酶聯免疫技術檢測乙型肝炎表面抗原的分析

【摘要】目的研究分析酶聯免疫技術對乙型肝炎表面抗原檢測的效果。方法選取2012年11月至2013年11月期間鐵法煤業集團總醫院接收診斷的乙型肝炎44例患者設為觀察組，與同期就診的44例健康者進行對比設為對照組。對全部患者運用酶聯免疫技術檢測乙型肝炎表面抗原，并具體分析其檢測結果予以評價。結果近似臨界值分析物的重復性情況：+20%濃度時，臨界值分析物檢測結果陽性率大于等于95%；-20%濃度時，臨界值分析物檢測結果陽性率小于等于5%。靈敏度情況：觀察組中43例患者乙型肝炎呈陽性，靈敏度約為97.73%；對照組中43例乙型肝炎呈陰性，靈敏度約為97.73%。結論酶聯免疫技術應用于乙型肝炎表面抗原的檢測，其臨界值為±20%。在檢測濃度范圍內能夠獲得很高的靈敏度，對臨床診斷意義重大。

【關鍵詞】酶聯免疫技術；乙型肝炎表面抗原；研究分析

所謂乙型肝炎就是乙型病毒性肝炎，是因為機體受到乙型肝炎病毒（簡稱HBV）感染造成的一種疾病[1]。乙型肝炎病毒主要作用于肝細胞，屬于一種嗜肝病毒，能夠對肝細胞造成損傷，從而引起肝細胞炎癥、壞死以及纖維化等。乙型病毒性肝炎有慢性與急性兩種。在成年患者中絕大部分急性乙型肝炎是能夠自愈的，但是慢性乙型肝炎表現各異，又可分成活動性乙型肝炎、乙型肝炎攜帶者以及乙型肝炎肝硬化等。現階段，臨床中一般應用的檢測方法是酶聯免疫技術檢測乙型肝炎五項，即為乙型肝炎兩對半：表面抗原（簡稱HBsAg）、表面抗體（簡稱抗HBs）、e抗原（簡稱HBeAg）、e抗體（簡稱抗HBe）、核心抗體（簡稱HBc）。其中乙型肝炎表面抗原為一種非乙型肝炎病毒表面外殼蛋白，自身沒有傳染性，卻可以隨著乙型肝炎病毒一同存在，所以其可作為乙型肝炎病毒被感染的重要標志。現通過本組研究進一步論證酶聯免疫技術檢測的靈敏度，總結如下。

1資料與方法

1.1一般資料選取2012年11月至2013年11月期間鐵法煤業集團總醫院接收診斷的乙型肝炎44例患者設為觀察組，其中女性患者21例，男性患者23例。年齡均在23-74歲之間，平均年齡（41.52±4.35）歲。另選同期44例健康者設為對照組，其中女性患者20例，男性患者24例。年齡均在24-73歲之間，平均年齡（42.31±3.79）歲。采集全部受檢者的血液樣本，予以檢測。

1.2試劑、儀器的選擇試劑盒選自上海天齊生物技術有限公司。儀器選用ALIISIE全自動酶聯免疫分析儀。由衛生部臨床檢驗中心提供質控血清，濃度標準為1IU/ml，生產批號：0806。

1.3方法分別選取兩組受檢者血液，采集的血液需經過0.5小時以上的凝集，再選取上層血清。應用稀釋液把酶復合物稀釋以后，加入血清、陽性、陰性、質控品[2]。靜止放置1小時予以孵育，再洗板，將底物加進去，避光反應30分鐘以后，加入終止液（反應部分完成）。將底物溶液滴入，通過酶的作用，讓底物內含有的供氫體從無色還原型轉變為有色氧化型，發生顏色反應。利用底物的顏色反應判斷是否有相應的免疫反應，顏色反應的深淺程度與標本內相應的抗體，或是抗原量為正比相關。

重復性試驗：采集觀察組患者S/CO檢測值，即為樣本吸光度比臨界質控（陽性對照習慣度值的比值，比值小于1表示陽性）近似于1的陽性樣本，予以一系列的稀釋。同時，重復性檢測稀釋以后的樣本，直至產生陰性、陽性的機率均是50%的情況，次濃度就是本組檢測方法的臨界值濃度。通過以上試驗研究得出的臨界值，計算得出臨界值樣品±20%濃度的稀釋倍數，并且對其重復檢測20次，將其檢測結果詳細做好記錄。

1.4統計學方法通過統計學軟件SPSS17.0對兩組檢測者試驗數據予以統計分析，應用t對兩組檢測者的計量資料進行檢驗，運用X2對兩組酶聯免疫技術檢測乙型肝炎表面抗原的試驗計數數據作最終檢驗。如果組間差異P<0.05，則說明本次研究比較有統計學意義。

2結果

對觀察組乙型肝炎的44例患者進行近似臨界值分析物的重復性檢測結果顯示：+20%濃度時，臨界值分析物檢測結果陽性率大于等于95%；-20%濃度時，臨界值分析物檢測結果陽性率小于等于5%。觀察組44例患者中，43例患者檢測結果為陽性，陽性率是97.73%；1例患者檢測結果為陰性，陰性率是2.27%；對照組44例檢測者中，1例檢測結果為陽性，陽性率是2.27%；43例檢測結果為陰性，陰性率是97.73%。由此可見，兩組檢測者陽性率比較差異P<0.05有統計學意義。靈敏度情況：觀察組中43例患者乙型肝炎呈陽性，靈敏度約為97.73%；對照組中43例乙型肝炎呈陰性，靈敏度約為97.73%。

3討論

乙型肝炎感染是一種世界性流行疾病，現階段國內乙型肝炎病毒的攜帶率約為7.18%。通常乙型肝炎病毒的攜帶者均是慢性乙型肝炎患者，急性乙型肝炎成年患者一般情況下是能夠自愈的。乙型肝炎病毒主要作用于肝細胞，屬于一種嗜肝病毒，能夠對肝細胞造成損傷，從而引起肝細胞炎癥、壞死以及纖維化等。乙型肝炎表面抗原是乙型肝炎病毒表面外殼蛋白，其自身沒有傳染性。但是HBsAg一般會隨著乙型肝炎病毒的產生而存在，所以其可作為判斷是否受到乙型肝炎病毒所感染的重要標志。HBsAg能夠在患者體內的精液、陰道分泌物、鼻咽分泌物、乳汁、淚水、唾液、汗液以及血液等體液中被檢測出來[3]。如果感染了乙型肝炎病毒有2至6個月的時間，并且丙氨酸氨基轉移酶增高前的2至8周，血清檢測的結果便會顯示陽性。慢性乙型肝炎患者此項指標表現呈持續性陽性，而絕大部分急性乙型肝炎患者可以在疾病病程早期由原來的陽性轉變成陰性。因此，乙型肝炎表面抗原檢測結果呈陽性是判斷HBV感染的關鍵標志。

酶聯免疫技術，即為ELISA，是在1971年時由瑞典學者研究的一種特殊試劑分析方法，也是目前酶免疫測定技術中臨床應用最為廣泛的一種方法。其基本方法為把已知抗原、抗體依附于固相載體的表面，讓酶具體標記的抗原抗體發生的反應可以在固相表面上進行，再把液相內的游離成分予以洗除。本組研究選取了乙型肝炎的44例患者與同期檢查的44例健康者，同時應用酶聯免疫技術對兩組檢測者血清加以乙型肝炎表面抗原的檢測，檢測結果顯示乙型肝炎表面抗原的分析物重復性檢測，臨界濃度在+20%時，檢測陽性率大于等于95%，而臨界濃度在-20%時，檢測陽性率小于等于5%，因此酶標儀檢測結果的臨界濃度值，即為±20%。如果檢測標本在這個值域范圍之內，均能夠獲得可靠、準確的檢測結果。觀察組、對照組兩組檢測的靈敏度均是97.73%，說明酶聯免疫技術檢測的靈敏度比較高，且比較穩定。總之，酶聯免疫技術應用于乙型肝炎表面抗原的檢測，分析物濃度臨界值為±20%，檢測結果準確性較高，并且靈敏度較高，具有極高的臨床應用推廣價值。

參考文獻

[1]李鳳俠，范亞敏，范永利.酶聯免疫法和膠體金法聯合檢測乙型肝炎表面抗原的結果分析[J].中國誤診學雜志，2009，9（33）：8135-8136.

[2]陳桂山，張秀明，熊繼紅，等.酶聯免疫技術檢測乙肝表面抗原的分析性能評價[J].國際檢驗醫學雜志，2011，32（9）：931-933.

[3]高曉民，劉長華，崔巖峰，等.酶聯免疫吸附法檢測乙肝表面抗原結果分析陰[J].中國衛生工程學，2010，1（2）：212-214.