外周血循環DNA在卵巢癌中研究進展

閆立志宋芳郝金奇余艷琴

(1.包頭醫學院，014060；2.內蒙古包鋼醫院，010059)

卵巢癌是嚴重威脅女性健康的的惡性腫瘤之一，由于缺少有效的早期診斷方法，其死亡率一直居婦科腫瘤之首，且發病率呈逐年上升的趨勢。由于卵巢癌發病隱匿，早期癥狀不明顯，缺乏有效的早期診斷方法和篩查指標，確診的卵巢癌患者約70%已屬晚期[1]。目前，臨床最常用的診斷指標是血清學標志CA-125，多用于卵巢癌診斷及療效觀察[2]。但CA-125敏感性和特異性在卵巢癌不同分期、分型各不相同，預后判斷價值是有限的，迫切需要尋找新型生物標志物[3]。循環DNA檢測對卵巢癌的特異性基因進行確定具有重要的臨床意義，是一種很有潛力的指標，有可能成為卵巢癌的早期診斷、療效評估和預后判斷等方面新的腫瘤標志物。

1 循環DNA研究進展

循環DNA是一種存在于血液及體液中的游離DNA。循環DNA在20世紀40年代前就已被發現[4]，由于缺乏高靈敏性和高特異性的分離方法，在較長時期內血中游離DNA與疾病相關性的研究進展緩慢，直到在近二十年PCR等檢測技術的應用，使得這一領域有了較快的發展。正常人血液中存在微量游離DNA，在某些疾病狀態下，循環DNA有不同程度的增高，尤其在腫瘤患者循環DNA濃度明顯高于正常人[5]。伴有轉移的腫瘤患者其濃度高于病灶局限者[6]。在癌癥患者的血漿中檢測循環DNA有利于早期癌癥的診斷和預測腫瘤的發生；母體血漿中的定量分析循環DNA可用于檢測某些胎兒發育異常；在移植監測和移植排斥反應的評估方面也取得了新的進展；在創傷和燒傷的嚴重程度分層等循環DNA研究也已經取得了可喜的成果，這些研究都提示循環DNA與疾病有著相關性[7]。Jylhv J等[8]調查發現循環DNA與一些代謝性疾病發病風險密切相關，使用熒光檢測等高靈敏度技術定量檢測循環DNA，發現高水平的循環DNA與代謝疾病風險和早期動脈硬化相關。Nicolaides等[9]研究母體血液循環DNA，證實循環DNA的染色體選擇性測序分析可以篩查胎兒染色體非整倍體性，而且具有相當高的靈敏度。Huang等[10]研究肝癌患者循環DNA中檢測細胞周期蛋白依賴性激酶4A(INK4A)啟動子甲基化，發現與良性肝病相比肝細胞癌INK4A甲基化現象明顯，表明了循環DNA在肝癌的診斷等方面是一種很有潛力的生物標志物。在疾病的預后監測及復發檢測，Wroclawski等[11]人研究病理確診或懷疑為前列腺癌血漿循環DNA，評估其在前列腺癌的診斷和潛在的預后價值。研究發現，一些腫瘤患者血漿中循環DNA具有與腫瘤組織中DNA相一致的分子遺傳學改變，如DNA鏈穩定性的下降、癌基因與抑癌基因的突變、抑癌基因啟動子的高甲基化以及微衛星不穩定與雜合性缺失等[12]。Gormally等[13]研究發現循環DNA可在疾病診斷之前就被檢測出來，在很大程度上增加了其作為腫瘤診斷、復發監測指標的可能性。此外，研究還顯示血中循環DNA與腫瘤的轉移有密切的聯系[14]。

2 循環DNA在卵巢癌中的應用

卵巢癌90%～95%為原發性，由于卵巢癌早期癥狀表現多不明顯，不易被發現，易轉移，預后差等特點，在婦科惡性腫瘤死亡率最高，但如果能夠早期診斷、及時治療，卵巢癌Ⅰ期5年存活率可達90%以上，Ⅱ期在70%～80%。循環DNA作為很有潛力的腫瘤標志物，有助于卵巢癌早期診斷、預后判斷及腫瘤轉移風險分析[15-16]。檢測外周血中微量循環DNA的改變可反映腫瘤原發灶的特征。Kamat等[6]定量提取血漿循環DNA，熒光染色法定量，比較良、惡性腫瘤患者與健康人血漿循環DNA水平，存在顯著差異。此外，研究表明循環DNA在監測卵巢癌療效的評價及轉移的風險評估有著重要的臨床應用價值，腫瘤遠處轉移與血漿循環DNA水平具有一定的相關性，血中循環DNA水平較高的患者，發現轉移腫瘤病灶的幾率同樣較高[17]。因此檢測卵巢癌患者血漿DNA有可能作為一種反映患者分期以及預后的分子標志而應用于臨床實踐，有可能成為一種新的惡性腫瘤標志物。

3 循環DNA檢測的優勢

腫瘤標記物測定在卵巢癌的早期診斷及病情監測中有著重要的價值[18-20]。循環DNA作為一種很有潛力的指標，有較好重現性，在癌癥的早期具有一定敏感性。標本獲取方面比較便利，可連續采集易于隨訪追蹤，避免了直接利用腫瘤標本進行分子生物學檢測。腫瘤病理標本不僅標本來源存在一定的局限性，此外，還可避免細針穿刺包塊吸取細胞而引起囊液外溢及癌細胞擴散的風險。

4 結語

綜上所述，循環DNA檢測具有標本采集便利、快捷、穩定性好等優點，對無癥狀的卵巢癌患者有可能成為早期診斷指標。通過定量分析循環DNA還可診斷腫瘤微小轉移和早期復發，為療效評價、制定治療方案及預后判斷提供了證據，提高卵巢癌治愈率。但作為一個有效的腫瘤標志物還存在不足之處，比如特異性不夠理想，易產生假陽性等。因此，循環DNA發展成為一個有效的可用于臨床常規檢測腫瘤標志物還需進一步的研究。

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