P38 MAPK信號通路參與BMP-13誘導C3H10T1/2細胞向心肌樣細胞分化

孫文靜，陳 沅，張 芬，陳 露，陳妙月，耿雪靜，朱高慧

(重慶醫科大學附屬兒童醫院1.兒童發育疾病研究教育部重點實驗室;2.心血管內科，重慶400014)

心血管疾病一直是嚴重威脅人類健康的重大疾病之一。干細胞移植可以促進心肌細胞再生，實現心臟壞死區細胞重建，恢復心肌功能。骨形態發生蛋白(bone morphogenetic proteins，BMPs)屬于轉化生長因子TGF-β家族，最初是作為成骨因子，在后期研究中發現BMPs是心臟發育的關鍵因子［1］，可以誘導干細胞向心肌分化。本實驗前期研究發現BMP-13能使具有多向分化潛能的C3H10T1/2細胞分化為心肌樣細胞并改善心肌梗死大鼠的心功能［2－3］，但誘導分化的作用機制仍不明了。有研究表明，BMP2、4 可以激活 P38 MAPK［4－5］，BMP-13 作為BMPs亞型之一，在誘導干細胞分化為心肌樣細胞過程中，是否也存在P38 MAPK的激活，目前尚未有報道。本研究將檢測BMP-13是否能夠激活P38 MAPK信號通路，進而通過RNA干擾技術和P38特異性抑制劑SB203580分別阻斷P38 MAPK信號通路后，探討P38 MAPK在調控C3H10T1/2細胞成心肌樣分化過程中的作用。通過對分化機制的研究為能夠更有效地誘導干細胞向心肌樣細胞分化提供一定實驗基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

C3H10T1/2細胞和BMP-13腺病毒(Ad-BMP-13)、空載腺病毒(Ad-GFP)、P38 MAPK干擾腺病毒(Ad-si-P38)和干擾對照腺病毒(Ad-si-NC)(由美國芝加哥大學醫學分子腫瘤實驗室惠贈)。DMEM培養基和優質胎牛血清(Hyclone公司);RNA提取試劑盒(BioTake公司)，反轉錄試劑盒(TaKaRa公司)，PCR引物序列由鼎安公司合成;全蛋白提取試劑盒和ECL檢測液(KeyGEN公司)，兔抗鼠cTnT抗體和兔抗鼠Cx43抗體(Abcam公司)，鼠抗鼠磷酸化P38 MAPK(p-P38 MAPK)抗體和兔抗鼠總P38 MAPK(t-P38 MAPK)抗體(CST公司);P38特異性抑制劑SB203580(Sigma公司)。……