唾液腺染色制片的方法和比較

摘 要 文章以果蠅唾液腺的染色制片方法為例，以果蠅幼蟲的培養(yǎng)養(yǎng)，及幼蟲在性別，年齡對制片效果影響，和制片方法上的一些比較，從而得出好的制片方法和實驗結(jié)果。

關(guān)鍵詞 果蠅；唾液腺；制片方法

唾腺普遍存在于雙翅目昆蟲中，因為唾液腺細胞核中的染色體巨大，易觀察橫紋。體聯(lián)會等特點。易發(fā)現(xiàn)重復(fù)，倒位，易位等染色體結(jié)構(gòu)變異，從而使唾腺染色體成為細胞遺傳學(xué)進化遺傳學(xué)和分子遺傳學(xué)研究的不可多得的好材料。特別在雙翅目昆蟲的研究中，唾腺細胞的染色和制片技術(shù)，顯的尤為重要。本文博眾家之長，兼筆者實踐經(jīng)驗，尤重視在材料上的選擇、方法上也有改進。采用此方法，染色體易伸展，背景清晰，顏色對比高，獲得很好的染色的圖象。

一、材料與方法

1.果蠅幼蟲的培養(yǎng)

（1）培養(yǎng)基為常見的玉米培養(yǎng)基。玉米粉10克，紅塘13克，瓊脂粉0.7克，酵母粉2克，丙酸0.3ml，加蒸餾水100ml。 （2）培養(yǎng)基要求松軟，含水量較高，營養(yǎng)豐富，發(fā)酵良好。 （3）放入5-6對果蠅在18-20℃下培養(yǎng)，幼蟲出現(xiàn)后可將起放入15-18℃低溫培養(yǎng)。利于幼蟲充分發(fā)育。

（4）實驗時選用肥大，好動的雌性幼蟲作材料。

2.唾腺的剝離

（1）取一幼蟲放在滴有一滴0.7%生理鹽水的干凈載玻片上。實驗者兩手各拿一支解剖針壓住幼蟲尾端1/3處，用右手的解剖針，壓住頭部，水平拉動，即可拉出一對透明棒狀腺體。清除其上易剝落的脂肪，移走其他雜物。

3.制片

（1）解離。將腺體周圍的生理鹽水吸走，滴1-2滴1N鹽酸，在室溫下解離5分鐘左右，然后剝離其上附著的脂肪體。

（2）染色。滴蒸餾水在一旁，用吸水紙小心吸去鹽酸，反復(fù)幾次。加1-2滴改良苯酚品紅染液于腺體上，染色10-15分鐘。

（3）壓片。小心吸去多余染液，用蒸餾水將染上色的腺體沖在另一個干凈載玻片上（小心，別丟失了腺體）。滴上一滴45%醋酸，改上干凈的蓋片，用濾紙吸去多余的染液后，將濾紙條裹緊載片，左手微用力壓住蓋片對角，不讓其滑動，右手拇指適度用力垂直向下壓片，染色體臂分開。

（4）鏡檢。壓好的臨時裝片直接在顯微鏡下觀察，可以看到有染色體臂充分伸展，橫紋帶紋清晰。背景干凈。選擇好的細胞圖象，用顯微攝影照片，或可用石蠟封片，制成臨時標(biāo)本，進一不制成永久裝片。

二、結(jié)果與討論

以上實驗中，應(yīng)該著重注意以下幾點；

（1）培養(yǎng)基宜加較多的糖，酵母（提供充足的營養(yǎng)），松軟的培養(yǎng)基（含水較多）且低溫下（15-18℃），易培養(yǎng)出肥大的果蠅幼蟲，其唾腺發(fā)達。

（2）親本密度對幼蟲發(fā)育的影響。培養(yǎng)基中放入5-6對果蠅，不能太多，培養(yǎng)基營養(yǎng)成分固然重要，但其中的幼蟲密度，也會影響幼蟲的發(fā)育。成蟲交配后12小時左右就必須將成蟲轉(zhuǎn)移。充足的空間適于果蠅幼蟲的生長。

（3）幼蟲性別對制片的影響。實驗證明雌性更利于實驗，雌性三齡幼蟲唾腺細胞染色體易被壓伸展，成功率較高。

（4）幼蟲年齡對制片的影響。實驗取材以上午10點左右為好，并選分肥大，好動的幼蟲，其腺體細胞易壓破，染色體易伸展，著色，而不思動的幼蟲可能是快進入蛹期的老齡幼蟲，細胞中染色慝難被壓伸展橫紋也很模糊。

（5）拉出來的唾液腺上常常附有一些脂肪體，直接用解剖針很難分離，還易使脂肪體附在解剖針上，而用1N的鹽酸解離后，只需用針尖輕輕撥動就能分離脂肪體。

（6）唾腺在整個過程中一直要保持濕潤，不能干燥。

（7）用45%的醋酸處理后，就能得到較干凈的背景。也有用背景液和沖洗液來消除背景雜色，獲得干凈的背景效果。只是對于它們的配置略有繁冗，不如直接用45%的醋酸來的快。

（8）也有主張用冰凍壓片，其間和本實驗一樣的需要轉(zhuǎn)移唾腺，首先來說冰凍壓片效果不明顯，冰凍處理載片也麻煩，其次，唾腺本來就小，轉(zhuǎn)移中易丟失。即使在本實驗中，也可用吸走鹽酸的方法吸去多余的染液，而不一定轉(zhuǎn)移腺體，因為這一步需要很謹慎。

（9）壓片十，拇指適當(dāng)用力垂直下壓，不主張壓片中、有揉動，那樣極易搓動蓋片。

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作者簡介：王 玉（1983-），女，四川江油人，遂寧二中實驗學(xué)校，中學(xué)二級，理學(xué)學(xué)士，主要從事中學(xué)生物教學(xué)工作。