抑癌基因PTEN在大腸癌中的表達及臨床意義

[摘要] 目的 探討抑癌基因PTEN在大腸癌中的表達及臨床意義。 方法 采用免疫組化S-P法檢測70例大腸癌組織中PTEN的表達，并探討其與組織分化程度、淋巴結轉移和Dukes分期等生物學行為的相關性。另選擇30例癌旁正常大腸組織作對照組。 結果 70例大腸癌標本中PTEN陽性表達32例。30例癌旁正常組織中PTEN表達均陽性。大腸癌組織中PTEN的陽性率明顯低于癌旁正常組織（χ2=26.27，P<0.01）。大腸癌組織中PTEN表達與生物學行為的關系較密切，與組織分化程度呈正相關（r=0.30，P<0.05），與淋巴結轉移和Dukes分期呈負相關（r=-0.27，P<0.05； r=-0.26，P<0.05）。 結論 PTEN基因異常改變參與大腸癌的發生與發展過程，其表達水平與大腸癌的生物學行為具有明顯相關性，參與大腸癌惡化演變、浸潤和轉移過程，有望成為大腸癌基因診斷和治療的新靶點。

[關鍵詞] 大腸癌；PTEN基因；免疫組化；生物學行為

[中圖分類號] R735.34 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）33-0053-02

大腸癌是臨床較常見的消化道惡性腫瘤，其發生和發展過程是一個涉及多基因參與復雜病理過程，其中癌基因激活和抑癌基因失活引起的細胞增殖異常是其中重要分子機制之一[1]。第10號染色體缺失的磷酸酶和張力蛋白同源物基因（phosphatase and tension hom logy deleted on chromosome 10，PTEN）是目前發現的第一個具有磷酸酶活性的抑癌基因，在惡性腫瘤細胞的增殖、分化、浸潤和凋亡中起抑制作用[2，3]。近年來研究發現在許多惡性腫瘤中表達減少或缺失，并引起腫瘤細胞無限制生長，但有關PTEN基因在大腸癌組織中的表達及臨床意義國內外研究不多[4，5]。本研究觀察了抑癌基因PTEN在大腸癌組織中的表達及臨床意義，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2008年1月～2013年4月兩院普外科收治的大腸癌患者70例。納入患者均具有完整臨床資料且經病理學檢查證實，且所有患者術前均未進行任何形式的化療、放療或免疫治療。其中男38例，女32例；年齡36～89歲，平均（64.7±7.2）歲。另選擇同期30例癌旁正常大腸組織（距腫瘤邊緣>5 cm）作對照組，其中男17例，女13例；年齡38～87歲，平均（65.0±7.1）歲。兩組患者在性別、年齡方面比較無明顯統計學差異（P>0.05），具有可比性。

1.2 免疫組化染色

采用免疫組化S-P法檢測PTEN的表達。組織經10%福爾馬林固定，石蠟常規包埋4 μm連續切片，進行HE染色和免疫組化S-P法染色。4 μm石蠟切片常規逐級脫蠟至水，3%H2O2室溫孵育10 min，以阻斷內源性過氧化物酶的活性，用微波抗原進行修復，滴加正常的羊血清封閉15 min，傾去血清滴加PTEN一抗工作液4℃過夜，后滴加生物素標記二抗工作液室溫孵育15 min，再滴加辣根酶標記鏈霉卵白素室溫孵育15 min。各步驟間PBS沖洗5 min×3次。常規DAB顯色、復染、脫水、透明、封片和鏡檢。用已知陽性切片作陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。鼠抗人PTEN單克隆抗體為 Santa Cruz公司產品，免疫組化S-P試劑盒購自福州邁新公司，嚴格按照試劑盒說明書進行實驗操作。

1.3 結果判定

免疫組化結果判斷標準是以細胞漿見棕褐色顆粒者為陽性細胞。按照染色的有無及強度進行記分，其中0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色；按照陽性染色細胞百分率記分，其中1分為11%～50%，2分為51%～75%，3分為>75%，兩項記分得分相乘結果>3為（+），否則為（-）。

1.4 統計學處理

采用SPSS 17.0 for windows 統計學分析軟件。計數資料結果以率[n（%）]表示，比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。本文相關性檢驗資料屬于等級資料，采用非參數檢驗的Spearman相關系數。

2 結果

2.1 PTEN在大腸癌組織和癌旁組織中的表達的差異

70例大腸癌標本中PTEN的陽性表達為32例。30例癌旁正常組織中PTEN表達均為陽性。大腸癌組織中PTEN的陽性率明顯低于癌旁正常組織，比較有明顯統計學差異（χ2=26.27，P<0.01）。見表1。

2.2 大腸癌組織中PTEN的表達與生物學行為的關系

大腸癌組織中PTEN表達與生物學行為的關系較密切，與組織分化程度呈正相關（r=0.30，P<0.05），與淋巴結轉移和Dukes分期呈負相關（r=-0.27，P<0.05； r=-0.26，P<0.05）。見表1。

3 討論

大腸癌是消化道的高發惡性腫瘤，其發病率僅次于胃癌及食管癌。近年來由于飲食結構的改變，大腸癌發病率及死亡率呈逐漸上升趨勢，尤其是大腸癌的中遠期進展、遠處轉移和復發較快，生存率仍偏低。因此明確大腸癌的發生發展及侵襲轉移機制是提高大腸癌患生存率和降低死亡率的關鍵[1]。大腸癌的發生是遺傳和環境因素等多種因素共同作用的結果，抑癌基因的失活可促進細胞的增殖，抑制凋亡和促進腫瘤的發生在其中起重要作用。PTEN是近10年來新發現的一個抑癌基因，位于人染色體10 q23.3位點，全長約218 kb，有9個外顯子，其編碼由403個氨基酸殘基組成的蛋白質[6-8]。PTEN編碼的蛋白具有酪氨酸磷酸激酶活性，可抑制酪氨酸的磷酸化，對細胞增生、增殖、凋亡、粘附和遷移和細胞周期起調控作用，PTEN失活則促進腫瘤進行性生長和腫瘤細胞增殖活性增加，PTEN因其獨特的作用途徑和在多種人類腫瘤的發病中的重要性而備受重視[9-11]。

近年來研究發現PTEN基因的突變或表達缺失與大腸癌的發生、發展和預后的關系密切。馬穎等[12]研究發現PTEN在正常大腸組織、大腸腺瘤、大腸癌組織中的表達率分別為100%、70%和51.61%，呈逐級下降的趨勢，統計學分析大腸癌中PTEN的表達率明顯低于非癌組。推測PTEN蛋白的丟失大腸癌發生、發展過程中可能起重要作用。谷化平等[13]研究發現大腸癌組織中PTEN蛋白表達率明顯低于大腸腺瘤和正常大腸黏膜組織，提示PTEN基因缺失或突變與大腸癌的發生和發展關系密切。本研究結果發現大腸癌組織中PTEN的表達率明顯低于癌旁正常組織，與上述的研究報道相符，提示PTEN基因異常改變參與大腸癌的發生與發展過程，可成為大腸癌基因診斷的新靶點。近年來國內外的研究發現大腸癌組織中PTEN的表達與其生物學行為的關系較密切。張敬偉[14]研究發現大腸癌組織中PTEN蛋白的表達與其分化程度呈正相關，即癌組織的分化程度愈差，其表達水平愈弱；PTEN蛋白表達還與淋巴結轉移、Dukes分期呈負相關。曲洪濱等[15]研究發現大腸癌組織中PTEN蛋白的表達與癌細胞的分化、臨床分期及淋巴結轉移等生物學行為密切相關。本研究結果發現大腸癌組織中PTEN表達與組織分化程度呈正相關，與淋巴結轉移和Dukes分期呈負相關。提示PTEN基因不僅與大腸癌的發生發展關系密切，而且其表達水平與大腸癌的生物學行為具有明顯相關性，參與大腸癌惡化演變、浸潤和轉移過程。

總之，PTEN基因異常改變參與大腸癌的發生與發展過程，其表達水平與大腸癌的生物學行為具有明顯相關性，參與大腸癌惡化演變、浸潤和轉移過程，有望成為大腸癌基因診斷和治療的新靶點。深入探討PTEN基因在大腸癌中的作用機制及其與其他抑癌基因相互性，對闡明和阻斷大腸癌浸潤和轉移的形成具有重要價值。

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[15] 曲洪濱，付曉光，高志安，等. 大腸癌組織中抑癌基因DPC4和PTEN蛋白表達意義的研究[J]. 錦州醫學院學報，2006，27（1）：1-4.

（收稿日期：2013-07-08）