PPARγ2基因多態性與2型糖尿病的相關性研究

鄧麗娜 羅浩虹 呂一婷 孫立明 林 虹

（廈門醫學高等專科學校護理系，福建 廈門 361008）

PPARγ2基因多態性與2型糖尿病的相關性研究

鄧麗娜 羅浩虹 呂一婷 孫立明 林 虹

（廈門醫學高等專科學校護理系，福建 廈門 361008）

目的研究過氧化物酶體增殖物激活受體γ2（PPARγ2）基因外顯子B的Pro12Ala多態性與2型糖尿病（T2DM）及其相關臨床特征的關系。方法選取廈門地區漢族人群300例（糖尿病組與對照組各150例），應用聚合酶鏈-限制性內切酶片段長度多態性方法對2組的基因型進行測定。結果T2DM組和對照組PPARγ2基因P等位基因和A等位基因的分布頻率分別為96.33%、96%和3.67%、4%，PP基因型頻率為93.33%、92%，PA+AA基因型頻率為6.67%、8%，2組基因型及等位基因頻率差異無顯著性（P＞0.05）。T2DM組A12變異與腰圍及腰臀比有關（P=0.013，P=0.004）。結論廈門地區漢族人群PPARγ2基因P12A變異與T2DM不相關，但可能是T2DM患者的脂代謝異常的重要因素之一。

過氧化物酶體增殖物激活受體γ2基因；2型糖尿病；多態性

過氧化物酶體增殖物激活受體γ2（PPARγ2）主要分布于脂肪組織，增加胰島素敏感性，減輕胰島素抵抗和調控糖代謝。Pro12Ala是該基因中較常見的多態性改變，PPARγ2基因P12A多態性是否與T2DM相關，此方面的研究尚少且結果不一致。本研究旨在探討廈門地區漢族人PPARγ2基因P12A多態性與T2DM相關性及P12A等位基因的擁有率。

1 對象與方法

1.1 研究對象：研究對象來自廈門地區漢族人群，根據1999年糖尿病診斷標準分為2組。2型糖尿病（T2DM）組為具有2型糖尿病家族史的T2DM患者150例，相互間無血緣關系，女性68例，男性82例，平均年齡（62±15）歲。對照組150例，為糖耐量正常者，糖尿病家族史陰性，女性82例，男性68例，平均年齡（57±13）歲。

1.2 方法

1.2.1 DNA提取：Omega E.N.Z.A全血DNA抽提試劑盒（D3392-02）提取全血DNA。

1.2.2 臨床指標監測：①取靜脈血測空腹血糖、餐后2 h血糖、三酰甘油（TG）、膽固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）；②采用酶化學法（HITACHI7170A全自動生化分析儀）測定血糖、血脂。③測定身高、體質量，計算體質量指數（BMI），水銀袖帶式血壓計測量血壓；測定腰圍、臀圍，計算腰臀比。

1.2.3 PPARγ2基因Pro12Ala多態性測定：以0.2 μg DNA為模板，用Thermo公司Dream Tag DNA聚合酶在50 μL反應體系下進行P C R擴增，引物參見文獻[2]：上游引物：5′-GCCAAT-TCAAGCCCAGTC-3′;下游引物:5′-GATATGTTTGCAGACAGTGTATCAGTGAAGGAATCGCTTTCCG-3′(上海生工生物股份有限公司合成)。反應條件：95 ℃預變性5 min；94 ℃變性40 s，55 ℃退火40 s，72 ℃延伸40 s，共35個循環,末次循環后72 ℃延伸7 min。反應在Bio Rad熱循環儀中進行。PCR產物片段長為267 bp，經2%瓊脂糖凝膠電泳確認擴增結果后，PCR產物經乙醇沉淀回收,繼以限制性內切酶HpaⅡ(美國NEB公司)，在37 ℃水浴酶解2 h，經2%瓊脂糖凝膠電泳后，經Sybr Green I染色后于紫外燈下觀察基因型(PP型、PA型及AA型)。

1.2.4 統計學處理：以Hardy-Weinberg平衡檢驗確認研究樣本的群體代表性，運用基因計數法計算各組基因型頻率及等位基因頻率。采用計算機SPSS13.5統計軟件進行統計學處理，計量資料比較采用t檢驗，計數資料比較采用卡方檢驗，以P＜0.05表示差異有顯著意義。

2 結 果

2.1 一般資料的比較：兩組年齡、性別、身高、體質量、BMI、腰圍、臀圍均無顯著性差異；但T2DM組腰臀比、血糖、血壓均明顯高于對照組。T2DM組TG高于對照組，差異顯著；TC、LDL較對照組高，HDL較對照組低，差異無顯著性。

2.2 兩組P12A基因型與Ala12等位基因頻率分布：兩組PPARγ2基因分別為PP基因型頻率93.33%、92%，PA+AA基因型頻率6.67%、8%，P等位基因和A等位基因的分布頻率96.33%、96%和3.67%、4%，差異無顯著性。

2.3 PPARγ2基因型與臨床變量的關系：T2DM組P12A基因變異與腰圍、腰臀比相關（P=0.013，P=0.004），攜帶A等位基因的糖尿病患者體質量、BMI、臀圍、TC、HDL、LDL均較PP基因型高，但差異無顯著性（P＞0.05）。

3 討 論

我們對150例2型糖尿病患者及相應的對照組進行分析，發現2組的PPARγ2基因P12A基因型與等位基因頻率無顯著差異，2組均以PP型基因為主，A等位基因頻率分別為3.67%和4.0%，差異無顯著性（P=0.832）。在2型糖尿病人群中，有Pro12Ala基因變異者其腰圍、腰臀比高于無變異者，差異具有顯著性，提示Pro12Ala基因變異可是2型糖尿病患者腹型肥胖的重要因素之一。其機制可能為：PPARγ2特有的外顯子B發生P12A基因變異，導致氨基酸序列的改變，造成其結構的改變，從而影響PPAR對脂肪分化的調節及對相關基因的調控功能下降。從而導致患者腹部脂肪增加，腰圍增大。Deeb等[1]通過對白種人群研究，發現PPARγ2基因的P12A變異與糖尿病發病機制相關，與本文研究結果不同，推測可能與種族差異有關，也可能與我們的研究樣本數量較少有關。Mori等[2]報道PPARγ2基因變異與糖尿病無關。毛新民等[3]研究發現新疆維吾爾族人A12等位基因頻率與白種人群相近，其基因變異與糖尿病無關，與腰圍及腰臀比有關，與本文結論相同。

[1] Deeb SS,Fajas L,Nemoto M,et al.A Pro12Ala substitution in body mass index and improved insulin sensitivity[J].Nat Genet,1998,20(3): 284-287.

[2] Mori Y,Kim-Motoyama H,Katakura T,et al.Effect of the Pro12Ala variant of peroxisome proliferator-activated receptorγ2 on adiposity,fat distribtuion,and insulin sensitivity in Japanese men[J]. Biochem Biophys Res Commun,1998,251(1):195-198.

[3] 毛新民,馬曉麗,李琳琳.PPAR-C2基因P12A變異與2型糖尿病的相關性研究[J].新疆醫科大學學報,2005,28(2):95-98.

R587.1

B

1671-8194（2014）35-0074-01

2009年福建省衛生廳課題“T2DM患者PPARγ2基因多態性與脂肪細胞因子相關性研究”（2009-CXB-75）