MAOA-uVNTR多態性與學步期兒童內隱問題行為的關系

汪志鵬，劉亞鵬，張明浩，3，陳平，張光珍，梁宗保，鄧慧華，陸祖宏

(東南大學 1.學習科學研究中心，2.生物科學與醫學工程學院，江蘇 南京 210096;3.魯東大學 心理學院，山東煙臺 264000)

學步期兒童內隱問題行為主要是指兒童的內部心理環境表現，即對新穎環境的抑制、焦慮以及抑郁［1］。目前，研究者主要從環境因素和個體特征因素著手探討了兒童內隱問題行為的發生和發展機制［2-5］。影響兒童內隱問題行為除了環境因素和個體特征因素，還有遺傳因素。其中，調節單胺氧化酶A功能的基因(MAOA基因)影響腦內的神經遞質水平，進而影響人類的心理與行為，例如影響臨床抑郁癥和焦慮癥的形成［6］。Fan等［7］基于 9 項研究 2 045 個患者案例和2 178個對照者進行元分析，結果表明MAOA-uVNTR多態性與重型抑郁癥顯著相關。而學步期兒童年齡較小，生活環境主要集中在家里，受到后天環境影響小，更有利于研究MAOA基因與抑郁、焦慮等內隱問題行為的關系。作者選擇受后天環境影響較少的學步期兒童為研究對象，來探索MAOA-uVNTR多態性與抑郁、焦慮等內隱問題行為的關聯。

1 對象與方法

1.1 研究對象

本研究為大型追蹤研究項目《南京都市寶寶》的一部分，采用電話介紹的方法，隨機招募了2006年6月至2007年3月嬰兒在南京某婦幼保健院出生的418個家庭(包括嬰兒及其父母)，嬰兒性別比例與該婦幼保健院出生嬰兒男女比例匹配(男∶女為1.06∶1)。入組標準如下:2006年6月至2007年3月在南京某婦幼保健院出生的嬰兒及其父母親;嬰兒為第一產;所有的參與者戶口都在南京11個主城區;父母年齡大于18歲。在學步期兒童6個月和24個月時，邀請兒童及其父母來參與本研究。由于搬家、失去聯系、父母因工作忙拒絕參加或者沒有寄回問卷等原因，被試有一定的流失。兒童24個月時，299個兒童(其中男孩152名，女孩147名)的父親和母親均報告了完整的兒童問題行為數據［8］。

1.2 研究程序

在母親懷孕至7至8個月的時候，電話聯系詢問是否參加本研究項目;在嬰兒4至5月齡時，再次聯系父母以確認是否愿意參加本研究項目，同意則簽訂知情同意書。所有數據由經過專門培訓的研究人員采集。嬰兒6個月時，從嬰兒的口腔兩側用口腔拭子刮取口腔脫落細胞，然后把棉簽放入0.9%的生理鹽水溶液中并馬上冷藏，另由母親完成人口統計學問卷;當幼兒24個月時，邀請兒童父親和母親分別獨立完成問題行為問卷。

1.3 研究工具

1.3.1 問題行為問卷 本研究所使用的嬰兒-學步期兒童社會情緒量表(The Infant-Toddler Social and Emotional Assessment，ITSEA)在國外具有良好的信效度［9］。該問卷包含內隱問題行為和外顯問題行為兩個維度;其中內隱問題行為可分為抑郁、焦慮兩個子維度。經修訂后，該量表的中文版具有良好的信效度［4］。本研究部分抽取了ITSEA的內隱問題行為分量表，共9個條目。采用likert式3分量表，從“不符合或者很少”、“有些符合或有時符合”到“非常符合或經常符合”3個等級，分別給予0、1、2分。本研究采用該中文版問卷由父母報告兒童的問題行為。對于父親所報告的問卷，其抑郁、焦慮2個子維度的內部一致性系數分別為0.63和0.66;內隱問題行為的內部一致性系數為0.83。對于母親所報告的問卷，其抑郁、焦慮2個子維度的內部一致性系數分別為0.63和0.62;內隱問題行為的內部一致性系數為0.81。父母報告的問題行為之間具有中等程度的一致性，父親和母親報告的內隱問題行為相關系數為0.52。綜合父母兩者報告的數據可以避免單獨使用母親或父親報告數據而造成的單一方法偏差，也有助于獲得更全面、更準確和可信的數據。因此，本研究將父親和母親報告的問題行為的得分數據加和平均后作為兒童問題行為的得分［10］。

1.3.2 DNA提取和分析 (1)將富集口腔脫落細胞的口腔拭子放入裝有800～1 000 μl生理鹽水的1.5 ml的Eppendorf管中;(2)將拭子置于振蕩器上，振蕩1 min左右，小心取出棉簽，再用適量的生理鹽水沖洗;(3)13 000 r·min-1離心1 min，小心將多余的上清液全部取走，沉淀物即為脫落細胞;(4)在沉淀中加入25～50 μl裂解液［25 mmol·L-1NaOH+0.2 mmol·L-1EDTA(乙二胺四乙酸)］，振蕩10 s;(5)98℃孵育20 min，振蕩后加入等體積 Tris-HCl(40 mmol·L-1，pH 5.0);(6)取上清液;(7)加入無水乙醇，-20℃放置15 min或以上;(8)13 000 r·min-1離心15 min;(9)棄上清，晾干后即得到口腔脫落細胞DNA;(10)加入適量TE溶解DNA(10 mmol·L-1，pH 8.0 Tris-HCl，1 mmol·L-1EDTA)。MAOA-uVNTR 上游引物為5'-ACAGCCTGACCGTGGAGAAG-3'，下游引物5'-GAACGGACGCTCCATTCGGA-3'。變性溫度為95℃，退火溫度為58℃，延伸溫度為72℃。首先，在95℃預變性1 min;95℃30 s，58 ℃40 s，72 ℃45 s，共35 個循環。最后，在72℃延伸10 min。PCR產物用2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測。MAOA基因位于X染色體上，男孩中有2種等位基因型，本研究分別記為3和4;女孩有3種基因型，本研究分別記為3/3純合子、3/4雜合子和 4/4 純合子［11］。

2 結 果

將被試的問題行為問卷與MAOA基因匹配后，共有295個樣本，其中男孩150個，女孩145個;MAOA基因3型男孩75個，4型男孩75個;3/3型女孩33個，3/4型女孩75個，4/4型女孩37個。由于MAOA基因位于X染色體上，只有女性有2個等位基因，因此將女性樣本進行卡方檢驗(χ2=0.393，P=0.822)，結果顯示，女性被試的等位基因分布符合哈迪-溫伯格定律(Hardy-Weinberg Law)［11］。

對24個月時的學步期兒童抑郁、焦慮和內隱問題行為進行獨立樣本t檢驗來考察其問題行為是否存在顯著的性別差異。結果發現，學步期男孩與女孩的抑郁(t=-0.023，df=293，P=0.981)、焦慮(t=-1.048，df=293，P=0.296)以及內隱問題行為(t=-0.518，df=293，P=0.605)差異均無統計學意義(P＞0.05)。再對學步期兒童進行獨立樣本t檢驗，考察MAOA-uVNTR多態性對其抑郁、焦慮和內隱問題行為的影響。結果如表1所示，MAOA-uVNTR多態性對男孩和女孩的抑郁、焦慮、內隱問題行為均沒有產生顯著的影響。

表1 各基因型男女孩的問題行為的平均水平(±s)Tab 1 The problem behaviors level of boys and girls with different genotypes(±s)

表1 各基因型男女孩的問題行為的平均水平(±s)Tab 1 The problem behaviors level of boys and girls with different genotypes(±s)

指 標男孩基因型3 4 t女孩基因型3/3+3/4 4/4t.15 0.980焦慮 0.33±0.33 0.27±0.28 1.230 0.33±0.30 0.38±0.35 -0.849內隱問題行為 0.45±0.27 0.38±0.24 1.1732 0.42±0.26 0.48±0抑郁 0.13±0.15 0.16±0.23 -0.824 0.15±0.20 0.12±0.27 -1.126

3 討 論

在本研究中，不論男女，其抑郁、焦慮、以及內隱問題行為總分都與MAOA-uVNTR多態性沒有顯著的關系。這個結果跟實驗預期不一致。這里主要有3個原因。

第一，前人關于MAOA-uVNTR多態性跟重度抑郁癥和焦慮癥的研究都是對臨床病人進行的［7］，被試對象都經過專家的臨床診斷，而本研究的內隱問題行為的抑郁和焦慮只是一種較輕微的情緒狀態，還沒有達到臨床癥狀的程度，導致MAOA-uVNTR多態性對這種輕微情緒狀態的作用不是很明顯。

第二，基因的表達很可能僅發生在某個特殊的時間點，即MAOA基因的表達在不同的發展階段對抑郁、焦慮等內隱問題行為的影響不同。因而，盡管MAOA-uVNTR在青少年和成人階段與抑郁癥和焦慮癥顯著相關［15］，但是在學步期階段不同基因型之間卻暫時沒有出現個體差異。

第三，本研究只關注MAOA基因的30 bp重復片段多態性對內隱問題行為的影響，但是很有可能MAOA基因的其它多態性和其它與神經遞質調節有關的候選基因(如DRD4、5-HTTLPR多態性)，以及這些基因的相互作用也會影響個體的內隱問題行為。例如，Philibert等［12］發現，在 MAOA 基因啟始密碼子上游1.5 kb處有一段10 bp的可變數目重復序列多態性也能調節MAOA基因的轉錄水平，而且該基因也與兒童的受虐經歷共同作用影響其反社會人格。Bakermans等［13］發現，7個重復片段的 DRD4基因能預測學前兒童的外顯問題行為。很可能這些基因的相互影響使得MAOA-uVNTR多態性在內隱問題行為上的單獨作用并不明顯。關于這些基因如何共同影響個體的內隱問題行為有待于進一步探討。另外，由于MAOA-uVNTR多態性的分布具有種族差異［14］，將此結果跟其它種族的人群進行對比時，需要注意其分布。

最后，盡管MAOA-uVNTR多態性沒有顯著直接影響學步期兒童的內隱問題行為，但遺傳因素與環境因素可能共同影響內隱問題行為的發展變化［12］，而且在不同的發展時期、對于不同類型的問題行為，它們的作用大小不等和影響方式不同，相互之間的交互作用也不一樣。成人的個性和行為在一定程度上受到生活閱歷和社會因素(如文化期望和信仰等)的影響。這些不同的因素在社會化和發展過程中可能在不同程度上影響成年期基因跟社會行為的關系。如Bartels等［15］對數千個被試進行的追蹤研究發現，遺傳和共享環境對問題行為的穩定性有不同程度的影響。根據在早期表達過的基因在下一個時間點仍然有影響的子集的事實，遺傳對外顯問題行為和內隱問題行為的影響分別為43%和60%;而一系列共享環境因素則分別貢獻了47%和34%，非共享環境因素分別貢獻了10%和6%。因而，沒有哪個因素能單獨解釋兒童的問題行為的全部結果。

4 結 語

研究發現，擁有3型MAOA基因的男孩，其抑郁、焦慮以及內隱問題行為的水平與4型男孩的水平差異無統計學意義(P＞0.05);擁有4/4型MAOA基因的女孩，其抑郁、焦慮以及內隱問題行為的水平與3/3+3/4型女孩也沒有顯著差異(P＞0.05)。這表明，MAOA-uVNTR多態性對學步期男孩和女孩的抑郁、焦慮以及內隱問題行為均沒有顯著影響。

致謝 感謝教育部科技創新工程重大項目基金(704025)的資助;非常感謝作為本研究對象的兒童及其父母;還感謝美國賓西法尼亞大學陳欣銀教授編制問題行為問卷。

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