白花蛇舌草提取液對家兔離體小腸收縮活動的影響

摘要：目的 觀察不同劑量白花蛇舌草提取液對家兔離體小腸收縮活動的影響，并分析其作用機制與量效關系。 方法 采用離體腸段實驗法，給予0.15ml、0.25ml、0.35ml三種不同劑量的2g/ml的白花蛇舌草提取液，觀察其對離體小腸收縮活動的影響和0.5ml濃度為 2g/ml的白花蛇舌草提取液拮抗乙酰膽堿的作用。 結果 不同劑量的白花蛇舌草提取液均能使小腸收縮張力下降，收縮曲線與基線構成的面積減小，劑量為0.35ml時作用最明顯（P<0.01），但對收縮頻率無明顯影響。且0.5ml濃度為 2g/ml的白花蛇舌草提取液能使乙酰膽堿作用下的小腸收縮張力降低。 結論 白花蛇舌草提取液能抑制家兔離體小腸收縮活動，并對乙酰膽堿有一定的拮抗作用。

關鍵詞：白花蛇舌草；離體小腸；收縮活動；乙酰膽堿

中圖分類號：R322.4+5 文獻標識碼：B 文章編號：1005-0515（2013）7-003-02

白花蛇舌草（Hedyotis diffusa）是茜草科耳草屬一年生的草本植物，別名蛇舌草、鶴蛇草等，廣泛分布于亞熱帶地區，我國云南、廣東、廣西、福建、浙江、江蘇、安徽等地均有生長。民間常用于咽喉腫痛、蛇傷疔瘡、癌腫等的治療[1]，其化學成分有蒽醌類、黃酮類、甾醇類、生物堿等[2]。臨床上常用于呼吸道感染[3]、胃腸炎[4]、肝炎[5]、腎炎[6]等炎癥性疾病的治療及抗腫瘤[7]，但對消化道平滑肌運動有何作用目前國內未見報道。為此，本次實驗研究旨在觀察該藥對消化道平滑肌運動的影響，為進一步開發利用白花蛇舌草提供資料。

1材料與方法

1.1對象

健康家兔4只，體重1.5～2.0kg，雌雄不限。（由右江民族醫學院實驗動物中心提供，許可證號：syxk桂2011-0010）

1.2 藥品

白花蛇舌草，在市面上購買（廠址：廣西貴港市綠之源種養發展有限公司中藥飲片廠）。乙酰膽堿（Ach，上海國藥集團化學試劑有限公司），Tyrode’s 溶液所用試劑均為蒸餾水，臨時現配。

1.2.1白花蛇舌草提取液的制備

取藥材100g加水沒過藥面浸泡30min，沸水煎煮20min后過濾，取濾渣再加適量水煎煮20min，過濾后合并兩次濾液，濃縮為50ml，即提取液生藥濃度為2g/ml。

1.3 儀器

BL-420生物機能實驗系統（成都泰盟科技有限公司），HW-400E恒溫平滑肌槽（成都泰盟科技有限公司）。

1.4 實驗方法

家兔禁食24h，自由飲水，實驗前1h喂食。實驗時用棒擊法使家兔昏迷后剖腹，在劍突下做縱行切口，取賁門下十二指腸20cm放于臺氏液中剪去腸系膜，剪成2～3cm腸段，洗去內容物，放于新鮮臺氏液中通入空氣備用。實驗分低、中、高劑量3組（0.15ml組、0.25ml組、0.35ml組）進行，每組11段腸管。取一段腸管一端固定在玻璃通氣鉤上，置于盛有80ml Tyrode溶液的浴槽中，另一端固定于張力換能器上與BL-420生物機能實驗系統相連。打開HW-400E恒溫平滑肌槽，使浴槽內溫度保持為38℃，并持續勻速通入空氣（約60個/min氣泡）。打開BL-420生物機能實驗系統，調零，定標。輸入信號為“通道1，張力”。增益調節G=100，時間常數T=DC，濾波調節F=30Hz，掃描速度S=4.00s/div。標本負荷2g，平衡30min，待基線穩定后記錄正常小腸平滑肌活動曲線，然后依次滴加濃度為2g/ml不同劑量的白花蛇舌草提取液，記錄給藥后收縮曲線。每滴加一次藥物結果記錄完畢后，用38℃臺氏液沖洗3次，待腸管恢復至用藥前水平后進行下一次實驗。計算給藥前后腸肌收縮頻率、張力及面積的變化值。

1.5 對抗乙酰膽堿的作用

待離體腸段平穩，同時滴加1：10000乙酰膽堿0.1ml和2g/ml的白花蛇舌草提取液0.5ml，觀察每次用藥前后離體小腸收縮曲線的變化。另取離體小腸段以單純加入1：10000的乙酰膽堿0.1ml作對照。

1.6 統計學方法

數據以均數±標準差（ ±S）表示，采用Spss17.0統計軟件進行統計學分析，各組內給藥前、給藥后數據采用配對t檢驗。各組給藥后的數據采用單因素方差分析（One Way Anova ）進行組間比較，并以最小顯著法（LSP法）進行兩兩比較。

2結果

2.1 白花蛇舌草提取液對小腸收縮活動的影響

與給藥前比較，白花蛇舌草提取液可使十二指腸平滑肌收縮張力降低（P<0.01），收縮曲線與基線的面積減?。≒<0.01），說明白花蛇舌草提取液對小腸收縮活動有抑制作用，但對頻率影響較小，統計學無顯著性差異。在收縮張力方面，0.15ml組與0.35ml組比較，差異有顯著性（P<0.05），其中以0.35ml組變化最為顯著，如表1，圖1-3所示。

圖1 低劑量組白花蛇舌草提取液對十二指腸的影響

注：與給藥前比較*P<0.01，**P<0.05。實驗后單因素方差分析結果：F=3.464，P<0.05，與0.35ml組比較：q=2.61，△P<0.05

花蛇舌草提取液對抗乙酰膽堿的作用

2g/ml的白花蛇舌草提取液0.5ml能拮抗乙酰膽堿增強小腸平滑肌運動的作用，表現為與單純滴加乙酰膽堿對比收縮曲線面積的下降。如圖4。

3、討論

白花蛇舌草作為一種民間常用中草藥，其主要化學成分有黃酮類、揮發油、蒽醌類、萜類化合物、生物堿、甾醇和白花蛇舌草素（香豆精類化合物）等，具有清熱解毒、消炎止痛、利尿消腫、抗癌腫等功效[8]。本實驗采用小腸收縮頻率、收縮張力、收縮曲線與基線構成的面積作為觀察指標，其中面積與張力能較敏感地反映小腸收縮活動的變化。結果顯示，滴加白花蛇舌草提取液后可使離體小腸收縮面積減小，張力降低，但收縮頻率無明顯變化，表明不同劑量白花蛇舌草提取液對小腸收縮運動有不同程度的抑制作用，但作用時間比較短暫。而且，隨著劑量的增加，抑制作用越明顯，說明該藥抑制小腸的活動有明顯的量效關系。

消化道平滑肌有膽堿能M受體分布，乙酰膽堿與細胞膜M受體結合后，經G蛋白耦聯受體-磷脂酶C途徑生成三磷酸肌醇（IP3），IP3作為第二信使作用于平滑肌細胞肌質網上的IP3受體，引發肌質網內Ca2+釋放和胞內游離Ca2+增高[9]，興奮胃腸平滑肌并產生強烈的收縮活動。當同時滴加乙酰膽堿和白花蛇舌草提取液后，發現能使乙酰膽堿所致的小腸劇烈收縮活動減弱，由此可以推測水提液中的有效成分爭奪占據了部分乙酰膽堿受體，使乙酰膽堿與受體結合量減少而導致其作用減弱，具有類似阿托品樣作用。表明白花蛇舌草提取液對腸平滑肌的抑制作用可能與阻斷M受體有關，通過阻斷藥物-機械耦聯，使細胞內貯存Ca2+釋放減少，導致腸平滑肌活動減弱。

從提取液成分分析，提取液可能含有抑制腸平滑肌活動的物質，而且不止一種?？赡苁窃撍幹悬S酮類物質槲皮素[10]起作用，槲皮素能夠拮抗Ca2+通道，減少Ca2+進入細胞內，使胞內Ca2+濃度降低，從而抑制腸平滑肌收縮。也可能是白花蛇舌草中的揮發油起作用，與檀香揮發油[11]的作用相似，通過拮抗腸平滑肌上膽堿能受體和對離子通道的作用，使腸平滑肌的活動減弱。此外，還有可能是白花蛇舌草素（香豆精類化合物[12]）對Ca2+的拮抗而發揮抑制作用。具體是否是白花蛇舌草中的黃酮類、揮發油以及白花蛇舌草素發揮作用，還是其他成分起作用，及其對小腸平滑肌抑制作用機制等問題還有待進一步深入研究。

參考文獻：

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[12]尉阿敖.中藥前胡中香豆精成分對鈣離子的拮抗作用[J].國外醫學·植物藥分冊，1982，3（2）：43.

通訊作者：趙善民（1951-），男，教授，研究方向：心血管病理生理

基金項目：右江民族醫學院2013年度自治區級大學生創新訓練計劃立項項目 （項目編號：QJCX201324）