正交試驗法優選固衛合劑的工藝研究

★ 陳璐 馬儒清 陳曉明（1.廣西陸川縣人民醫院 陸川537700；.廣西中醫藥大學第一附屬醫院南寧53003）

固衛合劑為廣西中醫藥大學第一附屬醫院的制劑品種，由黃芪、桂枝、防風、白術、丹皮等14味藥組成，全方具有宣肺散寒、祛風固表的功效。方中黃芪為君藥，黃芪甲苷為黃芪的主要活性成分，其測定方法較多[1-3]。本實驗以黃芪甲苷含量和出膏量為考核指標，采用正交試驗優選固衛合劑的工藝，為固衛合劑制備工藝提供科研依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津DGU-20A5 高效液相色譜儀；SPD-20A 紫外檢測儀；GH-252電子分析天平（廣州市艾安得儀器有限公司）；CD-UPT-II-10L超純水制造系統（成都越純科技有限公司）；KQ3200DE型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

黃芪甲苷對照品（批號110781-200613）購自中國藥品生物制品檢定所。固衛合劑（100 mL/瓶，批號20120508、20120527、20120620）由廣西中醫藥大學第一附屬醫院制劑室制備。乙腈（J.T.Baker）、甲醇（J.T.Baker）均為色譜純，水為超純水，其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 制備固衛合劑的正交試驗設計

采用L9（34）正交表進行正交設計，對提取次數、加水量、提取時間進行考察，以黃芪甲苷含量和出膏量為考察指標進行提取，試驗方案見表1。

表1 固衛合劑提取條件因素和水平

2.2 樣品溶液的制備

按處方量稱取固衛合劑各藥材，牡丹皮、白芷、細辛、荊芥提取芳香水約200 mL，藥渣與余藥混合，按L9（34）試驗列號各條件分別提取，濾過，定容至1 000 mL，放置備用。

2.3 出膏量測定

精密量取各樣品溶液50 mL，置已干燥至恒重的蒸發皿中，水浴上蒸干，在105℃干燥3小時，移至干燥器中，冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量，計算出膏量。結果見表2。

2.4 黃芪甲苷含量測定

色譜條件：色譜柱：WondaSil C18 Superb（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（33：67）；檢測波長203 nm；流速1.0 mL/分，進樣量：20 μL；柱溫：30℃。理論塔板數不低于3 000。

2.5 溶液制備

（1）對照品溶液制備：取黃芪甲苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg黃芪甲苷的對照品溶液；（2）供試品溶液的制備：精密吸取固衛合劑3 mL，用水飽和的正丁醇萃取3 次，每次10 mL，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2 次，每次8 mL，正丁醇提取液回收溶劑至干，殘渣加甲醇溶解并轉移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液。即得。

2.6 標準曲線繪制

精密吸取黃芪甲苷對照品溶液各0.1、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL，置10 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。吸取上述溶液，各進樣20 μL，連續進樣3次。以濃度為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標繪制工作曲線。回歸方程為Y=3342X+359.38，r=0.9998，線性范圍在2.0-40.0 μg/mL呈良好的線性關系。

2.7 樣品測定

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，測定并計算樣品中黃芪甲苷的含量。結果見表2，方差分析見表3。

表2 固衛合劑提取工藝正交試驗安排

表3 固衛合劑提取工藝方差分析

2.8 提取條件

根據各因素的極差值（R）顯示，影響固衛合劑提取效果的因素順序為B＞A＞C，即溶劑用量＞提取次數＞提取時間。其中因素B對實驗結果有顯著性影響（P＜0.05），因素A 與C 對實驗結果影響較小；結合節約能源、時間等因素，最終確定固衛合劑提取最優工藝條件為A2B2C1，即加10 倍量水提取2次，每次1小時。

2.9 驗證試驗

按固衛合劑提取最佳工藝條件提取，制備3 批樣品進行驗證試驗，測定出膏量、黃芪甲苷的含量，結果出膏量為4.3527±0.0274（g/瓶）；黃芪甲苷含量為4.69±0.0917（mg/瓶）。使用最佳驗證工藝參數，出膏量和黃芪甲苷含量接近正交試驗結果的最高值，說明正交試驗結果可靠。

3 討論

固衛合劑為我院常用院內制劑，多年臨床應用于過敏性鼻炎，表陽虛等證效果良好。為保證固衛合劑的質量及應用安全，應對其制劑工藝進行優化。本文通過正交實驗優選出固衛合劑的最佳提取條件為加水10 倍量提取2 次，每次1 小時。通過實驗驗證，該方法可行，可為其制劑工藝及質量標準的建立提供科研依據。

[1]雷曦，秦劍.高效液相色譜法測定復脈定顆粒劑中黃芪甲苷的含量[J].時珍國醫國藥，2002，13（7）：402-403.

[2]郭洪祝，劉曉峰，于侹，等.高效液相色譜法測定胰復康膠囊中黃芪甲苷含量[J].中國中藥雜志，2000，25（10）：609-611.

[3]錢廣生，劉三康，李章萬.HPLC測定黃芪注射液中黃芪甲苷的含量[J].華西藥學雜志，2002，17（1）：41-42.