奧拉西坦注射液的含量測定方法學研究

摘 要：為了建立高效液相色譜法（HPLC）檢查奧拉西坦注射液含量的方法。采用氨基鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，以乙腈-水（90：10）為流動性，檢測波長為210nm。證明了專屬性較好，系統適用性符合規定。平均回收率為100.63%，RSD%為0.71%；在0.06mg/ml～0.14mg/ml濃度范圍內呈良好線性關系。重復性、進樣精密度、中間精密度、溶液穩定性等均符合方法學驗證要求。可見本方法操作簡便、快捷，可準確測定奧拉西坦注射液的含量。

關鍵詞：奧拉西坦；含量；HPLC

奧拉西坦（oxiracetam，ORC）是一種合成的羥基氨基丁酸（GABOB）環狀衍生物，又稱奧拉酰胺、羥氧吡醋胺，商品名有neuromet、neupan、健朗星等，由意大利史克比切姆公司于1974年首次合成，并于1987年首先在意大利上市。于1990年在美國及日本上市，是治療老年癡呆的藥物之一。本研究擬采用高效液相色譜法建立奧拉西坦注射液的含量測定方法。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀；奧拉西坦注射液（規格：5ml：1.0g，小試樣品批號：120217，中試樣品批號：120801、120802、120803，哈爾濱譽衡藥業股份有限公司自制）；奧拉西坦注射液市售：批號：100427B，哈爾濱三聯藥業有限公司生產；批號：1109008，廣東世信藥業有限公司生產；奧拉西坦對照品：批號：101032-200901，純度：99.7%，中國藥品生物制品檢定所。依地酸鈣鈉：批號：100306，四川新元制藥有限公司生產。

2 方法與結果

本品的含量測定方法參照奧拉西坦注射液試行標準YBH01692006（哈爾濱三聯藥業有限公司）及原料質量標準中含量測定項下的色譜條件進行。

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：以氨基鍵合硅膠為填充劑。以乙腈：水=90：10為流動相，檢測波長為210nm，理論塔板數按奧拉西坦峰計算，應不低于2500。

2.2 測定法

精密量取本品適量，用流動相稀釋定容制成每1ml含0.1mg的溶液，搖勻，作為供試品溶液。另精密稱取奧拉西坦對照品適量，用流動相溶解并稀釋定容制成每1ml含0.1mg的溶液，作為對照品溶液。分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標法進行計算，即得。

2.3 方法學驗證

2.3.1輔料干擾試驗

按處方比例加流動相制成不含奧拉西坦的輔料空白溶液、供試品溶液、對照品溶液，分別按“2.2”項下含量測定方法進行試驗。結果表明：所用輔料對本含量測定方法沒有干擾。

2.3.2系統適用性試驗

精密量取本品，加流動相稀釋定容制成0.1mg/ml的溶液，作為供試品溶液。共配制6份溶液，分別進樣20μl，注入液相色譜儀。

結果表明：6份系統適用性溶液主峰峰面積的相對標準差RSD%為0.44（<2.0%），主峰保留時間RSD%為0.09%（<1.0%），主峰對稱因子均小于2.0，理論塔板數均大于2500，系統適用性符合規定。

2.3.3 準確度

采用供試品溶液中加入2倍濃度對照品貯備液的方法，分別制備擬定測定濃度80%、100%、120%的三組供試品溶液，每個濃度各制備3份溶液，共9份溶液。

精密量取上述供試品溶液及對照品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算回收率。結果見表1。

結果表明：平均回收率為100.63%，RSD%為0.71%，本方法準確度符合規定。

2.3.4線性關系

精密稱取奧拉西坦對照品，加流動相超聲溶解并稀釋定容，制成濃度為0.2mg/ml的對照品貯備液。

精密量取對照品貯備液，分別加流動相稀釋定容，制成含量測定方法擬定測定濃度60%、80%、100%、120%、140%的溶液，分別測定其峰面積，以溶液濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸分析。

結果表明：線性回歸方程為Y=20749X+38.294，相關系數r=0.9999（>0.999）；Y軸截距=100%響應值×1.82%（<2%）；響應因子RSD%=1.05%（<2%）。當進樣量為20μl時，奧拉西坦在0.06mg/ml～0.14mg/ml濃度范圍內呈良好線性關系。

2.3.5 重復性

照“2.2”項下含量測定方法進行試驗，重復制備6份供試品溶液進行含量測定。

結果表明：重復性試驗6份供試品溶液平均含量為100.23%，RSD%為0.48%（<1%），本方法重復性較好。

2.3.6 進樣精密度

取制成濃度為0.1mg/ml的供試品溶液，連續進樣6次，考察方法進樣精密度。

結果表明：6次測定供試品溶液主峰面積RSD%為0.04%（<2.0%），該檢測方法進樣精密度良好。

2.3.7 中間精密度

按照“2.2”項下含量測定方法進行試驗，共進行6次試驗，變動條件為不同日期、不同分析人員、不同高效液相檢驗設備。

結果表明：設計6次試驗的平均含量為100.57%，RSD%為0.63%，本方法中間精密度符合要求。

2.3.8 溶液穩定性試驗

精密量取本品，加流動相稀釋定容制成濃度為0.1mg/ml的供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12小時取樣，按“2.2”項下含量方法測定。

結果表明：各時間點供試品溶液主峰面積平均值為2868.735，RSD%為0.48%，供試品溶液在室溫條件放置12小時內基本穩定。

2.3.9 三批供試品測定

取三批中試樣品（批號：120801、120802、120803），分別精密量取1ml，置100ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。精密量取該溶液5ml，置100ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密量取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另精密稱取奧拉西坦對照品，加流動相溶解并稀釋定容制成0.1mg/ml的溶液，同法測定。按外標法以峰面積計算，結果見表2

3 結束語

本文按照擬定含量測定方法試驗，經方法學驗證結果表明，該方法專屬性較好、系統適用性符合規定。準確度良好，線性關系、重復性、進樣精密度、中間精密度、溶液穩定性等試驗結果均符合方法學驗證要求。本方法操作簡便、快捷，可準確測定奧拉西坦注射液的含量。