重組肝靶向干擾素工程菌菌株的遺傳穩(wěn)定性研究

盧雪梅， 黃演婷， 汪 潔， 金小寶， 朱家勇

(1. 廣東藥學(xué)院藥用生物活性物質(zhì)研究所,廣州 510006; 2. 廣東省生物活性藥物研究重點實驗室， 廣州 510006)

基因工程菌株的遺傳穩(wěn)定性主要是指工程菌株的質(zhì)粒穩(wěn)定性，即宿主細(xì)胞在繁殖分裂過程中質(zhì)粒丟失的程度[1]。工程菌的遺傳穩(wěn)定性對于大規(guī)模發(fā)酵和產(chǎn)物制備至關(guān)重要，是高水平發(fā)酵的基本條件，研究其穩(wěn)定性對進(jìn)一步的藥物開發(fā)具有指導(dǎo)作用[2]。

干擾素(Interferon，IFN)是慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)抗病毒治療的首選藥物之一[3-7]。其中IFNα2b是FDA批準(zhǔn)的第一個抗HBV藥，但是臨床治療時IFNα2b在體內(nèi)容易擴散降解，未能在肝臟形成有效的抗病毒作用濃度[8]。為了達(dá)到抗病毒效果，藥物劑量常要加大，藥物劑量的加大也加重了其不良反應(yīng)，又容易產(chǎn)生耐藥性HBV，從而影響療效[9]。重組肝靶向干擾素是將來源于瘧原蟲環(huán)子孢子蛋白的肝靶向肽CSP I-plus與IFNα2b進(jìn)行融合，利用CSP I-plus高效特異的肝細(xì)胞靶向性將IFNα2b導(dǎo)向肝臟[10-12]，使其在肝臟富集，從而提高了干擾素治療慢性HBV感染的特異性，減少全身用量，降低毒副反應(yīng)，提高量效比，具有良好的應(yīng)用前景。本實驗室成功克隆了肝靶向干擾素(IFN-CSP)基因，并將其轉(zhuǎn)入原核表達(dá)系統(tǒng)菌株E.coliBL21，構(gòu)建了肝靶向干擾素工程菌株E.coliBL21/pET32a-IFN-CSP，并申請了專利。本文旨在研究該菌株的遺傳穩(wěn)定性，按照國家醫(yī)藥監(jiān)督管理局對基因重組產(chǎn)品的要求，對該菌株在傳代過程中的生長特性、遺傳和表達(dá)穩(wěn)定性等進(jìn)行鑒定。

1 材料和方法

1.1 實驗材料

含IFN-CSP基因的重組工程菌株E.coliBL21/pET32a-IFN-CSP為本實驗室保存。……