常見臨床標本的微生物檢驗程序分析

閻莉范

（大連市金州區第一人民醫院檢驗科，遼寧 大連 116100）

常見臨床標本的微生物檢驗程序分析

閻莉范

（大連市金州區第一人民醫院檢驗科，遼寧 大連 116100）

目的 為進一步提高本文臨床標本微生物檢驗陽性率，對常見臨床標本的微生物檢驗程序進行分析。方法 以大腸埃希菌、腦膜炎奈瑟菌舉例說明，對其微生物檢驗程序和注意事項進行逐一說明。結果 糞便樣本在伊紅美藍瓊脂平板上存在黑色中心有光澤的菌落，在平板上挑選出典型菌落，玻片凝聚試驗為不凝聚，其臨床報告結果為：“該標本未培養出致病性大腸埃希菌”。該血液標本在巧克力色血平板上有濕潤、光滑、黏性、透明、中等大小的菌落存在，經革蘭染色呈陰性反應，并經相關生化檢驗均符合腦膜炎奈瑟菌相關標準，其臨床檢驗報告結果為“該標本發現腦膜炎奈瑟菌生長”。結論 所有常見臨床標本的微生物檢驗都要本著安全、準確、快速、敏感、低耗的原則，以標準化的檢驗程序保證微生物檢驗的準確性。

臨床標本；微生物檢驗；檢驗程序

隨著臨床對于抗生素合理使用以及醫院感染控制等意識的顯著增強，對常見臨床標本進行微生物檢驗已經成為臨床醫院的一項重要工作[1]，該項工作的質量高低可以直接反映該院的醫院感染防控水平以及相關疾病的診斷、治療情況，為進一步提高本文臨床標本微生物檢驗陽性率，對常見臨床標本的微生物檢驗程序進行分析。現將研究情況報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料：糞便標本、血液標本、伊紅美藍瓊脂平板（EMB）、培養箱、雙糖、蔗糖胨水、胰胨肉湯、培養基瓶、巧克力色血平板、顯微鏡。

1.2 方法

1.2.1 大腸肝菌檢驗：選取患者有膿血或者黏液的糞便2 g，將糞便樣本放置在滅菌的廣口瓶中，及時送檢。將糞便標本劃線接種在伊紅美藍瓊脂平板上，放置在（35±1） ℃的培養箱中進行培養，時間在16～24 h，培養后觀察菌落，在菌落中挑取大腸桿菌可疑菌落，將其移種在雙糖、蔗糖胨水中，觀察大腸桿菌生化反應，如果符合大腸桿菌的生化反應標準，再將該菌挑取下和致病性大腸桿菌的多家診斷血清聯合進行玻片凝聚性實驗[2]。

1.2.2 腦膜炎奈瑟菌檢驗：在患者的擬采血位置扎好止血帶，在選擇的靜脈穿刺位置用碘酊進行消毒，碘酊干后再使用乙醇脫碘消毒，抽取血液標本5 mL，將血液標本立即注入經的液體培養基內，輕輕搖晃使血液標本和經預熱的胰胨肉湯培養基液充分混合，放置在濃度為10%的二氧化碳環境中進行培養[3]，如果發現存在可疑細菌，挑取可疑細菌移種在巧克力色血平板上進行劃線分離，注意要對巧克力色血平板進行事先的預熱處理，將接種好的巧克力色血平板放置在濃度為5%～10%，溫度為35 ℃的二氧化碳環境中進行培養，時間為18～48 h，觀察是否有腦膜炎奈瑟菌生長，再提取菌落繼續進行相關生化檢驗以區分其他奈瑟菌。

2 結 果

2.1 大腸肝菌檢驗：該糞便樣本在伊紅美藍瓊脂平板上存在黑色中心有光澤的菌落，在平板上挑選出典型菌落，玻片凝聚試驗為不凝聚，其臨床報告結果為：“該標本未培養出致病性大腸埃希菌”。

2.2 腦膜炎奈瑟菌檢驗：該血液標本在巧克力色血平板上有濕潤、光滑、黏性、透明、中等大小的菌落存在，經革蘭染色呈陰性反應，并經相關生化檢驗均符合腦膜炎奈瑟菌相關標準，其臨床檢驗報告結果為“該標本發現腦膜炎奈瑟菌生長”。

3 討 論

大腸桿菌為一種常見的革蘭陰性短桿菌，可以發酵多種糖類，可以產酸、產氣，大腸埃希菌致病物質是血漿凝固酶，可以導致食物中毒及成人腹瀉的發生。腦膜炎奈瑟菌是流腦的病原菌，經革蘭染色呈陰性，并呈雙排列，需氧，在臨床培養中對于營養基的要求很高，分解糖類不產氣，但是產酸，在進行人工培養中如果不進行及時的移種，會被自身產生的自溶酶所溶解。

常見的臨床標本有血液、骨髓液、糞便、尿液、痰液等，要想達到微生物檢驗的理想標準就一定要從標本的采集、送檢、培養等各個環節入手，嚴格規范相關程序，避免由于人為原因導致的檢驗失敗。例如本文對于糞便標本的采集，就要在采集后立即送檢，如果沒有及時送檢很容易出現雜菌的過度生長，同時在采集時要對患者進行詳細的健康教育，避免由于糞尿混合而導致的陽性檢出率錯誤，在臨床標本的采集上需要注意無菌操作的規范性、采集時間的合理性，做好安全防護，并對樣本進行及時的檢驗；血液標本的培養要注意血液和培養基的比例，通常為1∶10，并在檢驗前要對患者的服藥情況進行了解，如患者在檢驗前曾經服用過磺胺類的藥物也可以進行檢驗，可以在培養基中加入5 mL的對氨苯甲酸。

實踐中我們發現可以顯著提高臨床標本微生物檢驗質量和水平的方法是：加速細菌生長，例如在培養基中加入營養物質，改善培養環境，保持培養溫度的恒定，或者加入一些可以抵消標本中抗菌物質的藥物；快速分離，例如多次移種，可以提高標本微生物檢驗的陽性率；簡易快速的鑒定，例如通過簡單、快速的生化反應及時檢驗，避免感染的進一步擴散；對細菌學檢驗單的復核，例如對于送檢單的標本來源科室、目的等信息進行再一次的核實，避免進行的操作未達到送檢目的。臨床微生物檢驗中另一個經常遇到的問題就是污染菌的干擾，這也是臨床標本微生物檢驗陽性率始終較低的問題之一[4]，我們臨床主要應用的方法是：首先對菌落的位置進行觀察，如是否出現在標本的劃線部位；通過相關知識對于細菌的特點是否符合常規進行判斷；對于培養的時間長短是否符合常規情況進行分析[5]；對可以細菌進行圖片觀察，利用形態來識別是否是目的菌。

目前，本院的微生物實驗室依舊處于儀器落后、設備不全、檢驗水平低、檢驗速度慢以及缺乏專業化人員的問題，根據這種情況，我們必須克服困難，在標準化程序處理上提高水平，作為檢驗人員也要積極、不斷學習各種常見臨床標本微生物的特性、檢驗流程、注意事項，細心、耐心的完成各項微生物檢驗工作，對于臨床中所出現的問題及時尋求答案，積極克服所面臨的困難，最大程度提高本院常見臨床標本的微生物檢驗質量，為臨床治療、診斷提供最為可靠的參考依據。綜上所述，所有常見臨床標本的微生物檢驗都要本著安全、準確、快速、敏感、低耗的原則，以標準化的檢驗程序保證微生物檢驗的準確性。

[1] 段曉丹.常見臨床標本的微生物檢驗程序[J].按摩與康復醫學, 2012,3(10):6.

[2] 孫大惠.臨床微生物檢驗的質量控制[J].內蒙古中醫藥,2013,32 (24):98-99.

[3] 郭基平,袁暉蓉,陳幼紅,等.標本涂片革蘭染色在臨床微生物檢驗中的作用[J].中國醫藥導報,2010,3(32):155.

[4] 顏曉寧,周志敏.加強臨床微生物檢驗的質量控制和生物安全管理[J].中國社區醫師(醫學專業),2010,14(23):140.

[5] 周正任.醫學微生物學[M].6版.北京:人民衛生出版社,2003:108, 152-152.

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