Kiss－1／GPR54系統在不同發育階段五指山豬下丘腦中的表達

荀文娟，侯冠彧，周漢林，施力光，曹 婷

（中國熱帶農業科學院熱帶作物品種資源研究所，海南儋州571737）

Kiss－1基因于1996年被發現，并被鑒定為轉移抑制基因，在具有不同轉移能力的黑色素瘤細胞中表達存在差異［1］。隨后該基因編碼的產物kisspeptin被發現，G 蛋白偶聯受體54（G protein－coupled receptor 54，GPR54）是kisspeptin 的受體。在人、牛、羊、鼠等哺乳動物研究發現，Kiss－1 基因與GPR54基因一起組成Kiss－1／GPR54系統，參與動物下丘腦－垂體－性腺軸功能的調節［2］。Lents等［3］研究發現，腦室內注射Kisspeptin后備母豬初情日齡提前。Tomikawa等［4］也在初情期母豬下丘腦中檢測到Kiss－1基因高水平表達，表明下丘腦Kiss1／GPR54可能是母豬初情啟動的關鍵調節基因。鑒于Kiss－1基因在初情期啟動調控中的重要性，本研究推測Kiss－1基因可能與五指山豬高繁殖力和性早熟有關。一直以來，中國地方品種豬的高繁殖能力始終是中外學者的研究熱點。五指山豬產于海南省，是我國體型最小、體重最輕的珍稀品種，具有繁殖率高、性成熟早等特性［5］。

本試驗以五指山豬作為研究對象，檢測Kiss－1／GPR54系統在不同發育階段五指山豬下丘腦中的表達，從而為闡明動物生殖機理和早熟品種選種選育提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

選取日齡相近、健康、無生殖缺陷五指山母豬16頭，分別于30、60、90（初情期）和120日齡屠宰，采集血清和下丘腦組織樣品，血清樣品于－20 ℃冰箱保存，組織樣品液氮速凍，－70 ℃冰箱保存備用。

1.2 試劑與儀器

RNAiso Plus 總RNA 提取試劑、反轉錄試劑盒、熒光定量PCR 試劑盒（SYBR R Premix Ex TaqTM）購自Takara；熒光定量PCR 儀購自eppendorf。

1.3 總RNA 的提取及cDNA 第一鏈合成

采用TaKaRa公司RNAiso Plus試劑盒提取總RNA。……