HPLC測定片劑中富馬酸福莫特羅

摘要：本文利用HPLC-ECD技術測定了市售片劑中富馬酸福莫特羅的含量。實驗結果表明，該化合物的線性范圍為3.12×10-1～5.00×10μg·mL-1（r=0.9995）；回收率為99.0～107.8%（RSD≤4.6%）。該法可用于片劑中富馬酸福莫特羅測定的研究。

關鍵詞：HPLC；ECD；富馬酸福莫特羅

中圖分類號：R94 文獻標識碼：C 文章編號：1005-0515（2013）7-113-02

富馬酸福莫特羅是一種長效β2-受體激動劑，臨床上用于緩解由支氣管哮喘、急性支氣管炎、喘息性支氣管炎或肺氣腫等氣道阻塞性疾病引起的呼吸困難等癥狀。目前，片劑中富馬酸福莫特羅的檢測方法以采用紫外檢測器或二極管陣列檢測器的液相色譜法為主[1-4]。本文將反相-高效液相色譜-電化學法檢測（RP-HPLC-ECD）用于片劑中富馬酸福莫特羅測定的研究。

1儀器與試劑

安科TCL-16C離心機；HP1100高效液相色譜儀，包括四元梯度泵，二極管陣列檢測器和電化學檢測器，色譜數據通過HP工作站采集獲得；DL-180型超聲清洗器；IX-501型pH計；WG-2003臺式干燥箱；Milli-QG超純水制備儀。

富馬酸福莫特羅購自美國Sigma公司，純度均≥99%；甲醇為色譜純；冰醋酸為分析純；所用水為超純水；盼得欣藥片由天津力生制藥股份有限公司生產。

2溶液制備

2.1對照品溶液的制備

準確稱取富馬酸福莫特羅對照品適量，置于25mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并定容，振蕩均勻后得富馬酸福莫特羅（1.00×102μg·mL-1）單一對照品儲備液。其它不同濃度的各對照品溶液由單一儲備液混合稀釋得到。

2.2供試品溶液的制備

稱取適量散裝盼得欣藥片，研細，取其粉末0.0400g，精密稱定，置于50mL錐形瓶中。然后，準確加入甲醇25.00mL，稱定其重量。用頻率為35±5%KHz，功率為180W超聲儀超聲10min，取出，放冷后，再稱定重量，然后用甲醇補足減失的重量，振蕩均勻。取出3mL溶液于5mL離心管中，3000r·min-1離心5min，吸取上清液并用0.45μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。盼得欣供試品溶液的制備同上。

3色譜條件

采用長度為150mm、外徑為4.6mm和內徑為5.0μm的ZorbaxSB-C18色譜柱；流動相包括（A）甲醇、（B）水-冰醋酸（pH=3.00）。采用梯度洗脫，其洗脫程序如下：0min時A-B（10：90），10min時A-B（40：60），流速為1.0mL·min-1；ECD的工作電位為1.0V，柱溫為30℃。按上述條件獲得的對照品（A）和樣品（B）的色譜圖見圖1。富馬酸福莫特羅的保留時間為10.98min。

4實驗與結果

4.1線性關系考察

準確移取“2溶液制備”中“2.1”項下所配制的一定體積的富馬酸福莫特羅對照品儲備液于10mL量瓶中，用甲醇定容，配制富馬酸福莫特羅濃度分別為3.12×10-1，6.25×10-1，3.12，6.25，1.25×10，5.00×10μg·mL-1的系列混合對照品溶液，用0.45μm的微孔濾膜濾過。取此對照品溶液10.0μL，按“3”項所述色譜條件進樣，平行測定3次，以平均峰面積積分值Y對濃度C（μg·mL-1）進行線性回歸，獲得富馬酸福莫特羅的回歸方程。其相關參數、相關系數、線性范圍見表1。結果表明：富馬酸福莫特羅在3.1×10-1～5.0×10μg·mL-1范圍內，線性關系良好。

表1 兩種化合物的回歸方程相關參數和線性范圍（n=3）

4.2加樣回收率實驗

準確稱取已知含量的盼得欣粉末9份，每份30mg。將其分別置于25mL量瓶中，每3份為1組。往三組盼得欣樣品中，分別準確加入濃度為1.0×102μg·mL-1的富馬酸福莫特羅對照品溶液1.6mL，0.6mL和0.1mL。按照“2溶液制備”中“2.2”項所述方法制備溶液后，按照本實驗中所描述的色譜條件進樣，進樣量10.0μL，重復進樣3次，采用外標法計算加入對照品后供試品溶液中富馬酸福莫特羅的含量，三種不同濃度的加樣回收率及相對標準偏差（表2）。

4.3精密度、重復性和穩定性實驗

精密量取“2溶液制備”中“2.1”項下所配制的一定體積的富馬酸福莫特羅對照品儲備液于10mL量瓶中，用甲醇定容，配制成相應的對照品溶液，用0.45μm的微孔濾膜濾過。按照本實驗中所描述的對照品溶液的制備方法和所選擇的色譜條件進樣，連續測定6次，每次10.0μL，計算富馬酸福莫特羅的含量的RSD分別為4.1%。

準確稱取盼得欣片劑粉末（0.0300g）各5份，按照“2溶液制備”中“2.2”項所述方法制備溶液后，按“3”項所述色譜條件下進行分析，計算富馬酸福莫特羅的含量的RSD分別為1.6%。

對供試品溶液在8h之內每隔1h進樣10.0μL，記錄色譜峰面積，測得富馬酸福莫特羅的含量的RSD分別為1.2%和1.8%；對供試品溶液在8d內每隔24h進樣10.0μL，記錄色譜峰面積，測得富馬酸福莫特羅的峰面積積分值的RSD分別為4.3%。

4.4樣品分析

分別稱取不同批號的藥片三份，按“2溶液制備”中“2.2”項所述方法制備供試品溶液，移取10.0μL，按“3”項所述色譜條件測定硫酸沙丁胺醇富馬酸福莫特羅的峰面積，采用標準曲線法計算其含量，結果見表3。

5結論

建立了市售片劑中硫酸沙丁胺醇和富馬酸福莫特羅的高效液相色譜-電化學測定新方法。與文獻報道[2-3]的方法相比，本法具有線性范圍寬的優點。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會，中華人民共和國藥典，二部[M].北京：化學工業出版社，2005：734

[2]劉偉，劉玲，高效液相色譜法測定沙丁胺醇膠囊的含量[J].中國藥業，2006，15（14）：26-26