新型稀釋液用于豬傳染性胃腸炎-流行性腹瀉二聯活疫苗的免疫效果研究

張麗燕 郝偉偉 方鵬飛邱文英 徐 靜 余 謙 向丕元 張 莉 曾 誼

（四川省華派生物制藥有限公司 四川簡陽 641400）

豬傳染性胃腸炎和流行性腹瀉分別是由傳染性胃腸炎病毒和流行性腹瀉病毒引起的豬的一種高度接觸傳染性疾病［1-2］，主要表現為發熱、嘔吐、嚴重脫水和2周齡以內的仔豬死亡率高等癥狀。臨床治療時，多種抗生素、止瀉藥均無明顯療效，給養豬業造成了巨大的經濟損失［3］。疫苗佐劑作為一種非特異性免疫增強劑，可增強機體的免疫應答能力或改變免疫應答的類型，是疫苗發揮免疫作用的重要組成部分，選擇合適的佐劑，對于提高疫苗免疫效果有重要的意義［4］。為進一步提高豬傳染性胃腸炎-流行性腹瀉二聯活疫苗的免疫效果，以仔豬為試驗動物，利用新型稀釋液和PBS分別稀釋疫苗，進行疫苗免疫效果的比較試驗［5-6］，現將結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 豬傳染性胃腸炎-流行性腹瀉二聯活疫苗 由四川省華派生物制藥有限公司研發中心研制。

1.2 稀釋液 13115稀釋液：由四川省華派生物制藥有限公司研發中心研制；PBS：由四川省華派生物制藥有限公司研發中心配制。

1.3 試驗動物 14～21日齡健康仔豬20頭，PED、TGE抗體檢測陰性（中和抗體效價均不高于1:4）。

1.4 抗體的測定 在免疫接種后每隔7 d分別對試驗豬進行采血，5 000 r/min離心15 min分離血清，通過抗體中和試驗分別檢測血清中的PED以及TGE中和抗體效價。

1.5 免疫效果試驗 將20頭14～21日齡健康仔豬編號，隨機分為A、B兩組，每組10頭。A組豬注射疫苗時用13115稀釋液進行稀釋，B組豬注射疫苗時用PBS進行稀釋。

A、B組豬均采用后海穴注射免疫，劑量均為1頭份/頭。在免疫接種后每隔7 d分別對試驗豬進行采血，5 000 r/min離心15 min分離血清，通過抗體中和試驗檢測血清中PED、TGE中和抗體效價。

2 結果與分析

2.1 免疫后中和抗體效價 在免疫接種后第7、14、21、28、35、42 d，分別對 A、B 兩組試驗豬進行采血，5 000 r/min離心15 min分離血清，采用抗體中和試驗分別測定血清中TGE以及PED中和抗體效價，結果見表1。

由表1可知，分別用13115稀釋液和PBS稀釋豬傳染性胃腸炎-流行性腹瀉二聯活疫苗，通過后海穴免疫仔豬后，采用13115稀釋液組TGE和PED中和抗體效價均在21 d達到峰值，且其中和抗體效價是PBS液稀釋組的3倍甚至3倍以上。

表1 中和抗體效價測定結果

2.2 13115組和PBS組抗體消長 根據表1中的數據制作抗體消長曲線圖（見圖1-圖2），從圖中可以清楚的對比出A、B兩組抗體的消長規律。A組用13115稀釋液稀釋TGE-PED二聯活疫苗具有更加明顯的優勢，抗體產生早，中和效價上升速度快，并且達到的效價峰值更高，峰值維持時間更長。

圖1 TGE中和抗體效價曲線圖

圖2 PED中和抗體效價曲線圖

3 討論

1)為了預防由豬傳染性胃腸炎病毒和豬流行性腹瀉病毒引起的仔豬腹瀉，越來越多的養殖場采用豬傳染性胃腸炎-流行性腹瀉二聯活疫苗來對種豬及仔豬進行免疫，這與豬傳染性胃腸炎-流行性腹瀉二聯活疫苗產生的免疫效力密不可分。相比于滅活疫苗，活疫苗具有更加明顯的優勢：接種后在體內有生長繁殖能力，接近于自然感染，可激發機體對病原的持久免疫力，用量較小且免疫持續時間較長。但是近年來在注射疫苗后的豬場仍有部分仔豬發生腹瀉，這與仔豬個體有很大關系，因此，進一步提高該疫苗的免疫效果是當前的重中之重。本試驗通過利用新型13115疫苗稀釋液來稀釋豬傳染性胃腸炎-流行性腹瀉二聯活疫苗，以PBS稀釋疫苗作為對照，得到了較理想的免疫效果。

2)在病毒感染過程中，往往是先通過體液免疫來阻止病毒在機體內傳播，若動物機體內已具有高滴度的抗體，對于預防疾病的傳播就具有非常重大的意義。本試驗用新型佐劑稀釋豬傳染性胃腸炎-流行性腹瀉二聯活疫苗后，與用PBS稀釋相比，新型佐劑組展現出了很大的優勢：7 d內抗體迅速升高，高抗體持續時間長等，對于豬場TGE和PED疫苗免疫有很好的借鑒參考。

3)試驗所使用的佐劑為一種新研制開發的疫苗佐劑，其中含有免疫增強劑、免疫調節劑和免疫緩釋成分，采用特殊工藝加工處理后，使佐劑與抗原具有良好的親和性，保持穩定的特性，刺激機體免疫細胞持續性產生抗體。

4)試驗中采取的免疫方式為后海穴注射，非專業人員對該種注射方法在操作過程中可能會有些許誤差，容易造成因為主觀操作而致使免疫效價不高甚至免疫失敗。而對肌肉注射都很熟悉，因此，在后續試驗設計中，擬進行后海穴及肌肉注射方式的對比試驗。

［1］ 殷震，劉景華.動物病毒學［M］.2版.北京:科學出版社，1997.

［2］ 蔡寶祥.動物傳染病診斷學［M］.南京:江蘇科學技術出版社，1993.

［3］ Saif L J，Wes1ey R D.Transmissib1e gastroenteritis.In:Swine Disease ［M］.7th ed.Ames:Iowa State University Press，1996:362-386.

［4］ 穆楊，周麗梅，侯宏虎，等.三種佐劑對雞體液免疫影響的比較［J］.動物醫學進展，2007，28(10):37-39.

［5］ 趙卓，潘延缽，鄧玉芹，等.用新型納米佐劑配置豬偽狂犬病滅活疫苗的免疫效果研究［J］.黑龍江畜牧獸醫，2010(1):144-146.

［6］ 朱剛，黃炯，符子華，等.口蹄疫A型油佐劑和1eo佐劑弱毒滅活疫苗免疫持續期的研究［J］.中國獸藥雜志，2006，40(8):5-8.