細胞自噬緩解氧-糖剝奪誘導原代培養小鼠腦皮質神經元缺血損傷

陳璐勔，羅艷琳，趙 麗，韓 松，李淑娟，李俊發*

(首都醫科大學1.神經生物學系 北京腦重大疾病研究院，北京100069；2.附屬北京朝陽醫院神經內科，北京 100020)

自噬是廣泛存在于真核細胞內的一種溶酶體依賴性降解途徑，并被認為是細胞進行自我保護的一種重要機制[1]。關于自噬在腦缺血和缺血再灌注過程中的作用一直存在爭議，一些研究者認為自噬在腦缺血損傷中起到保護作用；而另一些學者則認為自噬加重腦缺血損傷。究其原因，可能主要與研究者所選擇的實驗模型有關，即缺血/低氧或再灌注時間的差異可能造成不同的實驗結果。如在大鼠腦中動脈阻塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型與原代培養皮質神經元中發現，自噬在缺血/再灌注中起保護作用，且這種保護作用不因再灌注時間的長短而改變[2- 4]。然而，其他研究者在不同實驗條件下發現，隨著氧-糖剝奪(oxygen glucose deprivation, OGD)時間的延長，自噬逐漸對細胞起損害作用[5- 6]。這些研究結果提示，缺血/低氧程度可能對于研究細胞自噬在腦缺血性損傷中作用有重要意義。據此，本實驗擬利用原代培養小鼠腦皮質神經元OGD模擬離體缺血模型，選擇不同OGD強度并利用自噬抑制劑巴弗洛霉素A1(BafA1)，探討細胞自噬在OGD誘導神經元缺血損傷中作用，并為深入研究神經元在不同缺血強度狀態下，自噬的具體細胞信號激活機制打下基礎。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

清潔級， 出生24 h內的C57BL/6J乳鼠，雌雄不拘。購于首都醫科大學動物部，SCXK(京)2012- 0001。

1.2 主要試劑

NeurobasalTM、B27、谷氨酰胺、雙抗(100 IU/mL青霉素、100 μg/mL鏈霉素)和無糖DMEM(Gibco公司)；……