21種人乳頭瘤病毒基因亞型分布特征的分析

黃秀珍

大量流行病學及分子生物學研究資料已經表明，反復持續高危型HPV感染是宮頸癌及其癌前病變發生的必要條件[1]。HPV DNA檢測作為細胞學的輔助方法，已經廣泛用于宮頸癌的篩查[2]。HPV DNA的檢測方法眾多，近年來，導流雜交技術逐步應用于臨床，其性能亦獲得廣泛肯定。本研究應用導流雜交技術檢測了1 623例女性患者HPV DNA，并對其HPV基因型分布特征進行分析，報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選取2010年7月-2013年4月在我院進行HPV DNA檢查的1 623例疑診宮頸癌患者作為研究對象。患者年齡為20～80歲，平均(45.3±17.5)歲。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 達安公司生產的DA-7600熒光定量PCR儀，凱普生物科技有限公司生產的HybriMaxTM醫用核酸分子快速雜交儀、HPV DNA抽提試劑盒、HPV DNA擴增分型檢測試劑盒。

1.2.2 標本采集 由醫生用棉拭子先除去宮頸口處多余的分泌物，用凱普專用宮頸刷伸入宮頸內1～2 cm處轉動3～5圈，獲取宮頸口及頸管脫落上皮細胞，將標本毛刷置入到含有細胞保存液的帶蓋樣品管中，4 ℃保存，1周內檢測。

1.2.3 HPV分型檢測 按試劑盒要求依次進行HPV DNA分離提取、HPV DNA PCR擴增、核酸分子快速導流雜交、結果判讀。結果判讀時按芯片上HPV亞型分布的相應著色位點判斷，21種HPV基因亞型分為高危型、低危型，高危型包括HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68等15種，低危型包括HPV6、HPV11、HPV42、HPV43、HPV44，HPV81(CP8304)等6種。

2 結果

2.1 HPV陽性率分析

1 623例女性患者中有798例檢測出HPV感染，HPV陽性率為49.2%。不同年齡段HPV陽性率結果見表1。

表1 不同年齡段HPV陽性率結果分析

2.2 HPV感染患者基因亞型陽性率分析

除HPV43型以外，其余20種亞型均被檢測出。不同HPV基因亞型陽性率見表2。

表2 798例HPV感染患者基因亞型陽性率分析

2.3 HPV感染患者基因型分析

在798例女性HPV感染患者中，單一基因型HPV感染患者620例，多重基因型HPV感染患者178例，見表3。

表3 798例HPV感染患者基因型分析

3 討論

HPV屬于乳頭多瘤空泡病毒科，是一類可以特異性感染人皮膚以及黏膜的雙鏈閉合環狀DNA病毒。通過DNA序列分析發現，HPV至少有200多個基因型，迄今為止已確定基因組全序列的HPV基因型有85種，其中42種與人類疾病有關[3]。不同型別HPV所致的細胞病理變化有所區別，根據這一點可以將HPV基因型分為高危型、低危型兩大類，前者是誘發宮頸癌的重要病原學因素[4]。基于上述原因，對HPV進行準確的基因分型，對HPV感染的治療、宮頸癌的預防、流行病學調查、基因疫苗研制等均有重要的臨床意義。

導流雜交技術是目前臨床上用于HPV基因分型的常用技術之一，與傳統雜交法不同，該技術將探針固定于膜纖維中，目標分子主動導流穿過固定有探針的薄膜并與互補探針相結合形成復合物被固定下來，未被結合固定的分子穿過薄膜后被除去。由于導流雜交技術加速了分子之間的相互作用，從而使雜交時間由傳統雜交法的幾個小時減至幾分鐘，大大縮短了檢測時間。

在本研究中，我們利用導流雜交技術檢測了1623例女性患者的HPV基因型，結果可見798例患者感染了HPV，HPV DNA陽性率為49.2%，由于上述患者均為疑診為宮頸癌的患者，因此本研究的HPV DNA陽性率顯著高于流行病學調查。然后，我們按照年齡對HPV DNA陽性患者進行分組，結果可見30～39歲患者HPV DNA陽性率(54.3%)最高，而20～29歲患者HPV DNA陽性率(27.3%)最低，由此可見年齡與HPV DNA陽性率有一定的關系。此外，通過對798例

HPV DNA陽性患者的基因亞型進行分析，我們可見單一基因型HPV感染患者620例(77.7%)，多重基因型HPV感染患者178例(22.3%)，后者的比例顯著低于其他文獻報道[5-6]，這可能是由于地域差別所致。最后，我們對每種基因亞型HPV DNA陽性率進行分析，結果可見除HPV43型以外，其余20種亞型均被檢測出，且HPV16型陽性率在50%以上，其余依次為HPV52型、HPV58型、HPV18型、HPV33型等，上述基因亞型均為高危型，其原因與本研究的HPV DNA陽性率顯著高于流行病學調查一致，與研究對象的特點有關[7-8]。

由于本院婦科的女性患者來自全省各地，因此本研究結果可以在一定程度上反映本地區的情況。綜上所述，本地區HPV感染患者以單一基因型感染最為常見，主要高危型包括HPV16型、HPV52型、HPV58型等。

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