血清蛋白電泳的方法及臨床意義

閆曉琳

血清蛋白電泳的方法及臨床意義

閆曉琳

目的 調查血清蛋白電泳(SPEP)情況。方法收集本院2011年1月～2013年6月80例本院門診和住院患者的血清蛋白電泳分析。結果精確地描繪出患者蛋白質的全貌, 一般常見的是白蛋白降低、某個球蛋白區域升高, 提示不同的臨床意義。結論血清蛋白電泳對這類疾病的早期診斷, 療效觀察和預后判斷均有十分重要的意義。

血清蛋白電泳；臨床意義

血清是數種蛋白質的混合液, 都有它特有的等電點。蛋白質在等電點時呈電中性狀態, 它的分子所帶正負電荷量相等。如將蛋白質置于比其等電點較高的緩沖液中, 它們都游離成帶負電荷的質點, 在電場中均會向正極泳動。收集2011年1月～2013年6月80例門診和住院患者的血清蛋白電泳分析。

1 一般資料

本組收治的80例受檢驗患者行血清蛋白電泳分析, 男48例, 女32例, 年齡2～82歲, 平均年齡42.5歲。取新鮮無溶血現象的血清, 采用使用Sebia公司的“HYDRASYS”全自動電淋儀, 瓊脂糖凝膠、含緩沖液條帶、氨基黑染色液、脫色液、洗滌液、稀釋劑。

2 方法

打開電源, 將點樣器置于平整實驗桌表面, 孔號位于加樣孔上方按序排列, 每孔加10 μl樣品, 把點樣器放于濕盒內, 齒梳向上放置, 讓樣品于齒梳中擴散5 min, 開電泳蓋, 并升起電極和點樣支架。選擇蛋白質電泳程序。取出含緩沖液的海綿條帶, 并將條帶塑料襯墊物的背緊貼電極掛置。取出凝膠, 用1張薄濾紙輕輕地吸去凝膠表面多余的液體, 然后快速移去濾紙。加120～200 μl蒸溜水或去離子水于電泳儀的平臺框面的下1/3處。將凝膠片底邊緊靠框架底邊, 凝膠片背對框架［1］。彎曲凝膠片將其置于電泳框面上,確定凝膠背面的氣泡被完全趕走。放下2個支架。這時, 含緩沖液的條帶沒有接觸凝膠。不要強迫支架完全下降。從濕盒中取出點樣器。

3 討論

血清蛋白質(SPE)在給定的pH條件下根據其所帶電荷數將其分離成各種片段, 用瓊脂糖作介質時,血清蛋白質由五個不同遷移率區帶組成, ALB、α1、α2、β、γ球蛋白。

血清貯存于2～8℃和冷凍引起β-脂蛋白從β區域到α1或α2區域的陽極轉移；血清越陳舊轉移越多。血清(特別是含冷球蛋白成分)可能變得粘稠或混濁。應用稀釋劑預處理, 即加入25 μl液化劑于75 μl血清中, 在震蕩器上混勻15 s。勿使用溶血樣品,否則會增加α2和β含量, 避免使用血漿。染色之前作檢查, 染色液至少300 ml、脫色液至少1 L、廢液缸空置。

新鮮血清經醋酸纖維薄膜電泳后可精確地描繪出患者蛋白質的全貌, 一般常見的是白蛋白降低、某個球蛋白區域升高, 提示不同的臨床意義。白蛋白僅由肝細胞制造, 體內40%的白蛋白存在于體液中, 其分布于組織內和組織液內［2］。血管內外白蛋白經常交換而處于動態平衡中, 正常人每天由肝細胞粗面內質網制造的白蛋白為120～200 mg/kg, 相當11～15 g/d。肝合成白蛋白屬限速性, 僅在體內過量白蛋白丟失或破壞情況下, 合成速率才會增加。粗面內質網合成白蛋白, 由肝細胞分泌入肝竇而入血。肝細胞損傷可發生白蛋白合成、細胞內運輸和釋放障礙, 引起血中白蛋白減少。在肝臟炎癥性病變時, α1球蛋白增加, 和白蛋白呈負相關, 但在肝細胞破壞極為嚴重的肝壞死和肝硬化時則減少, 與白蛋白呈正相關。在致命的肝功能衰竭時, α1球蛋白可降到很低水平。肝病時如al球蛋白增加提示病情較輕, α2球蛋白減少常標志病情重篤。因此, 測定α1球蛋白對判斷肝炎患者的嚴重和預后有參考價值。此外, 在肝癌時α1球蛋白顯著上升。缺鐵性貧血時, 由于轉鐵蛋白的升高而呈現β區帶增高；而慢性肝病或肝硬變時, 白蛋白顯著降低, γ球蛋白升高2～3倍, 免疫球蛋白多克隆增高,甚至可見β-γ融合的橋連現象, 還可在γ區呈現細而密的寡克隆區帶；對單一克隆漿細胞異常增殖所產生的無抗體活性的均一免疫球蛋白稱M蛋白的檢測, 血清蛋白電泳是其首選的實驗診斷方法, 可在電泳區帶的僅α2-γ區呈現致密而深染, 高度集中的蛋白克隆增生區帶, 稱其為M蛋白區帶, 掃描后形成高而狹窄的單株峰, 若此峰在γ區其峰高與峰底寬之比>2：1, 則由于正常免疫球蛋白合成限制造成背景染色淺。由M蛋白所導致的一組疾病如多發性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、重鏈病、游離輕鏈病、半分子病、良性單株丙球血癥和雙M蛋白血癥等, 目前這類疾病已不屬罕見。血清蛋白電泳對這類疾病的早期診斷, 療效觀察和預后判斷均有十分重要的意義。

［1］ 劉建強, 孟青妹. 青海蟾蜍血清蛋白質成分的電泳分析. 中國獸醫科技, 2003,3(10):64-65.

［2］ 姜儻. 尿液蛋白與腎臟疾病.中化檢驗醫學雜志, 2002, 25(5):312-313.

R814

A

1674-9316(2014)01-0029-02

10.3969/J.ISSN.1674-9316.2014.01.019

150036 黑龍江省中醫藥科學院