HPLC法測定新咳靈合劑中黃芩苷的含量

★ 許偉英 張繼全 沈潔 任世禾*（.上海中醫藥大學附屬市中醫院 上海0007；.上海中醫藥大學中藥現代制劑技術教育部工程研究中心 上海003）

新咳靈合劑為我院自制制劑，處方由黃芩、浙貝母、麻黃、夏枯草等中藥組成，具有宣肺止咳的作用，臨床用于感冒后咳嗽，咽癢及慢性支氣管炎等。本制劑長期在臨床使用，療效確切。鑒于該制劑的質量標準尚未建立含量測定項，本文參考《中國藥典》2010 版一部黃芩苷含量測定等有關文獻[1-3]，采用高效液相色譜法對其含量進行測定。該方法簡便，快速，重現性好，可為完善新咳靈合劑質量標準提供依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100 高效液相儀，VWD 檢測器（Agilent公司，美國）；Shiseido Capcell pak MG C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；XS-105 電子分析天平（Sartorius，瑞士）；超純水器（上海賽鴿電子科技有限公司）；T890∕H超聲波清洗器（Elma，德國）。

1.2 試藥

黃芩苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110715-201016 供含測用）；新咳靈合劑（自制，批號：110923、111005、111022）；乙腈為色譜純（Merck，德國），其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適應性實驗

色譜柱：Shiseido Capcell pak MG C18（250mm×4.6mm，5μm），流動相：乙腈-水（96：4），流速：1mL∕分，柱溫：25℃，檢測波長：203nm，進樣量：10μL。理論塔板數按黃芩苷峰計算應不低于2500。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取黃芩苷對照品5.02mg，置50mL 的容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，配制成0.1004mg∕mL的黃芩苷對照品溶液，備用。

2.3 供試品溶液的制備

精密吸取本品1mL，加流動相稀釋，定容至5mL，搖勻，0.45μm微孔濾膜過濾，即得。

2.4 陰性對照溶液的制備

按質量標準中處方比例制成缺黃芩的樣品，制備陰性對照溶液，依法測定。結果表明，新咳靈合劑中其他成分對黃芩中黃芩苷的測定無干擾。

圖1 對照品、供試品色譜圖

2.5 線性關系考察

精密吸取以上黃芩苷對照品溶液1、2、4、6、8、10mL 至10mL 容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，按以上色譜條件測定，以峰面積（y）對進樣量（x），進行線性回歸，得回歸性方程y=2503.7x+3.6958，r=0.9998，線性范圍為：0.1004-1.0040μg，說明在其線性范圍內峰面積與進樣量呈良好的線性關系。結果見表1。

表1 線性關系考察

2.6 精密度試驗

精密吸取濃度為60.2μg∕mL 對照品溶液，按以上色譜條件，連續進樣6次，記錄峰面積A值，RSD=0.31%，結果表明本方法精密度良好。結果見表2。

2.7 重復性試驗

精密吸取同一批號為111005 的供試品溶液6份，按2.3 項下方法處理，進樣10uL，計算新咳靈合劑中黃芩苷的含量，結果RSD 為0.15%，表明供試品溶液重復性良好。結果見表3。

2.8 穩定性試驗

取2.7 項下1 號樣品溶液，照上述色譜條件，于0、2、4、6、8小時分別進樣，測定黃芩苷峰面積A值，計算RSD 為0.39%（n=5），結果表明供試品溶液在8h內基本穩定。結果見表4。

表2 供試品精密度試驗結果

表3 供試品重復性試驗結果

表4 供試品穩定性試驗結果

表5 加樣回收率實驗結果

2.9 加樣回收率試驗

精密稱取0.5mL 已知含量的批號為111005 的供試品9 份，分別加入濃度為0.1004mg∕mL 的對照品適量，按照供試品溶液制備項下方法處理，測定峰面積，計算回收率，結果見表5。

2.10 樣品的含量測定

取3 批新咳靈合劑，分別按照供試品項下方法制備，按上述色譜條件分別進行測定，計算黃芩苷的含量。結果見表6。

表6 樣品含量測定結果

3 結果討論

3.1 供試品處理方法的選擇，由于本品為合劑，直接稀釋后即可測定，試驗中對供試品采用不同稀釋倍數后進樣測定，結果表明供試品在稀釋5 倍后目標成分的峰面積與對照品相當，故選擇供試品處理方法為，取本品1mL，加流動相稀釋定容至5mL。

3.2 流動相選擇，實驗過程中曾用文獻[2-3]報道的黃芩苷的含量測定方法進行實驗，采用甲醇：水：磷酸：三乙胺（60：40：0.2：0.2）和乙腈：0.25%磷酸（24：76）作為流動相，發現其分離效果不是很理想，經多次實驗，確定乙腈：水（96：4）作為流動相。

3.3 本法樣品處理方法簡單，重現性及分離度好，能較好測定新咳靈合劑中黃芩苷的含量，為完善和提高新咳靈合劑質量標準提供依據。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].第1部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：282-283.

[2]錢穎.HPLC 法測定清肺合劑中黃芩苷含量[J].首都醫藥，2011，2：53-54.

[3]胡大強，楊曉軍，傅若秋.HPLC法測定養咽合劑中黃芩苷的含量[J].中國藥師，2012，15（3）：332-334.