黃連素抑制人卵巢癌SKOV3細胞增殖并誘導凋亡

張春潔，金 平，李 娜

(1.蘭州大學第一臨床醫學院婦產科學，甘肅蘭州730000;2.深圳市婦幼保健院婦產科，廣東深圳518028)

黃連素(berberine)對多種腫瘤有抑制增殖和誘導凋亡的作用［1－2］，但在卵巢癌中的作用尚未見報道。本研究以人卵巢癌SKOV3細胞為研究對象，觀察黃連素對SKOV3細胞增殖抑制作用及凋亡誘導效應。

1 材料與方法

1.1 材料:黃連素(永嘉天然植物開發有限公司)。SKOV3細胞(蘭州大學醫學實驗中心)含10%胎牛血清的RPMI-1640于37℃、5%CO2飽和濕度下培養。實時熒光定量RTPCR試劑(大連寶生物)。

1.2 方法

1.2.1 MTT檢測細胞增殖抑制率:將7×104個細胞接種于96 孔板，貼壁后，0、12.5、25、50、100 和200 μmol/L黃連素處理24、48、72 h，棄上清，每孔加入 MTT(5 g/L)10 μL，繼續孵育4 h，加入酸化10%十二烷基硫酸鈉100μL，次日在570 nm波長處檢測吸光度值。每組4個復孔。抑制率(%)=［1－(加藥組A值/對照組A值)］×100%，實驗重復3次。

1.2.2 PI單染法檢測細胞周期分布:收集細胞，70%冰乙醇固定過夜，PBS洗兩次，PI避光染色30 min，流式細胞儀檢測。

1.2.3 Annexin V和PI雙染法檢測細胞凋亡:收集細胞，加入Annexin V和PI，室溫避光染色10 min，流式細胞儀檢測。

1.2.4 透射電鏡觀察細胞凋亡:收集細胞，2.5%戊二醛固定，1%鋨酸后固定，丙酮脫水，樹脂包埋，超薄切片，透射電鏡下觀察細胞凋亡形態。

1.2.5 實時熒光定量RT-PCR法檢測基因表達:收集細胞，用總RNA提取試劑盒和實時熒光定量RT-PCR反應試劑盒，按照說明書先提取總RNA，再進行RT-PCR反應。引物設計和合成:參考文獻［3］，內參照基因選β-actin，大連寶生物合成。

2 結果

2.1 黃連素抑制細胞增殖活性:黃連素呈藥物濃度和時間依賴性抑制細胞增殖(p＜0.05)(表1)。

表1 黃連素對SKOV3細胞生長的抑制作用Table 1 Inhibitory effect of berberine on the growth of SKOV3 cells，%，n=3)

表1 黃連素對SKOV3細……