小細胞肺癌及低分化鱗狀細胞癌中Smac、Survivin和PCNA蛋白表達與預后的研究

袁利群 劉百祥 吳 楊 葉劍榮

1.湖南省人民醫院檢驗科，湖南長沙 410005；2.湖南省腫瘤醫院核醫學科，湖南長沙 410006

小細胞肺癌（SCLC）屬于肺癌的一種尚未分化分型的類型，據統計其發生率在肺癌患者中占20%～25%，其惡性程度較高，癌細胞生長和發展速度較快，更易較早的引起淋巴轉移，在各類肺癌的治療中，SCLC的預后相對較差，嚴重影響患者的生命安全[1-2]。肺鱗狀細胞癌主要來源于支氣管上皮細胞，屬于惡性上皮性腫瘤，低分化鱗狀細胞癌（PDSCC）在肺鱗狀細胞癌中分化程度低，多以中央型出現，顯微鏡主要表現出與小細胞癌類似的特征[3-4]。因此，臨床診斷過程中易將SCLC與PDSCC混淆，造成誤診，嚴重影響治療和患者預后，延誤治療時機。本研究選取SCLC和PDSCC患者作為研究對象，旨在探討兩種病癥的分子學差異，為臨床準確診斷提高依據，現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

病例資料選取2008年1月～2010年1月收治和確診的肺癌患者，患者均由3名以上臨床醫生會診以及石蠟病理切片檢驗得出結論。包括SCLC患者38例，診斷標準參照免疫組化指標Syn、ChrA、CK和CD56，其中男32例，女6例，年齡45～72歲，平均（55.0±5.4）歲；PDSCC患者46例，診斷標準參照WHO的相關病理分級標準判定為Ⅲ級分化，其中男38例，女8例，年齡48～74歲，平均（56.2±5.0）歲。肺癌患者臨床分期參照國際抗癌聯盟（UICC）的TNM分期標準，兩組患者分期情況詳見表1。兩組患者的年齡、性別及臨床分期情況比較差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

表1 小細胞肺癌與低分化鱗狀細胞癌患者臨床分期情況（例）

1.2 方法

兩組患者均臨床取病理組織樣本，并分別以常規石蠟包埋制作成病理切片共6份，厚度為4μm，兩組均取切片行免疫組化檢驗。具體方法：石蠟樣本熱抗原修復后以磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗，并以H2O2孵育抑制內源性過氧化物酶的活性。切片加入山羊血清封閉處理，除血清部分，分別滴入鼠抗人Smac、Survivin、PCNA單克隆體，孵育后以PBS沖洗，再加入鏈霉卵白素工作液后PBS沖洗，滴入新鮮DAB溶液行顯色反應，并于鏡下觀察染色適中后用蘇木素復染，行常規脫水、封片、觀察、記錄。

1.3 應用試劑

鼠抗人單克隆體采用美國Cruz公司生產的Smac、北京中山生物技術有限公司生產的Survivin和PCNA。

1.4 觀察指標

所有患者均隨訪2～4年，分別記錄兩組患者蛋白表達情況，并記錄患者2年預后情況。

1.5 診斷標準

Smac以細胞質液呈現棕黃色或棕褐色顆粒狀物質且背景清晰為陽性，并利用5個不同的高倍視野觀察計數，每個視野計數500個細胞，陽性細胞數≤10%計為（-），細胞含量在11%～25%計為（＋），含量在26%～50%計為（＋＋），≥51%計為（＋＋＋），認為（-）（＋）（＋＋）為Smac蛋白低表達，（＋＋＋）為Smac高表達[5-7]。Survivin以細胞質液呈現棕黃色或棕褐色顆粒狀物質且背景清晰為陽性，計算陽性細胞在切片中的百分比，以0%計為0分，1%～25%計為1分，26%～50%計為2分，≥51%計為3分；取染色強度中無色計0分，淡黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分，將兩項計分相加，總分為0計為（-），1～2分計（＋），3～4分計（＋＋），5～6分計（＋＋＋），認為≤2分為陰性，＞2分為陽性[8-9]。PCNA同樣以細胞質液呈現棕黃色或棕褐色顆粒狀物質且背景清晰為陽性，取高倍視野5次觀察切片瘤細胞數量，計算陽性細胞數占總細胞數的百分比，≤25%計為Ⅰ級，26%～50%計為Ⅱ級，51%～75%計為Ⅲ級，≥76%計為Ⅳ級[10]。

1.6 統計學方法

獲得數據分別錄入軟件包SPSS 11.0，并建立數據庫進行數據處理與分析，計數資料采用百分率表示，組間對比采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組Smac蛋白表達

SCLC組患者Smac蛋白低表達率較高，明顯高于PDSCC組，差異有統計學意義（P＜0.05）。

表2 兩組患者Smac蛋白的高、低表達比較[n（%）]

2.2 兩組Survivin蛋白表達

SCLC組患者Survivin蛋白陽性表達率較高，明顯高于PDSCC組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 兩組患者Survivin蛋白的陽性和陰性表達比較[n（%）]

2.3 兩組PCNA蛋白表達

SCLC組患者PCNA蛋白Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ級表達率較低，且明顯低于PDSCC組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表4。

表4 兩組患者PCNA分級表達比較[n（%）]

2.4 預后情況

兩組患者1年生存率差異無統計學意義（P＞0.05），2年生存率PDSCC組明顯低于SCLC組（P＜0.05）。PDSCC組1年和2年生存率差異有統計學意義（P＜0.05），隨著時間的進展患者生存率明顯降低，SCLC組1、2年生存率差異有統計學意義（P＜0.05）。見表5。

表5 兩組患者2年預后情況比較[n（%）]

3 討論

肺癌是臨床多發病，被認為是當今世界惡性腫瘤中誘導人類死亡的主要因素之一[11-12]，由于肺癌的病理類型、誘因、分化程度、分期等受多因素影響，造成臨床的診斷和治療困難重重，由此也使廣大醫療工作者更加確定，明確肺癌種類對于治療和預后具有重要意義[13-14]。肺癌的病理學診斷主要采用病理切片顯微鏡下檢測癌細胞量來進行確診和分期，而SCLC和PDSCC在顯微鏡下的表達相近，易造成臨床診斷的混淆[15-16]，造成誤診從而延誤治療時機。因此深入研究SCLC和PDSCC在臨床的表達特異性對于提高臨床診斷準確率、完善預后具有重要意義。

本組研究的患者均來源于收診的肺癌患者，均有完整的病例檔案，為提高研究的準確性，對于相關病例均采用3位以上醫生會診的方法，并結合臨床的相關診斷標準細致診斷，從而減少誤診率，提高臨床研究的有效性。研究通過免疫組化方法對切片進行處理和鏡下觀察，并對Smac、Survivin和PCNA的表達結果進行比較分析，結果發現，SCLC組患者的Smac蛋白低表達率、Survivin蛋白陽性表達率均明顯高于PDSCC組，差異有統計學意義，提示Smac、Survivin在臨床生化檢驗中具有特異性，可作為區分SCLC和PDSCC的檢驗指標。而PCNA蛋白Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ級表達率明顯低于PCNA組，Ⅲ級表達率明顯高于PCNA組，認為由于其分級表達不具有兩端性，因而尚不能判定PCNA對SCLC和PDSCC的診斷具有特異性，仍需進一步探討。

同時，本組研究還對SCLC和PDSCC患者的2年預后進行了統計比較，結果發現，兩組患者的1年生存率無差異，但2年生存率SCLC組明顯高于PDSCC組，提示隨著時間的進展，PDSCC患者的預后明顯偏差，這也為臨床制訂相對有效的治療方案和深入研究更有效的維持患者生命的治療方法提出了更高的要求。

本研究認為，Smac蛋白低表達、Survivin蛋白陽性可作為SCLC和PDSCC的檢驗和區分指標之一，而PCNA蛋白分級是否具有明確的指導意義仍需進一步的相關研究來認證。當然，本組研究也存在局限性，一是研究樣本數量相對不足，可能對研究結果產生影響；二是即便是通過多名醫生會診來確定劃分兩組疾病的標準，但仍不能保證結果的完全準確，這也可能對研究結果產生影響。目前臨床的相關研究鮮見，應呼吁更多的研究者提供相關的臨床依據，以便于提高臨床對SCLC和PDSCC的診斷準確性。

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