胰島素受體、p53在合并2型糖尿病乳腺癌患者腫瘤組織中的表達(dá)及臨床研究

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（江蘇省徐州市中心醫(yī)院乳腺科，江蘇 徐州 221000）

胰島素受體、p53在合并2型糖尿病乳腺癌患者腫瘤組織中的表達(dá)及臨床研究

李昌文王偉劉軍曹蘇生*

（江蘇省徐州市中心醫(yī)院乳腺科，江蘇 徐州 221000）

目的 探討胰島素受體、p53 腫瘤分子學(xué)指標(biāo)在合并 2 型糖尿病乳腺癌患者腫瘤組織中的表達(dá)情況，并對其與 2 型糖尿病的關(guān)系及臨床價值做出評判。方法 合并 2 型糖尿病乳腺癌患者 68 例，對照非糖尿病乳腺癌組患者 145 例，取石蠟切片作胰島素受體，p53 指標(biāo)的免疫組化檢測。并分析比較兩組指標(biāo)的陽性率。結(jié)果 在合并 2 型糖尿病組中，胰島素受體陽性比例 76.5%（52/68），陰性 23.5%（16/68），對照組胰島素受體陽性比例 31.7%（46/145），陰性 68.3%（99/145），二者在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有差別（χ2=37.3，P＜0.01）。在合并 2 型糖尿病組中，p53 陽性比例 66.2%（45/68），陰性 33.8%（23/68），對照組 p53 陽性比例 47.6%（69/145），陰性 52.4%（76 /145），二者在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有差別（χ2=6.43，P＜0.05）。結(jié)論 在 2 型糖尿病合并乳腺癌患者腫瘤組織中胰島素受體高表達(dá)，p53 突變，預(yù)示患者不良預(yù)后，因加強(qiáng)隨訪及治療。

胰島素受體；p53；2 型糖尿??；乳腺癌

越來越多的研究發(fā)現(xiàn)糖尿病患者發(fā)生乳腺癌的風(fēng)險明顯增高。隨著糖尿病和乳腺癌發(fā)病率的逐年增加，同時患2型糖尿病和乳腺癌兩種疾病的患者也越來越多。2型糖尿病（T2DM）和癌癥有許多共同的危險因子。其中糖尿病和乳腺癌的發(fā)病率均明顯上升，在發(fā)展中國家2型糖尿病在成人的發(fā)病率已超過9.7%，而有16%的乳腺癌患者合并糖尿病，部分流行病學(xué)研究結(jié)果顯示：糖尿病可顯著增加癌癥病死率，有糖尿病和沒有糖尿病的乳腺癌比較，5年病死率明顯增多（風(fēng)險比1.39）[1]。國外大量研究發(fā)現(xiàn)糖尿病是乳腺癌的高危因素之一，因此二者之間的關(guān)系越來越受到重視。本研究回顧分析徐州市中心醫(yī)院2010年1月至2011年12月合并糖尿病的乳腺癌患者68例，總結(jié)這一亞群乳腺癌患者的臨床特征，并用免疫組織化學(xué)方法檢測癌腫組織中胰島素受體（insulin receptor，IR）及p53的表達(dá)變化，探討合并糖尿病乳腺癌患者與單純?nèi)橄侔┗颊吣[瘤組織生物學(xué)差別，為臨床個體化診治提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取徐州市中心醫(yī)院2010年1月至2012年12月合并糖尿病的乳腺癌患者68例，接受手術(shù)治療的同時合并2型糖尿病的乳腺癌患者為研究對象，并以同期非糖尿病乳腺癌患者作為對照組，將其中滿足有隨訪結(jié)果并且乳腺癌組織石蠟切片中仍能見到癌組織的石蠟切片做胰島素受體、p53指標(biāo)的免疫組化檢測。

1.2 檢測方法

①主要抗體試劑：采用Neomrkers公司單克隆鼠抗人胰島素抗體，p53單克隆抗體購自丹麥DakoA/S公司，為鼠抗人單克隆抗體。②免疫組化方法及結(jié)果判定：采用Neomrkers公司單克隆鼠抗人胰島素抗體，按SP法以磷酸鹽緩沖液代替一抗為陰性對照，IR陽性腫瘤為內(nèi)對照。IR主要定位于細(xì)胞膜，相應(yīng)部位出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。為了兼顧染色強(qiáng)度（SI）和陽性細(xì)胞的百分比（PP），采用定性半定量法，即免疫反應(yīng)數(shù)（IRS）表示其表達(dá)水平。具體方法：低倍鏡下（×100）隨機(jī)選擇5個視野，高倍鏡下（×400）計(jì)數(shù)，每個視野下計(jì)數(shù)≥100個細(xì)胞。評分標(biāo)準(zhǔn)IRS=SI×PP，SI：陰性為0，淡黃色為1，黃色為2，棕黃色為3；PP陽性＜5%為0，5%～25%為1，25%～50%為2，50%～75%為3，75%～100%為4。每例IRS為5個視野的平均值[2]。采用Dako公司的En Vision二步法染色系統(tǒng)，免疫組化染色方法按照說明書進(jìn)行。p53以TBS緩沖液按1∶50和1∶20的比例稀釋后滴加，40 ℃過夜，二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹膠封片。p53分值：p53為胞核著棕色，由染色強(qiáng)度和染色百分比來決定分值。染色百分比為在高倍視野下以陽性細(xì)胞數(shù)0%、1%～25%、25%～75%、＞75%分別賦值為1、2、3、4。染色強(qiáng)度按照無染色、弱染色、中等染色、強(qiáng)染色分別賦值0、1、2、3。染色百分比和染色強(qiáng)度的乘積為最后評分，0～12分：0分為陰性，1～4分為（+），58分為（++），9～12分為（+ + +）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，顯著性水平P=0.05。

2 結(jié) 果

本組對68例2型糖尿病乳腺癌患者及145例對照組乳腺癌患者做胰島素受體及p53 （抑癌基因）的免疫組化檢測，并分析了其表達(dá)情況。分析結(jié)果顯示：在合并2型糖尿病組中，胰島素受體陽性比例76.5%（52 /68），陰性23.5%（16/68） ，對照組胰島素受體陽性比例31.7% （46 /145），陰性68.3%（99/145），二者在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有差別（χ2=37.3，P＜0.01）。在合并2型糖尿病組中，p53陽性比例66.2%（45 /68），陰性33.8%（23 /68），對照組P53陽性比例47.6%（69 /145），陰性52.4%（76 /145），二者在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有差別（χ2=6.43，P＜0.05） 。

3 討 論

胰島素受體基因位于第19 號染色體短臂（19p13.2～13.3），長150 kb，包含22個外顯子，它編碼胰島素受體酪氨酸激酶的單鏈前體，經(jīng)過二聚體化和加工，變?yōu)橐葝u素受體。IR有兩種亞型：IR-A 和IR-B，二者皆由胰島素受體轉(zhuǎn)錄蛋白選擇性剪接而來。IR-A可與胰島素和IGF-2 高親和力結(jié)合，在腫瘤和胚胎形成過程中介導(dǎo)抗凋亡、促有絲分裂和細(xì)胞生長效應(yīng)[3]。胰島素、IR-A 結(jié)合后主要激活Ras/Erk通路，誘導(dǎo)細(xì)胞增殖存活相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，從而介導(dǎo)細(xì)胞生長和增殖。也可磷酸化胰島素受體底物1/2以及Shc蛋白，繼而激活一系列調(diào)控細(xì)胞凋亡和存活的效應(yīng)分子，包括BAD、Mdm2、FKHR、NFkB 以及JNK，同時還激活調(diào)控蛋白合成及細(xì)胞增殖的信號分子雷帕霉素靶蛋白的表達(dá)。胰島素和IR-B 結(jié)合后主要激活PI3K/Akt 通路，作用于糖脂代謝效應(yīng)分子（GLUT4、PDE3B、Foxa2、GSK3和AMPK等），介導(dǎo)細(xì)胞代謝[4]。研究發(fā)現(xiàn)，在有胰島素抵抗的2型糖尿病患者中，IR-A/IR-B 較高自發(fā)性肥胖和糖尿病恒河猴的骨骼肌和肝臟中高表達(dá)IR-A。乳腺、結(jié)腸、肺等腫瘤中主要表達(dá)IR-A，乳腺癌標(biāo)本中IR-A 占IR的40%～80%，正常乳腺標(biāo)本中IR-A僅占IR的30%～50%[5]。與本研究結(jié)果一致。IR-A 的表達(dá)還與腫瘤的惡性程度相關(guān)，惡性程度越高，IR-A的表達(dá)越多[6]。這些發(fā)現(xiàn)或許能為人們在腫瘤的預(yù)防和治療上提供一些新的思路：代謝紊亂疾病是腫瘤的危險因素，研發(fā)能阻滯IR-A和包含亞型A的雜合受體過度表達(dá)的藥物應(yīng)當(dāng)成為未來腫瘤治療的重大策略之一。

在多數(shù)腫瘤中，常常有p53突變，從而導(dǎo)致細(xì)胞分化異常、腫瘤凋亡受阻以及細(xì)胞惡性增殖。p53突變在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中十分重要，對于乳腺腫瘤，在我們的研究結(jié)果中同樣證實(shí)了p53在乳腺癌中的陽性比率較高這一點(diǎn)（在2型糖尿病乳腺癌患者組中，p53陽性比率占69%；對照組占58%），且p53突變型腫瘤在伴發(fā)糖尿病的乳腺癌患者中更加常見（P＜0.05）。有研究提示p53基因突變主要與細(xì)胞增殖呈正相關(guān)，而不是以降低凋亡為主，這與文獻(xiàn)[7]提示的p53與2型糖尿病的信號通路IGF、IGFBP存在交叉對話（Cross-Talk）有一致性，p53突變型腫瘤在伴發(fā)糖尿病的乳腺癌患者中更常見，具有臨床病理指標(biāo)價值，對指導(dǎo)臨床治療有一定意義。

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Expression and Clinical Study of IR and p53 in Tumor Tissue of Breast Cancer Patients with Type-2 Diabetes Mellitus

LI Chang-wen, WANG Wei, LIU Jun, CAO Su-sheng
(Department of Breast, Xuzhou Central Hospital, Xuzhou 221000, China)

Objective To investigate the expression of IR(insulin receptor)and p53 in the tumor of breast cancer patients with type 2 diabetes mellitus. Methods 68 breast cancer patients with type 2 diabetes mellitus who underwent surgery were analyzed retropectively. The expression of IR and p53 measured by immunohistochemistry(IHC)were compared to the 145 patients without type 2 diabetes mellitus. Results There was a statistically significant difference of IR and p53 expression between the patients with type 2 diabetes mellitus and the non-ones. Conclusion There were more patients with IR and p53 positive in type 2 diabetes mellitus group, which might indicate the pathogenisis of breast cancer. However, if they exerted aprognostic effect on breast cancer patients need further study.

IR; p53; Type-2 diabetes; Breast cancer

R737.9；R587.1

：B

：1671-8194（2014）30-0022-02

*通訊作者