穿刺活檢聯(lián)合流式細(xì)胞儀檢測對惡性淋巴瘤診斷和分型臨床研究

[摘要] 目的 探討穿刺活檢聯(lián)合流式細(xì)胞儀檢測對惡性淋巴瘤診斷和分型的情況。 方法 回顧性分析 2009年3月～2012年3月在我市兩所醫(yī)院就診的惡性淋巴瘤患者62例，均進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測和穿刺活檢。 結(jié)果 應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果為：骨髓受累者55例，其中非霍奇金淋巴瘤45例，霍奇金淋巴瘤10例；應(yīng)用穿刺活檢檢測結(jié)果為：骨髓受累者28例，其中 6例在流式細(xì)胞儀檢測中未檢測出；具有統(tǒng)計學(xué)差異（P < 0.05）。 結(jié)論 應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測比應(yīng)用穿刺活檢法有更高的準(zhǔn)確度，但也有假陰性的現(xiàn)象，所以應(yīng)該將穿刺活檢聯(lián)合流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測，這樣能提高準(zhǔn)確度。

[關(guān)鍵詞] 穿刺活檢；流式細(xì)胞儀檢測；聯(lián)合檢測

[中圖分類號] R733.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）18-0106-02

淋巴細(xì)胞發(fā)生了惡性增生就會形成惡性淋巴瘤。惡性淋巴瘤常見表現(xiàn)為骨髓受累。淋巴瘤的病理類型約70種，主要可分為霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤這兩種類型。在我國，大部分患者為非霍奇金淋巴瘤[1]，約90%。隨著社會的進(jìn)步，人們生活水平的提高，惡性淋巴瘤在近20年來的發(fā)病率逐年升高[2]，怎樣準(zhǔn)確診斷惡性淋巴瘤是臨床上亟待解決的難題之一。本文回顧性分析了2009年3月～2012年3月在我市兩所醫(yī)院就診的惡性淋巴瘤患者62例，目的是研究穿刺活檢聯(lián)合流式細(xì)胞儀檢測對惡性淋巴瘤診斷和分型的情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2009年3月～2012年3月在我市兩所醫(yī)院就診的惡性淋巴瘤患者62例，其中男34例，女28例，年齡14～74歲，平均（47.4±2.5）歲；非霍奇金淋巴瘤55例，其中T細(xì)胞來源15例，B細(xì)胞來源26例，霍奇金淋巴瘤11例， 其余不詳。

1.2 檢測方法

1.2.1 流式細(xì)胞儀檢測 抽取骨髓液5 mL，立即加入15 mL肝素抗凝，用流式細(xì)胞儀檢測。并分離出單個的核細(xì)胞，將核細(xì)胞進(jìn)行洗滌，將細(xì)胞數(shù)量控制在（1～3）×106。再取20支試管，每支試管中加入100 μL的核細(xì)胞，依次在每支試管中加入20 μL熒光標(biāo)記過的單克隆抗體、CD2、CD4、CD5、CD3、CD9、CD10、CD8、CD7、CD34、CD20、CD15等。將這些試管在4℃冰箱里放置15 min，用小鼠血清IgG作為陰性對照。在每支試管中加入2～3 mL的紅細(xì)胞裂解液[3]，離心20 min，離心后產(chǎn)物用PBS洗滌1～2次。最后用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。用Cell Quest來分析，先圈定異常幼稚細(xì)胞群，計算各細(xì)胞表面抗原的陽性百分率，如果被標(biāo)記的細(xì)胞大于總數(shù)的20%，則為陽性。

1.2.2 穿刺活檢 在患者身上做骨穿，抽取3 mL骨髓液，進(jìn)行涂片和染色，在顯微鏡下觀察。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用 SPSS 17.0軟件來進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計及處理，計數(shù)資料采用卡方檢驗，P < 0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果為：骨髓受累者55例，其中非霍奇金淋巴瘤45例，霍奇金淋巴瘤10例；應(yīng)用穿刺活檢檢測結(jié)果為：骨髓受累者28例，其中有6例在流式細(xì)胞儀檢測中未檢測出；兩組結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)差異（χ2=6.45，P < 0.05），見表1。流式細(xì)胞儀檢測得到的惡性淋巴瘤骨髓受累方法中，a型11例，b型0例，c型28例，d型16例。

3 討論

在淋巴結(jié)和結(jié)外淋巴組織產(chǎn)生的細(xì)胞腫瘤就叫做淋巴瘤。按照現(xiàn)行統(tǒng)一的分類[4]，惡性淋巴瘤可分為非霍奇金淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤兩大類。惡性淋巴瘤常見的表現(xiàn)主要為淋巴受累。骨髓檢查的目的就是了解骨髓造血功能和骨髓受累的情況，確定惡性淋巴瘤的分型，從而為選擇藥物和選擇治療手段提供依據(jù)。

有研究報道，2%～74%的淋巴瘤有骨髓受累現(xiàn)象[5]，非霍奇金淋巴瘤的骨髓受累為16%～75%，霍奇金淋巴瘤的骨髓受累為2%～32%。用骨髓活檢的方法發(fā)現(xiàn)骨髓受累率為21%。而應(yīng)用針吸骨髓涂片法發(fā)現(xiàn)骨髓受累率約為15%～33%。國內(nèi)的骨髓受累檢出率遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于國外，主要原因為我國在這方面的技術(shù)不過關(guān)，儀器精度較低。隨著科技的發(fā)展，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)已經(jīng)問世，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測骨髓受累無疑能提高檢出率。

惡性腫瘤的主要治療方法就是保肢治療，它要求穿刺活檢有更嚴(yán)格的方法。如果穿刺活檢不正確，容易造成腫瘤對局部血管和神經(jīng)的污染，導(dǎo)致穿刺活檢失敗。所以在進(jìn)行穿刺活檢時，要對腫瘤有充分的了解。在穿刺活檢中，需要免疫標(biāo)記，免疫標(biāo)記時，有許多抗體可供選用，但一定要根據(jù)抗體的種類，選擇合適的抗原修復(fù)方法，如消化法和微波法等。

流式細(xì)胞術(shù)能對細(xì)胞進(jìn)行自動分選和分析。將細(xì)胞溶液放入流式細(xì)胞儀，就可以測量細(xì)胞的各種性質(zhì)，如生物物理性質(zhì)和生物化學(xué)性質(zhì)，也可以根據(jù)細(xì)胞的性質(zhì)，將細(xì)胞從特定的范圍內(nèi)分選出來。

本文通過流式細(xì)胞儀對62例惡性淋巴瘤患者進(jìn)行檢驗，發(fā)現(xiàn)骨髓受累患者55例，通過穿刺活檢對62例惡性淋巴瘤患者檢測發(fā)現(xiàn)骨髓受累患者28例，其中6例未在流式細(xì)胞儀中檢測出。通過統(tǒng)計學(xué)分析，兩種方法檢測出的骨髓受累患者有統(tǒng)計學(xué)差異（P < 0.05），說明用流式細(xì)胞儀檢測的方法優(yōu)于穿刺活檢的方法。但是有6例患者在穿刺活檢中呈陽性，但在流式細(xì)胞儀檢測中呈陰性，這表明流式細(xì)胞儀還未達(dá)到100%的檢測準(zhǔn)確度。穿刺活檢這種方法樣本量小，準(zhǔn)確度小，但方便可行，而流式細(xì)胞儀檢測操作復(fù)雜，準(zhǔn)確性高，只有兩種方法結(jié)合，才能更精確地檢測惡性淋巴瘤骨髓受累。

臨床分期與患者的治療方法有密切的關(guān)系。如果惡性淋巴瘤患者有骨髓受累，那么患者的臨床分期就為Ⅳ期，應(yīng)該引起重視。本文用流式細(xì)胞儀檢測比用穿刺活檢法檢測出更多的骨髓受累患者，這說明流式細(xì)胞儀檢測技術(shù)精確度更高，值得臨床上應(yīng)用。目前用得較多的方法就是穿刺活檢法，而流式細(xì)胞儀檢測法還未得到更普遍的應(yīng)用。

通過本文的研究，發(fā)現(xiàn)應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測比應(yīng)用穿刺活檢法有更高的準(zhǔn)確度，但也有假陰性的現(xiàn)象，所以應(yīng)該將穿刺活檢聯(lián)合流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測，這樣能提高準(zhǔn)確度。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 子華，杜湘桂，王桃仙，等. 骨髓檢查對惡性淋巴瘤分期的重要性[J]. 中國腫瘤臨床，1984，11（1）：17-19.

[2] 殷杰，顧健. 流式細(xì)胞術(shù)對惡性淋巴瘤細(xì)胞膜表面標(biāo)記及倍體分析[J]. 國外醫(yī)學(xué)：輸血及血液學(xué)分冊，2003，26（5）：421-422.

[3] 珊珊. 流式細(xì)胞術(shù)-白血病免疫分型規(guī)范化[J]. 中國實驗血液學(xué)雜志，2002，10（1）：1-5.

[4] 叔逵，王健民，王杰軍. 中國臨床腫瘤學(xué)教育專輯[M]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2001：204-211.

[5] 郭會芹，孫耘，田援. 乳腺粗針穿刺活檢的臨床病理應(yīng)用[J]. 中華病理學(xué)雜志，2004，33（3）：277-279.

（收稿日期：2013-03-18）