青少年暴力行為與多巴胺β羥化酶基因多態性的關聯分析

鄒志禮，蒙華慶△，胡 華▲，周 波，馬中銳，張洪銀

(1.重慶醫科大學附屬第一醫院心理衛生中心 400016；2.四川省人民醫院心身醫學中心,成都 610072)

近年來，青少年暴力攻擊行為已成為世界性的公共衛生問題，它不僅影響青少年本身的學習和社會功能，而且還影響家庭及社會的和諧穩定。引起學者們對此的廣泛關注，目前，對其進行了多方面的研究。在遺傳的研究中涉及到一系列的基因多態性，如：5-HT受體、5-HT轉運體(5-HTT)、多巴胺受體、兒茶酚胺氧化甲基轉移酶(COMT)、單胺氧化酶A(MOMA)等相關基因[1-6]，但結果卻不盡相同。多巴胺β羥化酶(dopamine-β-hydroxylase，DβH)是DA合成去甲腎上腺素的限速酶，其活性對兒茶酚胺的代謝產生重要的影響。先前學者發現DβH基因5′側翼區的-1021C→T多態性與血漿中的DβH活性相關[7]。同時有學者報道有行為問題的兒童血清中DβH水平較對照組低[8]。由此可以推測DβH基因結構或表達的差異可能與暴力行為的易感性有關。因此，本研究選取DβH基因與青少年暴力行為進行了關聯分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 根據官方記錄將新入的男性青少年服教人員分為暴力罪犯和非暴力罪犯。再根據修訂版外顯攻擊行為量表[9](MOAS)篩查，將MOAS加權分大于或等于4分，體力攻擊大于或等于1分定為有暴力行為，MOAS加權分小于4分，體力攻擊為0分定為無暴力行為。入組標準：所有受試者均為男性，漢族，年齡16～18歲。排除標準：根據DSM-IV排除青少年期抑郁癥、精神分裂癥等、家屬中有精神疾病史、嚴重軀體疾病及腦外傷、物質或藥物依賴史。(1)暴力組：官方記錄為暴力型違法亂紀的青少年，共107例，MOAS加權分大于或等于4分，且體力攻擊大于或等于1分，年齡(16.5±0.6)歲。(2)非暴力組：官方記錄為非暴力型違法亂紀的青少年，共107例，

表1 3組DβH基因rs1611115多態性基因型和等位基因頻率的比較[n(%)]

表2 3組DβH基因rs739398多態性基因型和等位基因頻率的比較[n(%)]

MOAS加權分小于4分，且體力攻擊為0分，年齡(16.6±0.6)歲。(3)對照組：為重慶市渝中區高級職業學校的學生，共107例，MOAS加權分小于4分，且體力攻擊為0分，既往無犯罪記錄，滿足上述入組標準和排除標準，年齡(16.5±0.6)歲。3組在年齡上差異無統計學意義(P>0.05)，本研究通過重慶醫科大學附屬第一醫院倫理委員會批準，所有受試者對本研究知情并簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1DNA的提取 所有受試者于清晨采集肘靜脈血3 mL置于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中，使用美國Omega生物技術公司的DNA試劑盒提取DNA。

1.2.2單核苷酸多態性(SNP)分型 所有樣本在上海天昊生物公司完成。本研究采用SNaPshot SNP分型技術對所有樣本進行SNP位點分型。引物通過在線Primer3 軟件設計。

1.2.3PCR循環程序 先95 ℃預變性2 min，在第一相循環94 ℃變性20 s，起始退火溫度65 ℃ 40 s，后每增加1個循環下降0.5 ℃，72 ℃延伸90 s，共11個循環，終退火溫度為59 ℃。第2相循環94 ℃變性20 s，59 ℃退火30 s，72 ℃延伸1.5 min，共24個循環，72 ℃總延伸2 min，4 ℃保存。 PCR產物通過HotStarTaq進行多重PCR獲得，PCR產物通過蝦堿酶(SAP)和外切酶Ⅰ(EXOⅠ)純化后再使用SNaPshot Multiplex試劑盒進行延伸反應。

1.2.4延伸循環程序 先96 ℃預變性1 min，在第一相循環96 ℃變性10 s，退火溫度52 ℃ 5 s，60 ℃延伸30 s，共28個循環，4 ℃保存。延伸產物用SAP純化后在ABI3130XL上樣。SNP分型、ABI3130XL測序儀上收集的原始數據均采用GeneMapper4.0(美國Appliedbiosystems公司)來分析。

1.2.5Hardy-Weinberg(H-W)平衡吻合度檢驗 為了保證本研究樣本能代表重慶地區的人群分布，采用χ2檢驗分別對3組DβH基因rs739398和rs1611115多態性的各基因型分布進行了H-W遺傳平衡吻合度檢驗。

2 結 果

2.1H-W平衡吻合度檢驗結果 結果發現3組中2個SNP位點的χ2值為0.164～2.439(P均>0.05)，符合H-W平衡法則。

2.23組DβH基因rs1611115基因型及等位基因頻率的比較 χ2檢驗顯示3組在rs1611115位點基因型及等位基因頻率差異均有統計學意義(P<0.05)。兩兩比較顯示暴力組與非暴力組在基因型及等位基因頻率上差異均無統計學意義(χ2=0.931、0.000；P>0.05)；而與對照組比較，在基因型上差異均有統計學意義 (χ2=8.025、10.224；P<0.05)，在等位基因頻率上差異也均有統計學意義 (χ2=7.754、7.754；P<0.05)，見表1。

2.33組DβH基因rs739398多態性的基因型及等位基因頻率的比較 χ2檢驗顯示3組在rs739398位點基因型和基因頻率差異均無統計學意義(P>0.05)。兩兩比較顯示暴力組與非暴力組在基因型及等位基因頻率差異均無統計學意義(χ2=0.353、0.876；P>0.05)；與對照組比較，在基因型上差異均無統計學意義(χ2=0.731、0.541；P均>0.05)；在等位基因頻率上差異也均無統計學意義(χ2=1.174、0.021；P>0.05)，見表2。

3 討 論

DβH是多巴胺合成去甲腎上腺素的限速酶，對兒茶酚胺的代謝產生重要的影響。2003年白平等[10]發現46例暴力型罪犯的血漿去甲腎上腺素水平明顯增高，這些研究表明DβH活性的改變可能與沖動和攻擊行為相關。編碼DβH的基因定位于9q34，長度接近23 kb，有12個內含子。本研究發現DβH基因rs1611115多態性無論是暴力組還是非暴力組青少年的CC基因型均少于對照組，提示這一多態性位點與暴力行為無關，但提示與暴力和非暴力青少年犯罪均有關。Hess等[11]研究發現，低活性的DβH-1021TT基因型可能與沖動、攻擊行為等相關的人格特征有關。DβH對去甲腎上腺素的合成具有限速作用，這可能使腦內多巴胺和去甲腎上腺素的水平發生改變，從而增加一些異常行為及精神疾病發生的風險。但本研究未發現暴力組與非暴力組青少年存在差異，對于青少年罪犯這一特殊群體來說，無論是暴力罪犯還是非暴力罪犯都可能存在著沖動、攻擊等個性特征，既往的研究也證實了男性青少年罪犯較對照組具有較高的沖動行為[12]。因此，未來可以在普通人群中盡可能將暴力攻擊行為純化做進一步研究。

本研究未發現DβH基因rs739398多態性與青少年暴力行為存在關聯。這可能與DβH-1021C/T或與之連鎖的其他多態性是影響DβH活性最主要的多態性有關[13]。Grigorenko等[14]將179名青少年罪犯分為暴力罪犯和非暴力罪犯組，并選取了COMT、DβH、MAOA 及MAOB基因共12個多態性位點進行關聯分析，結果未發現單個基因多態性位點在組別中存在差異。同時既往在MAOA、COMT、5-HTT的研究中結合不同的環境因素進行了分析[15-17]，并發現環境因素在其中起著重要的作用，尤其是童年有過受虐經歷的成年人，攜帶低活性的MAOA等位基因比攜帶高活性MAOA等位基因者更容易發生暴力攻擊行為。因此，暴力攻擊行為可能與基因與環境共同作用有關，未來需進一步聯合多基因或環境因素進行分析研究。

總之，本研究發現青少年暴力和非暴力犯罪都與DβH基因rs1611115多態性存在關聯，未發現DβH基因rs739398多態性與青少年暴力行為有關。未來將盡可能擴大樣本量，將暴力行為純化，結合環境因素、多基因、多位點進行交互分析。

[1]Conway CC,Keenan-Miller D,Hammen C,et al. Coaction of stress and serotonin transporter genotype in predicting aggression at the transition to adulthood[J]. J Clin Child Adolesc Psychol,2012,41(1):53-63.

[2]于躍，劉祥，楊振興，等.5-羥色胺轉運體基因多態性與青少年暴力犯罪行為的相關性研究[J].中華醫學遺傳學雜志， 2012，29(4)：468-473.

[3]Benis AM,Hobgood DK.Dopamine receptor DRD3 codes for trait aggression as Mendelian recessive[J].Med Hypotheses,2011,77(6):1108-1110.

[4]Hirata Y,Zai CC,Nowrouzi B,et al.Study of the catechol-o-methyltransferase (COMT) gene with high aggression in children[J].Aggress Behav,2013,39(1):45-51.

[5]Vevera J,Stopkova R,Bes M,et al.COMT polymorphisms in impulsively violent offenders with antisocial personality disorder[J].Neuro Endocrinol Lett,2009,30(6):753-756.

[6]黃雄，姜南，林振強，等.COMT基因多態性與精神分裂癥暴力攻擊行為的關聯性[J].廣東醫學，2010，31(1):82-83.

[7]Zabetian CP,Anderson GM,Buxbaum SG,et al.A quantitative-trait analysis of human plasma dopamine-beta-hydroxylase activity:evidence for a major functional polymorphism at the DβH locus[J].Am J Hum Genet，2001,68(2):515-522.

[8]Rogeness GA,Hernandez JM,Macedo CA,et al.Biochemical differences in children with conduct disorder socialized and undersocialized[J].Am J Psychiatry，1982,139(3):307-311.

[9]謝斌，鄭瞻培.修訂版外顯攻擊行為量表//中國行為醫學科學編輯委員會.行為醫學量表手冊[M].北京：中華醫學音像出版社，2001：352-353.

[10]白平，傅曉晴，林久茂，等.暴力行為人群性激素水平的異常[J].第四軍醫大學學報，2003，24(13)：1208-1209.

[11]Hess C,Reif A,Strobel A,et al.A functional dopamine-beta-hydroxylase gene promoter polymorphism is associated with impulsive personality styles,but not with a Vective disorders[J].J Neural Transm,2009,116(2):121-130.

[12] 吳巖峰，張建秋，譚釗安，等.245名男性罪犯沖動行為特征分析[J].中華行為醫學與腦科學雜志，2009，18(10)：927-929.

[13]湯宜朗，Cubells JF,Zabetian CP.多巴胺β-羥化酶與精神疾病[J].上海精神醫學，2005，17(1):47-49.

[14]Grigorenko EL,De Young CG,Eastmanl M,et al.Aggressive behavior,related conduct problems,and variation in genes affecting dopamine turnover[J].Aggressive behavior,2010,36(3):158-176.

[15]Frazzetto G,Di Lorenzo G,Carola V,et al.Early trauma and increased risk for physical aggression during adulthood:the moderating role of MAOA genotypen[J].PLoS One,2007,2(5):486-491.

[16]Brennan PA,Hammen C,Sylvers P,et al.Interactions Between the COMT Val108/158Met Polymorphism and Maternal Prenatal Smoking Predict Aggressive Behavior Outcomes[J].Biol Psychol,2011,87(1):99-105.

[17]Reif A,Rosler M,Freitag CM,et al.Nature and nurture predispose to violent behavior:serotonergic genes and adverse childhood environment[J].Neuropsychopharmacology,2007,32(11):2375-2383.