的結果準確可靠，值得關注。

高效液相色譜-二極管陣列檢測法；香丹注射液；丹參酚酸；含量測定

本次研究出于對香丹注射液中7種丹參酚酸類成分含量測定方法進行分析探討為目的，采取高效液相色譜-二極管陣列檢測法對丹參素、咖啡酸、原兒茶醛、迷迭香酸、丹參酚酸B、丹參酚酸A、紫草酸在香丹注射液中的含量展開了同時測定，現報告如下。

1 儀器與試劑

1.1 實驗儀器所用儀器包括 BD-25十萬分之一電子天平、Waters效液相色譜儀，包括在線真空脫氣機、Waters600 四元泵、Waters 2996二極管陣列檢測器（DAD）以及Empower2色譜工作站。

1.2 實驗試劑實驗中所需對照品試劑包括丹參素、原兒茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、丹參酚酸A、丹參酚酸 B、紫草酸。香丹注射液，乙腈為色譜純，水為雙蒸水，其余所用試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件所用色譜柱為Thermo ODS2，規格為4.6mm×250mm，5μm，所用流動相為乙腈（A）-0.05%磷酸水（B）。梯度洗脫條件包括起始流動相配比為 13%A～87%B；15min時流動相配比為23%A～77%B；30min時流動相配比為 25%A～75%B；35min時流動相配比為 60%A～40%B。流速為1.0ml/min，溫度為室溫（25℃），進樣量為20μl，波長為280nm[1]。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液制備 精密稱定對照品丹參素10.00mg、咖啡酸1.35mg、原兒茶醛13.80mg、丹參酚酸 A 6.30mg、丹參酚酸 B 13.00mg、迷迭香酸5.00mg及紫草酸5.50mg，將其分別放置于5ml的棕色容量瓶中，經濃度為 70%的甲醇溶解，并定容至刻度，作為單一成分對照品備用；精密吸取個對照品溶液適量，放置于10ml的棕色容量瓶中，經70%的甲醇溶解后定容，搖勻后制成混合對照品備用。

2.2.2 供試品溶液制備 精密吸取香丹注射液1ml，將其放置于10ml的容量瓶中，經70%的甲醇稀釋至刻度，而后經 0.22μm的微孔濾膜濾過，制成供試品溶液備用[2]。

2.3 線性關系考察制備系列濃度的混合對照品溶液，將其按照2.1所示色譜條件一次進樣檢測，將對照品溶液的濃度作為橫坐標，峰面積作為縱坐標，繪制線性曲線。結果得到7種有效成分的線性回歸方程分別為：Y丹參素=1E＋07X＋1229.12，線性范圍200.10～2.03，r=0.9994；Y原兒茶醛=1E＋08X＋5825.31，線性范圍127.92～1.28，r=0.9992；Y咖啡酸=7E＋07X－269.01，線性范圍27.12～0.28，r=0.9994；Y迷迭香酸=4E＋07X＋3950.21，線性范圍100.91～1.03，r=0.9997；Y紫草酸=2E＋07X＋2248.79，線性范圍 111.09～1.12，r=0.9999；Y丹參酚酸B=2E＋07X＋10312.52，線性范圍261.19～2.28，r=0.9999；Y丹參酚酸A=5E＋07X＋4158.12，線性范圍125.89～1.28，r=0.9998。

2.4 精密度考察以2.1所示色譜條件，將對照品溶液連續進樣5次，記錄各有效成分的峰面積，并計算RSD值。結果發現7種有效成分的RSD值均＜1%，證實該儀器的精密度良好。

2.5 重現性考察精密量取5份1ml的香丹注射液溶液，按照2.2條件制成供試品溶液，分別進樣測定，計算各成分峰面積的RSD值。結果發現各成分峰面積RSD值均＜1%，證實該方法具有良好的重現性。

2.6 穩定性考察精密量取 1ml香丹注射液，經2.2條件制成供試品溶液，分別在0、6、12、24、36、48h時進樣檢測，計算各成分峰面積的RSD值，結果發現各成分峰面積的RSD值在0.91%～1.38%，證實樣品在48h內具有良好的穩定性。

2.7 加樣回收實驗精密量取已知含量的香丹注射液1ml，共3份，精密加入適量的對照品，以2.2所示條件制成供試品溶液，進樣測定，計算回收率。經統計發現丹參素、咖啡酸、原兒茶醛、迷迭香酸、丹參酚酸 B、紫草酸、丹參酚酸 A 的平均回收率分別為100.7%、99.8%、100.7%、101.3%、101.9%、98.0%、103.1%。

2.8 樣品含量測定取 3個批次的香丹注射液，精密量取1ml，按照2.2所示條件制成供試品，以2.1色譜條件進行檢測，依照標準曲線計算樣品中各成分的含量。結果發現3個批次樣品中丹參素、原兒茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸、丹參酚酸B、丹參酚酸 A的平均含量分別為 2.231mg/ml、0.517mg/ml、0.011mg/ml、0.109mg/ml、0.089mg/ml、0.162mg/ml、0.253mg/ml。

3 討論

本次實驗證實，經高效液相色譜-二極管陣列檢測法同時測定香丹注射液中7種丹參酚酸類成分含量，結果準確可靠，精密度、重現性良好，值得關注并推廣，為今后的藥學研究工作提供可靠的參考依據。

[1] 仇錦春,廖清船,張永,等.香丹注射液對急性血瘀模型大鼠血液流變性及血小板聚集的影響[J].中國實驗方劑學雜志,2011,17 (4):137-139.

[2] 李斐,孟運蓮.香丹注射液對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用[J].中國現代藥物應用,2010,4(1):25-27.

R927.2

A

1673-5846(2014)01-0047-02

吉林省集安益盛藥業，吉林通化 134200