HPLC 法測定黃芩不同部位中黃芩苷和野黃芩苷的含量

★ 李曉芳 吳榮 葉喜德 (. 江西省中醫院 南昌330006;. 江西省余干縣人民醫院 余干33500;3.江西中醫學院 南昌330004;4.廣州中醫藥大學 廣州50006)

黃芩(Scutelalria baicalensis Georgi)來源于唇形科植物黃芩的干燥根，為多年生草本，主根粗壯，莖高約30 －120 cm，自基部多分枝。黃芩又被稱為黃金茶、山茶根或者爛心草，是臨床上十分常用的中藥，具有良好的瀉火解毒、止血涼血、安胎除熱的作用。現代研究表明，黃芩富含黃酮類化學成分，其中主要是黃芩苷(baicalin)，黃芩甙藥理作用廣泛，臨床主要用于抗菌、消炎和抗感染［1，7］等。而其莖葉為黃芩藥材的地上部分，主要含有野黃芩苷(scutellarin)，該成分具有清熱解毒，擴張心腦血管，改善體內微循環等作用［2］。為了黃芩資源的合理利用和生藥(或制劑)的質量控制，我們建立了黃芩苷和野黃芩苷的HPLC 分析方法，對黃芩不同部位的主要成分黃芩苷和野黃芩苷的含量進行了測定。

1 材料

HPLC 儀器:LC －20AT 高效液相色譜儀(島津公司，日本)，包括SPD－M20A 二極管陣列檢測器，SIL－20A 自動進樣器，LC －solution 液相色譜工作站。其它儀器:電子分析天平FA2004，上海天平儀器廠;TDL－5 －A 型低速臺式離心機，上海安亭科學儀器廠;QN －99 粉碎機，韓國日進精工有限公司;8002 型恒溫水浴控制器，余姚明偉儀表廠。

甲醇、乙腈為色譜純，乙醇、醋酸、磷酸為分析純，水為自制重蒸水。黃芩苷對照品，購于中國藥品生物制品檢定所(批號:110715 －201016);野黃芩苷對照品，購于北京亞希爾科技有限公司。黃芩根、莖、葉均采購于市場。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 黃芩苷檢測參考藥典方法，并稍作改動:色譜柱為Texra C18 柱(4.6 mm × 200 mm，5 μm)，流動相為甲醇－水(53∶47)，水用磷酸調pH值約為3(磷酸∶水=2∶500，V/V)，流速為0.9 mL/分，檢測波長280 nm，柱溫30℃，進樣量20 μL。

野黃芩苷檢測:色譜柱同黃芩苷檢測，流動相以甲醇－0.2%醋酸溶液進行梯度洗脫，0 －30 分鐘甲醇由40%增加到70%;洗脫流速為0.9 mL/分，檢測波長334 nm，柱溫為30℃，進樣量10 μL。

2.2 對照品溶液制備 黃芩苷:精密稱取在60℃干燥恒重的黃芩苷對照品6.00 mg，加甲醇定容至100 mL 的容量瓶，配成60 μg/mL 濃度的對照品溶液，用時稀釋至60、24、12、6、3 μg/mL 共5 個濃度梯度。

野黃芩苷:精密稱取在P2O5干燥器中干燥24小時的野黃芩苷對照品10.00 mg，加甲醇定容至25 mL 的容量瓶，配成0.4 mg/mL 濃度的對照品溶液。

2.3 供試品溶液制備 黃芩苷提取［3］:分別精密稱取樣品粉末(過60 目篩)1.00 g，加70%乙醇100 mL，回流提取4 小時，提取液過濾，除去殘渣定容至100 mL 容量瓶中，即得供試樣品。

黃芩苷提取［2］:稱取樣品粉末(過60 目篩)1.00 g，精密稱定，置索氏提取器中用石油醚(60 －90)洗脫至無色，取出，晾干，在索氏提取器中用80 mL甲醇連續洗脫至無色，使野黃芩苷提取完全，放冷，濾過，濾液置100 mL 容量瓶中，用少量甲醇分數次洗滌容器，洗液濾入同一容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 標準曲線的制備 黃芩苷對照品溶液進樣20 μL，按上述色譜條件進行測定，對照品色譜圖見圖1(a)。以峰面積積分值(Y)為縱坐標，黃芩苷濃度(X)為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程Y = 0.73×105X －1.5 ×105(r =0.999 8)。結果表明，進樣體積20μL，檢測波長λ280 nm，黃芩苷在1.5 －60 μg/mL 范圍內線性關系良好［4］。

取濃度為0.400 mg/mL 的野黃芩苷對照品溶液5、10、15、20、25 μL 依次進樣，在本文2.1 色譜條件下，測定色譜峰面積，對照品色譜圖見圖1(b)。以對照品質量x (μg)為橫坐標，峰面積Y 為縱坐標，回歸得直線方程為Y =1.36 ×106X －2.07 ×106(r=0.999 5)。

圖1 對照品色譜圖

2.5 精密度試驗 取2.2 項下對照品溶液黃芩苷(6 μg/mL)20 μL 和野黃芩苷(0.4 mg/mL)10 μL，分別連續進樣5 次，結果黃芩苷的平均峰面積為225601 (RSD =0.35%);野黃芩苷的平均峰面積為3043702 (RSD=0.57%)。

2.6 穩定性試驗 取2.3 項下樣品溶液，室溫放置0、4、8、12、16、20、24 小時后測定，結果測得的黃芩苷和野黃芩苷面積基本不變，RSD 分別為0.59%、0.82%，表明樣品溶液在24 小時之內穩定。

2.7 加樣回收率試驗 取已知黃芩苷和野黃芩苷的黃芩莖部樣品100.0 mg 共5 份，各精密加入黃芩苷對照品10.05 mg、野黃芩苷對照品8.05 mg，按樣品溶液制備方法制備，依上述方法測定，結果黃芩苷、野黃芩苷平均回收率分別為100.04%(RSD=0.75%)和99.26%(RSD=1.21%)。

2.8 樣品測定 按2.3 項，黃芩根、莖、葉配制樣品溶液各3 份［5］，依法測定，黃芩苷、野黃芩苷含量及色譜峰出峰時間。結果見表1。

表1 樣品測定結果(含量%，n=3)

3 討論

中藥黃芩的藥用部位為植物黃芩的根，根據HPLC 分析的結果，黃芩根中黃芩苷的含量較高，因此可能是黃芩的主要活性成分。本實驗測定的結果符合2010 年版藥典中規定黃芩苷含量不得少于9.0%的標準，實際含量為10.872%，說明市場購買的黃芩藥材質量尚可［6］。與文獻［2］中黃芩莖、葉所含的野黃芩苷相比(0.641%)，本文所購莖、葉材料中含量更高(分別為2.257%和3.316%)，這可能與產地有關系，不同產地的黃芪藥材中有效成分存在一定的差異［3］。另外，從實驗結果來看，黃芩根、莖和葉不同的藥理作用在化學成分的差異上得到了體現。黃芩莖、葉中黃芩苷的含量較低，主要成分為野黃芩苷，因此莖、葉部位雖然亦可藥用，但不可代替黃芩藥材。

［1］張永欽，周井炎，徐輝碧. 黃芩苷的抗氧化作用［J］.華中理工大學學報，1999，27 (4):110 － 112.

［2］李守拙，李沈明，范書鐸. 黃芩莖葉中野黃芩苷含量測定［J］. 中草藥，2000，31(12):910 － 912.

［3］劉美蘭，楊立新，萬元浩，等.RP －HPLC 法測定7 種藥用黃芩中黃芩苷和漢黃芩苷的含量［J］. 藥物分析雜志，2002，22(2):99－ 102.

［4］張威，白雁，雷敬，等.衛近紅外光譜法測定黃芩提取物中黃芩苷含量［J］.計算機與應用化學，2010，27(12):1 697 －1 699.

［5］聶鑫，羅佳波，呂本，等.高效液相色譜法定量分析黃芩醬粗晶中4 種黃酮類成分［J］. 中國醫院藥學雜志，2007，27(2):191 －193.

［6］方婧，付梅紅，楊洪軍，等.微波協助提取在中藥飲片含量測定中的應用(1)——微波法與藥典法測定黃芩中黃芩苷含量比較研究［J］.中國實驗方劑學，2011，17(21):46 －48.

［7］魏述永.黃芩有效成分提取物對沙門氏菌的抑菌活性比較研究［J］.中國醫藥雜志，2008，6(5):40 －41.