JNK信號通路介導高糖誘導的大鼠心肌成纖維細胞增殖

劉麗華，房彩霞，鄧永貴，周 紅

(河北醫科大學第二醫院內分泌科，河北石家莊050000)

心肌纖維化是糖尿病心肌病的主要病理改變之一，是由于心肌成纖維細胞(cardiac fibroblasts，CFs)增殖和細胞外基質過度分泌和堆積的結果，最終導致充血性心力衰竭，這與糖尿病病人心血管疾病的高發病率和高病死率密切相關。目前尚無更有效的藥物來防治糖尿病心肌病。抑制CFs增殖是抑制心肌纖維化的主要作用環節。已經證實高糖能夠誘導CFs增殖［1－2］，但其分子機制尚不十分清楚。已有研究發現C-JUN氨基末端激酶(C-JUN N-terminal kinase，JNK)信號通路在多種細胞生長因子致纖維化過程中起到關鍵性作用，并與其他信號通路存在著交互影響。本研究揭示JNK通路在高糖誘導CFs增殖中的作用，為糖尿病心肌病提供新的治療策略。

1 材料與方法

1.1 材料

清潔級出生3d的Sprague-Dawley乳鼠，雌雄不限，由河北醫科大學實驗動物中心提供，許可證號:SCXK(冀)2008-1-003。JNK抑制劑SP600125(德國默克公司);DMEM培養基(含5.5 mmol/L葡萄糖和25 mmol/L葡萄糖)和新生胎牛血清(Gibco公司);胰蛋白酶和MTT(Sigma公司);膠原酶Ⅱ和Trizol(Invitrogen公司);Taq Master Mixe和M-MLV反轉錄酶(Promega公司);小鼠抗大鼠波形蛋白抗體，纖維素抗體和平滑肌肌動蛋白抗體工作液(北京中衫生物技術公司);兔抗大鼠磷酸化JNK(p-JNK，183/Y185)抗體(Cell Signaling公司);兔抗大鼠JNK1/2(T178)抗體(Bioworld公司);兔抗大鼠β-actin和增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)抗體(Santa Cruz公司)。C-JUN引物由上海生工生物工程技術服務有限公司合成。

1.2 方法

1.2.1 細胞的培養:取新出生3 d的Sprague-Dawley大鼠心室組織，用預冷的 D-Hanks液洗凈殘血，將心室剪碎，大約1 mm×1 mm×1 mm組織塊，洗去血細胞。用0.125%胰蛋白酶+0.04%膠原蛋白酶Ⅱ連續消化成單細胞懸液，整個消化過程在37℃恒溫條件下進行。……