PGC誘導(dǎo)豬超數(shù)排卵的研究

摘要：將健康的8～9月齡的湖北白豬后備母豬分為7組，分別用500、750、1 000、1 250、1 500、1 750 IU孕馬血清促性腺激素（PMSG）處理，用稀釋劑作對(duì)照，以確定合適的使用劑量，再按這一PMSG劑量配合等劑量的人絨毛膜促性腺激素（HCG），結(jié)合氯前列烯醇（PGC）肌注母豬，配種后，手術(shù)沖胚，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果表明，湖北白豬后備母豬使用PMSG超排的合適劑量為1 000 IU；當(dāng)與PGC合用時(shí)，排卵數(shù)提高3倍以上。當(dāng)與PMSG合用時(shí)，PGC對(duì)豬有明顯的誘導(dǎo)超排作用。

關(guān)鍵詞：豬；氯前列烯醇（PGC）；超數(shù)排卵

中圖分類(lèi)號(hào)：S828 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2013）18-4452-02

在畜牧業(yè)生產(chǎn)、克隆研究、轉(zhuǎn)基因豬創(chuàng)建等實(shí)踐中都需要大量的胚胎或卵母細(xì)胞，然而對(duì)于一個(gè)品種來(lái)說(shuō)，自然發(fā)情豬的排卵數(shù)并不多，特別是同細(xì)胞期的胚胎就更少了。因此，眾多研究者在努力探索超排技術(shù)，以提高豬排卵數(shù)，從而獲得更多的胚胎。

現(xiàn)有的研究主要以激素誘導(dǎo)為主，處理豬排卵數(shù)因品種不同而有較大差異，即使是使用同樣的激素，處理程序不同，其效果差別也很大[1，2]。為了能獲得更好的超排效果，本試驗(yàn)用PGC、PMSG、HCG激素按照不同的程序處理湖北白豬后備母豬，配種后回收胚胎，以實(shí)際收獲胚胎的數(shù)據(jù)，分析PGC誘導(dǎo)豬超數(shù)排卵的效果。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥物

孕馬血清促性腺激素（PMSG），山東慶豐牧業(yè)科技有限公司；人絨毛膜促性腺激素（HCG）、氯前列烯醇（PGC），南京龍耀科技實(shí)業(yè)有限公司。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

8～9月齡的湖北白豬后備母豬，配種用公豬為同品種豬。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 預(yù)試驗(yàn) 試驗(yàn)前1個(gè)月，集中試驗(yàn)?zāi)肛i，按每欄5頭圈養(yǎng)，專(zhuān)人飼養(yǎng)，由有3年觀(guān)察發(fā)情經(jīng)驗(yàn)的配種員觀(guān)察，每天8：00、11：00、14：00、17：00時(shí)各觀(guān)察1次，共4次，每頭豬至少要觀(guān)察到一個(gè)正常的情期。

1.3.2 超排處理

1）PMSG的劑量效應(yīng) 試驗(yàn)采用不同劑量處理，以確定PMSG的用量，72 h后注射等劑量的HCG。

2）PGC效應(yīng) 前一個(gè)情期發(fā)情正常，在發(fā)情周期的第15～16天，①注射PMSG，72 h后注射HCG（與PMSG劑量相等）。②肌肉注射氯前列烯醇（PGC）0.2 mg/頭，同時(shí)注射PMSG 1 000 IU/頭，或者PGC和PMSG混合后同時(shí)注射（現(xiàn)用現(xiàn)配）；出現(xiàn)發(fā)情癥狀時(shí)（一般在注射PGC后的72 h左右）注射HCG 1 000 IU/頭。③肌肉注射PGC 0.2 mg/頭。④注射生理鹽水（自然發(fā)情組）。

1.3.3 配種及沖胚 發(fā)情開(kāi)始后12 h，開(kāi)始第一次配種，24 h后進(jìn)行第二次配種。開(kāi)始落情時(shí)，手術(shù)沖胚。在倒置顯微鏡下觀(guān)察胚胎，統(tǒng)計(jì)胚胎數(shù)量。

2 結(jié)果與分析

2.1 PMSG的劑量效應(yīng)

由表1可知，以500～750 IU小劑量PMSG處理時(shí)超排效果不明顯；而達(dá)到1 000 IU以上的用量，才能有效地增加排卵數(shù)；隨著劑量的進(jìn)一步加大，大量卵泡過(guò)度發(fā)育，許多卵泡不能正常排出，形成卵巢囊腫，排出卵數(shù)反而減少。其結(jié)果是：小劑量時(shí)增加劑量排卵數(shù)增多；劑量達(dá)1 250 IU及以上時(shí)[1]排卵數(shù)隨劑量增加反而減少。說(shuō)明湖北白豬后備母豬用PMSG超排時(shí)，最合適的劑量為1 000 IU，這為下一步PGC效應(yīng)試驗(yàn)提供了PMSG基礎(chǔ)使用劑量。

2.2 PGC效應(yīng)

以自然發(fā)情組、PGC組作為基礎(chǔ)，比較只用PMSG+HCG組及加用PGC后的效果。由表2可知，4組都沒(méi)有囊腫現(xiàn)象發(fā)生；組間的頭均排卵數(shù)差異有的達(dá)到顯著水平（P<0.05）；PGC+PMSG+HCG組的頭均排卵數(shù)為自然發(fā)情排卵數(shù)的3倍以上。其中，單獨(dú)使用PGC提高排卵數(shù)的效果不明顯；而PMSG+HCG處理能明顯提高排卵數(shù)。

3 討論

1）PMSG是一種重要的復(fù)合型性腺激素，能夠促進(jìn)卵泡的發(fā)育，而HCG的主要作用是促進(jìn)排卵。本試驗(yàn)中以750 IU劑量處理的排卵數(shù)13.6枚，而魏慶信[2]用500 IU PMSG+HCG處理湖北白豬母豬的排卵數(shù)13.7枚，兩者結(jié)果一致；張德福等[3]以PMSG、HCG處理對(duì)初情期前的楓涇小母豬進(jìn)行超排，平均獲得23.4枚卵子，也得到相似的結(jié)果。

2）大量的研究表明，PGC能促進(jìn)黃體的溶解，利用這一特性，本試驗(yàn)在豬發(fā)情周期的第15～16天，肌肉注射PGC 0.2 mg/頭，同時(shí)注射PMSG 1 000 IU/頭，或者PGC和PMSG混合后同時(shí)注射（現(xiàn)用現(xiàn)混），出現(xiàn)發(fā)情癥狀時(shí)，注射HCG 1 000 IU/頭，排卵數(shù)提高2倍以上?？梢?jiàn)PGC盡管不能起超排作用，但其能促進(jìn)黃體溶解，使卵泡同期化的數(shù)量明顯增多，再在PMSG的作用下，大量同期化的卵泡發(fā)育，以達(dá)到超排的作用。戴琦等[4]對(duì)斷奶的貴州小香豬哺乳母豬用0.1 mg/頭劑量的PGC處理2次，第二次時(shí)同時(shí)肌注PMSG 1 500 IU，72 h后再肌注HCG 500 IU，也取得較好的超排效果；而隋世燕等[5]在貴州香豬發(fā)情周期的第14～17天給豬注射PGC 0.2 mg/頭，1 d后按每千克體重15 IU注射PMSG，72 h后注射等量HCG，平均排卵數(shù)達(dá)（18.8±4.26）枚，其效果優(yōu)于單獨(dú)使用PMSG+HCG超排時(shí)的排卵數(shù)（10.67±0.5）枚。這兩者的結(jié)果也說(shuō)明PGC的超排作用是通過(guò)溶解黃體，使卵泡同步化而實(shí)現(xiàn)的。

3）生理狀態(tài)下一個(gè)排卵點(diǎn)排一個(gè)卵母細(xì)胞，當(dāng)卵巢上排卵點(diǎn)數(shù)量少時(shí)，容易直觀(guān)計(jì)數(shù)，而超排時(shí)卵巢上排卵點(diǎn)比較多，沖出的胚胎或卵母細(xì)胞多于排卵點(diǎn)數(shù)，筆者所在實(shí)驗(yàn)室手術(shù)獲取豬卵的回收率在98%以上[6]，所以本試驗(yàn)以獲得的胚胎數(shù)為基準(zhǔn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。至于卵巢有無(wú)一個(gè)卵泡排出2個(gè)及以上卵母細(xì)胞現(xiàn)象，尚無(wú)相關(guān)報(bào)道。

參考文獻(xiàn)：

[1] 陳乃清，茍德明，路興中，等.豬的超數(shù)排卵[J].畜牧獸醫(yī)雜志，1997，16（1）：1-4.

[2] 魏慶信.母豬超數(shù)排卵的研究[J].湖北畜牧獸醫(yī)，1991（3）：20-21.

[3] 張德福，王 凱，王 英，等.初情期前楓涇小母豬超數(shù)排卵及其胚胎發(fā)育研究[J].上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2000，16（1）：38-41.

[4] 戴 琦，劉 嵐，牟玉蓮，等.小型豬超數(shù)排卵與胚胎回收方法的研究[J].實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)，2007，24（6）：126-128.

[5] 隋世燕，許厚強(qiáng)，莊麗偉，等. 貴州香豬超數(shù)排卵試驗(yàn)[J].畜牧與獸醫(yī)，2009，41（3）：45-47.

[6] 樊俊華，魏慶信，華文君，等.豬早期胚胎在體內(nèi)發(fā)育及分布的研究[J].湖北畜牧獸醫(yī)，1995（1）：4-6.