氧化應激檢測在男性不育臨床中的應用

陳 捷

（中山市博愛醫院生殖中心，廣東 中山 528403）

氧化應激檢測在男性不育臨床中的應用

陳 捷

（中山市博愛醫院生殖中心，廣東 中山 528403）

在當前，有大量研究認為氧化應激損傷是導致一系列男性生殖功能病變的重要影響因素。臨床在檢測男性不育時，主要可采用氧化應激檢測來進行。為此，本研究旨在結合相關文獻資料，對當前氧化應激檢測在男性不育的臨床應用情況進行綜述。

氧化應激檢測；男性不育；臨床應用

在現階段，我國發生不育癥的概率在10.5%～15.7%，其中有接近一半的原因是由精子功能缺陷導致男性不育所造成的。但在目前，精子功能異常的機制并不是十分明確。有大量研究認為，這主要跟男性生殖道內活性氧（ROS）過高，給精子質量及其功能造成相當程度的毒害作用有關。臨床在檢測男性不育病因時，可通過氧化應激檢測來進行，效果相對較好。

1 氧化應激與男性不育

氧化應激（OS）是在活性氧的生成遠遠高于機體抗氧化防御時所導致的一種對細胞有毒害作用的病理性生物化學反應。機體產生氧化應激主要跟反應性的氧化物和生物抗氧化劑之間的均衡受到破壞有關，使得活性氧的濃度提升明顯，導致細胞質膜、蛋白質和DNA等遭到破壞，損害細胞結構，進而發生細胞死亡。在精液當中，活性氧一般是由超氧陰離子（O-2）、羥自由基（-OH）以及過氧化氫（H2O2）等幾種組成的。男性不育的原因與活性氧的生成存在著很大關系。Venkatesh等[1]體外試驗證實了濃度不高的H2O2和精子之間孵育可以對精子的獲能、運動及其與卵子的結合能力等起到刺激效果。精子的頂體反應需要有正常濃度的H2O2參與，但在H2O2濃度＞50 μmol/L條件下，往往會氧化位于精子質膜、線粒體膜等的蛋白巰基，使膜結構受損，進而大大降低了精子功能，嚴重時甚至導致其功能喪失，使得男性出現不育狀況。一般認為，機體在受到外部或內部有害因素的刺激下，ROS的生成會趨于明顯，導致男性不育。其中，外部有害因素包括生殖道感染、非特異性炎癥、雌激素、精索靜脈曲張，以及環境污染及煙酒史等；而內部（精子）有害因素主要包括線粒體呼吸鏈自氧化、NADPH氧化酶與其底物發生反應、未成熟或畸形精子受G6PD介導等幾種。

2 活性氧的毒性作用

在每次射精時，精液通常會受到氧化物酶陽性白細胞、異常精子等潛在性OS的污染，部分精子在受氧化后，還會出現功能降低或喪失的現象。為此，可以說OS給男性的生育能力造成的影響只是程度大小問題。細胞中的脂類成分、蛋白質成分，以及核糖核酸等成分均能夠充當活性氧的靶分子，精子氧化損害的程度除了與活性氧的性質及數量有關之外，還受到活性氧的接觸時刻、持續時間、溫度，以及氧濃度等多種因素有關。

3 氧化應激檢測在男性不育臨床中的應用

3.1 化學發光檢測法的臨床應用

在精液標本中，可以觀察到ROS能夠發出微弱的光。當在精液中加入冷光劑魯米諾之后，ROS自身的能量便會向魯米諾移動。此時可將處于激發狀態的魯米諾進行基態回復，讓魯米諾發出425 nm左右的化學光。臨床通過采用該化學發光檢測法，能夠用于對O-2、H2O2以及-OH等幾種氧自由基進行檢測。不過從某種程度上來說，這也造成了測定選擇性差的情況。相比較之下，劉居理等[3]采用光澤精對精液中的ROS進行測定，僅僅在O-2存在的情況下才有化學光現象出現，選擇性效果較好。光澤精是吖啶類中少數能夠發出化學光的化學物，在附因子的誘導下，存在功能性障礙的男性精子會被檢測出有化學發光信號。

3.2 精漿SOD活性檢測法的臨床應用

在黃嘌呤氧化酶反應系統下，會有一定量的O-2產生，并經O-2氧化羥胺，從而形成亞硝酸鹽。臨床精漿SOD活性檢測法正是借助這種原理來實現的，并在顯色劑的作用下，讓精液標本中的亞硝酸鹽顯示成紫紅色，最后經可見光分光光度計檢測吸光度。在譚雪蓮等[4]的研究中，通過黃嘌呤化酶法測定精漿SOD活性，男性不育組ROS要明顯高于有生育力的男性健康組，提示采用該OS檢測法能夠有效用于檢測男性不育。而姜全心[5]對91例男性不育患者行精漿SOD活性檢測，發現在精子活動力上，男性不育患者的精漿SOD含量大概在（461.4± 121.4）mmol/L，正常男性為（643.5±125.4）mmol/L。SOD等酶類抗氧化劑的減少，使其在中和ROS的毒性作用的能力上出現下降，無法很好地清楚氧自由基，影響了男性的生育能力。

3.3 精漿丙二醛含量檢測法的臨床應用

硫代巴比妥酸（TBA）比色法、精漿丙二醛（MDA）均屬于不飽和脂肪酸過氧化的終產物，臨床可通過檢測其含量來對精子膜發生脂類過氧化的具體情況進行反映。一般在酸性情況下，TBA和MDA經加熱后會有粉紅色產物生成，不過受到TBA專一性較差的影響，除了能夠與MDA發生反應之外，TBA還能夠與部分脂質過氧化物衍生物的分解產物產生反應，因此認為TBA不具備特異性。不過近些年來，有研究表明，高效液相色譜檢測法能夠對MDA和TBA二者間的反應復合物進行分離，同時還可進行定量檢測，其特異效果相對較好，而且還具有較高的靈敏度。在毛毳等[6]的研究中，采用高效液相色譜法對93例不育男性的MDA進行檢測，證實不育男性的精漿DNA含量相對較高，而阻塞性無精子男性由于其精液源于含有重要抗氧化物質的前列腺，無精子可發生MDA現象，其精漿MDA的含量與正常男性均比較低。

4 氧化應激檢測的臨床應用展望

在當前，大約有75%的男性不育是由少精子癥、弱精子癥所造成的。而出現這種情況往往跟男性精液中的ROS過量導致OS有關，使得男性精液中精子的密度及活力均出現明顯降低，給精子的獲能與頂體反應帶來抑制作用，使精子DNA出現氧化損傷，從而發生男性不育情況。臨床在治療男性不育患者時，大多數研究認為可給予維生素C、維生素E等抗氧化藥物治療。而通過給予男性不育患者化學發光檢測法、精漿SOD活性檢測法以及精漿丙二醛含量檢測法等氧化應激檢測，則可以為其治療提供重要的數據參考。

總的來說，活性氧是造成男性不育的重要因素之一，臨床給予氧化應激檢測，具有重要的診斷價值，值得推廣應用。

[1] Venkatesh S,Deecaraman M,Kumar R,et a1.Role of reactiVe oxygen species in the pathogenesis of mitochondrial DNA(mtDNA)mutatiom in maleinfertility[J].1ndian J Med Res,2009,129(2):127-137.

[2] 邱玉玲.活性氧對男性不育的影響及精液氧化應激的檢測方法[J].應用預防醫學,2009,15(2):126-128.

[3] 劉居理,羅明.活性氧檢測在男性不育中的應用價值[J].現代診斷與治療,2009,20(4):223-225.

[4] 譚雪蓮,黃永漢,李穎嫦,等.男性不育患者精液活性氧和精漿超氧化物歧化酶活性測定的臨床價值研究[J].實驗與檢驗醫學,2012,26(5):13-15.

[5] 姜全心.男性不育患者精漿SOD和MDA含量的觀察[J].臨床和實驗醫學雜志,2005,4(4):132-134.

[6] 毛毳,張丹,王成芳,等.氧化應激性損傷對不育男性精子功能的影響[J].四川大學學報(醫學版),2010,7(15):421-422.

R698.2

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1671-8194（2014）22-0383-02